平行試驗法優選黃芪總黃酮提取條件

張軍武 趙 琦

黃芪為常用補氣中藥，2010年版中國藥典規定黃芪為豆科植物蒙古黃芪［Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao］或膜莢黃芪［Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.］的干燥根［1］。黃芪的化學成分復雜［2～4］，包括皂苷類，多糖類，黃酮類以及各種氨基酸、微量元素、生物堿類、有機酸類等。黃酮類化合物是天然抗氧化劑家族中的重要成員之一，它具有很強的清除自由基和抑制脂質過氧化特性。研究顯示黃酮類化合物可抑制動脈粥樣硬化形成［5］，但是黃芪中黃酮類化合物遇熱不穩定，提取溫度不宜太高［6］，而且實際生產中以加熱回流為主要提取方法。因此，本文采用平行試驗法優選回流提取黃芪總黃酮的最佳溫度，以期為大生產提供參考。

材料與方法

1.儀器與試藥:(1)儀器:UV1102型紫外/可見分光光度計(上海天美科學儀器有限公司生產);FA1004N電子分析天平(上海天平廠生產);ZK－82A型真空干燥箱(上海實驗儀器廠生產);GKC－11－CR2型電熱恒溫水浴鍋(上海金橋科析儀器廠生產)。(2)試藥:2年生黃芪采集于陜西省旬邑縣黃芪GAP基地，經鑒定為蒙古黃芪［Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao］;蘆丁對照品購自中國藥品生物制品檢定所(批號:0080－9705);亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、乙醇等所用試劑均為分析純。

2.實驗方法:(1)樣品制備:稱取黃芪粗粉10g，共15份，分別置500ml燒瓶中，加入95%乙醇200ml，搖勻，加熱回流1h，放冷至室溫，濾過，濾液濃縮至適量，將得到的濃縮液定容至250ml容量瓶中，備用。(2)方法學考察:以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法測定總黃酮的含量。①對照品溶液的制備:精密稱取在105～110℃干燥至恒重的蘆丁對照品10.5mg，加95%乙醇定容于25ml容量瓶中，得到濃度為0.42mg/ml的溶液作為對照品溶液;②標準曲線的繪制:精密吸取對照品溶液 0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml;分別置于 10ml容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液0.3ml，放置6min;再加10%硝酸鋁溶液0.3ml，放置6min;最后加入4%氫氧化鈉溶液4ml;分別加95%乙醇至刻度，搖勻，放置15min，置比色皿中，在510nm波長處測定。以吸光度A為縱坐標，總黃酮含量(μg/ml)為橫坐標計算回歸方程為:A=0.008940476C+0.3225，相關系數 r=0.9983，線性范圍:8.4 ～42.0μg/ml;③供試品溶液的制備:精密吸取上述平行試驗的樣品溶液1ml，置10ml容量瓶中，照標準曲線下方法操作，測定吸收度，由回歸方程求出稀釋液中總黃酮濃度;④精密度試驗:精密吸取供試品溶液，連續測定5次，記錄吸光度，結果RSD為1.74%，表明精密度良好;⑤穩定性試驗:精密吸取供試品溶液，分別于10、20、30、40min測定1次，記錄吸光度，結果 RSD為1.33%，表明在40min內穩定性良好;⑥重復性試驗:精密吸取樣品溶液1ml，共5份，分別按供試品溶液制備方法操作，按上述色譜條件測定吸光度并計算含量，結果RSD為1.13%，表明本方法重復性良好;⑦加樣回收率試驗:精密吸取樣品溶液1ml，共5份，分別加適量蘆丁對照品，按供試品溶液制備方法進行操作，測定含量，計算回收率。結果表明:回收率在95% ～100%之間，RSD為1.18%，加樣回收良好。

結 果

測定結果見表1。由表1測定結果可以看出，60℃和70℃下總黃酮含量比較低，80℃時含量最高，當提取溫度高于90℃以上時總黃酮含量有所下降。所以選擇80℃提取比較合適。

表1 黃芪總黃酮測定結果

討 論

從中藥中提取天然活性成分的方法很多，但是以溶劑提取法最為常用。溶劑提取法是選擇適當溶劑將中藥中的化學成分提取出來，如果藥材沒有特殊性質，則一般選擇加熱回流提取的方法，以便提高提取效率。對于大部分活性成分來說，提取溫度的升高意味著活性的變化或者消失，因此，回流提取必須控制加熱溫度，以便最大限度地保護活性成分，發揮中藥制劑的最大療效。

黃芪總黃酮是黃芪抗氧化、清除自由基的主要活性成分，也是黃芪的主要活性成分;另外，在大生產過程中黃芪的傳統提取方法是加熱回流，提取溫度很容易升高至100℃;因此在黃芪總黃酮的提取過程中應注意提取溫度的控制，以免總黃酮的生物活性受到破壞。

通過查閱相關文獻［6，7］，結合生產安全并兼顧提取效率，設計60～100℃ 5個提取溫度，采用平行試驗法優選出乙醇回流提取黃芪總黃酮的最佳溫度。試驗證明:乙醇回流提取黃芪總黃酮的最佳溫度為80℃。此溫度較為符合大生產實際情況，故可以進行擴大試驗并推廣，從而為有效的提取黃芪總黃酮提供科學依據。

1 中華人民共和國藥典委員會.中國藥典［S］.1部.北京:中國醫藥科技出版社，2010:283－284

2 齊宗韶.黃芪化學成分的研究概況［J］.中草藥，1987，18(5):41

3 吳繼洲.內蒙黃芪化學成分的研究(Ⅰ)［J］.中草藥，1982，13(8):3

4 王惠康.內蒙黃芪化學成分的研究(Ⅱ)［J］.中草藥，1989，20(5):6

5 汪德清，丁保國，Neil TG，等.黃芪總黃酮對動脈粥樣硬化早期形成的影響［J］.中國藥理學通報，2003，19(6):637 －640

6 趙海燕，沙瀛，陳洋東.黃芪中皂甙·黃酮和多糖綜合利用的工藝研究［J］.安徽農業科學，2009，30(5):2051 －2053

7 孔繁晟，賁永光，孫愛群，等.超聲法與連續回流法提取黃芪總黃酮的工藝對比研究［J］.中國藥房，2010，21(19):1752－1754