蒲苓盆炎康顆粒丹參酮ⅡA的含量測(cè)定方法研究

全金棟，王言玉

(山東翔宇健康制藥有限公司，山東 臨沂 276023)

慢性盆腔炎為婦科常見病、多發(fā)病，病情頑固，容易反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重危害廣大婦女的健康。我公司借助傳統(tǒng)中醫(yī)理論，經(jīng)多年研究和理論探索，成功研制了蒲苓盆炎康顆粒。作為純中藥制劑，蒲苓盆炎康顆粒為中醫(yī)治療慢性盆腔炎提供了一個(gè)新的、較為理想的治療藥物。該藥為中藥復(fù)方制劑，其組方由土茯苓、丹參、夏枯草、蒲公英、車前子、粉萆薢、杜仲、三七、川芎等組成，其中丹參、川芎、杜仲、三七和車前子中含有脂溶性的成分。為了充分發(fā)揮藥物的作用，在制備工藝上先用乙醇對(duì)上述五種藥材進(jìn)行處理;然后將醇提取后的藥渣與其余的藥材合并，用水煎煮。這兩種工藝雖然可以更有效地提取有效成分，但對(duì)如何測(cè)定其有效成分的含量，造成了一定影響，為此，我們參考大量有關(guān)文獻(xiàn)，通過多次測(cè)定試驗(yàn)，建立了測(cè)定該品種含量的有效方法，為有效控制蒲苓盆炎康顆粒中有效成分的含量提供了技術(shù)保障。

1 儀器與樣品

1.1 儀器 高效液相色譜儀，島津，SPD－10Avp紫外檢測(cè)器，LC－10Atvp。

1.2 試藥 蒲苓盆炎康顆粒(批號(hào):100101，100102，100103;生產(chǎn)廠家:山東翔宇健康制藥有限公司)，丹參酮ⅡA(批號(hào)110766－200518，中國(guó)藥品生物制品檢定所)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠;以甲醇－水(75∶25)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm。理論板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取丹參酮ⅡA對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含丹參酮ⅡA 16 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末(過三號(hào)篩)約0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 測(cè)定 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2010版一部附錄Ⅵ D)［1］測(cè)定，即得。

2.5 空白實(shí)驗(yàn) 以丹參酮ⅡA對(duì)照品、含丹參樣品及缺丹參的空白樣品分別進(jìn)柱，缺丹參的空白樣品在丹參酮ⅡA位置上無干擾峰，見圖1，2。

圖1 丹參酮ⅡA對(duì)照品HPLC圖譜

圖2 含丹參樣品HPLC圖譜

圖3 缺丹參空白樣品HPLC圖譜

2.6 線性關(guān)系考察 分別精密吸取含丹參酮ⅡA 0.02988 μg，0.05976 μg，0.08964 μg，0.1195 μg，0.1494 μg，0.1793 μg，0.2092 μg，0.2390 μg 的對(duì)照品溶液注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。結(jié)果以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:Y=342939X－756，r=0.9997。結(jié)果表明丹參酮ⅡA 在 0.02988 ～0.2390 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，結(jié)果見表1。

表1 丹參酮Ⅱa線性關(guān)系考察

2.7 精密度和重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果RSD=1.0%，表明本方法精密度良好。

取同一批號(hào)樣品，精密稱樣5份，同法測(cè)定，結(jié)果RSD=1.3%，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，放置在一定條件(溫度在25±2℃、相對(duì)濕度60% ±10%)下，每隔一段時(shí)間取樣測(cè)定供試品溶液含量，結(jié)果RSD=1.1%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn) 樣品研細(xì)，取約0.3 g(含丹參酮ⅡA 0.1363 mg·g－1)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，加入對(duì)照品0.0747 mg(丹參酮ⅡA甲醇溶液0.01494 mg·mL－1，精密吸取5 mL，加至樣品溶液中)，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。結(jié)果如表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.10 樣品含量測(cè)定 對(duì)3批樣品及樣品1分別測(cè)定丹參酮ⅡA，結(jié)果如表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

蒲苓盆炎康顆粒由9味藥材組成，其中土茯苓為君藥，丹參為臣藥，由于土茯苓的有效成分不明確，因此選擇臣藥丹參中丹參酮ⅡA為含量測(cè)定指標(biāo)。藥典中丹參藥材的丹參酮ⅡA的測(cè)定是用 HPLC法，流動(dòng)相是用甲醇 －水(75∶25)，因此本研究參照藥典方法采用HPLC法測(cè)定蒲苓盆炎康顆粒中丹參酮ⅡA的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該法操作簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)、線性、精密度、重現(xiàn)性好，回收率、穩(wěn)定性良好，測(cè)定值基本無明顯的改變，由此可以確定，用HPLC法測(cè)定蒲苓盆炎康顆粒中的丹參酮ⅡA含量，不失為控制該制劑質(zhì)量的有效方法。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:70－71.