灰氈毛忍冬芽的毒理學評價

李金玲，張 輝，陳 剛，王 琴，徐曉玉，*

(1.西南大學藥學院，重慶400716;2.重慶九龍坡區第五人民醫院，重慶401329;3.重慶工商大學藥物研究中心，重慶400067)

灰氈毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand-Mazz)俗稱大花忍冬，是中國藥典規定的山銀花項下的品種之一。灰氈毛忍冬的花蕾具有清熱解毒、涼散風熱的功效，現代藥理研究發現其有抗炎、抗菌、抗病毒、保肝、免疫調節、降血脂等作用［1］。灰氈毛忍冬的藤［2-3］也具有藥用價值，有祛風除濕，通絡止痛的功效，用于治療肢體關節風濕痹痛。重慶灰氈毛忍冬產量大、發展快［4］，為當地山區農民帶來了良好的經濟效益。但是，目前國內外對灰氈毛忍冬的利用［5］主要集中在花、莖、葉、藤上，對于灰氈毛忍冬芽的利用還未見報道。課題組為了進一步拓展灰氈毛忍冬的藥用價值，充分利用藥材資源，增加藥農的收入，對灰氈毛忍冬芽進行了系列研究，擬開發成為新的藥用部位或者茶葉原料，相關論文已有發表［6］。本文按照2005年頒布的《新藥(中藥)研究指導原則》［7-9］對灰氈毛忍冬芽進行了急性毒性、亞急性毒性等系列研究，旨在對灰氈毛忍冬芽的毒理學做出初步的客觀評價。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

灰氈毛忍冬芽 采自重慶秀山壩芒基地，批號:110510;本研究所用的各種血液生理生化試劑盒 南京建成生物工程研究所;灌胃用的灰氈毛忍冬芽提取物供試液 按干燥灰氈毛忍冬芽(g)∶蒸餾水(mL)=1∶10煮沸提取3次，每次45min，合并提取液并真空加熱干燥，配制1000mL濃度為1500、750、375mg·mL-1的灰氈毛忍冬芽提取物供試液，4℃保存備用;SPF級昆明種小鼠 體重18～22g;SPF級 SD大鼠 體重180～220g;均為雄性，購于重慶醫科大學實驗動物中心，生產許可證號:SCXK(渝)2007-0001，飼養于西南大學藥學院SPF級實驗動物中心，使用許可證號:SCXK(渝)2009-0002。

Eos-Bravo自動生化分析儀 意大利HOSPITEX DIAGNOSTICS s.r.l公司;CM1900冰凍切片機德國徠卡儀器有限公司;BI-2000醫學圖像分析系統 成都泰盟科技有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 急性毒性實驗

表1 灰氈毛忍冬芽對小鼠體重的影響±s，n=10)Table 1The effect of Lonicera bud on weight of mice(±s，n=10)

表1 灰氈毛忍冬芽對小鼠體重的影響±s，n=10)Table 1The effect of Lonicera bud on weight of mice(±s，n=10)

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表2 灰氈毛忍冬芽對大鼠體重及體重增長的影響(單位:g;±s，n=10)Table 2Effect of Lonicera bud on weight and weight gain of rats(unit:g;±s，n=10)

表2 灰氈毛忍冬芽對大鼠體重及體重增長的影響(單位:g;±s，n=10)Table 2Effect of Lonicera bud on weight and weight gain of rats(unit:g;±s，n=10)

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1.2.1.1 預實驗 取昆明種小鼠16只，雌雄各半，分成4組，每組2只，分別按1、5、15g·kg-1(最大耐受量)給藥，若在某個劑量上給藥后動物死亡，則從低一級劑量(例如5g·kg-1)開始給藥，每組增加劑量5g·kg-1，直到出現動物死亡為止［10-11］，得到 Dmax，對所有死亡動物進行尸檢。

1.2.1.2 正式實驗 選用健康、成熟，體重18～22gKM小鼠20只，雌雄各半。按實驗的最大給藥劑量給藥一次，連續觀察14d，并稱量小鼠給藥前、給藥后第3、7、14d的體重。小鼠的一般癥狀(皮膚、毛發，行為活動，呼吸，心跳，眼淚、瞳孔和飲食等)和死亡情況，對死亡動物進行尸檢并記錄死亡原因，必要時做病理檢查。

1.2.2 亞急性毒性實驗 SD大鼠，180～220g，雌雄各半，80只隨機分為4組，每組20只，對照組給予純水，忍冬芽提取物三個劑量組，按高中低劑量分別給1500、750、375mg·mL-1濃度的供試藥液 2mL，折合生藥量為15、7.5、3.75g·kg-1。各組灌胃給藥，每天一次，給藥前4h，給藥后2h動物禁食不禁水，其他時間自由飲食。實驗期間觀察動物的一般癥狀，每周稱重。喂養30d后，股動脈取血做生化指標及血常規測定，對腎、肝、脾等稱重，并做相應的病理學檢查［12-13］。觀察的指標主要有:

a.一般情況觀察:記錄動物的一般癥狀(皮膚、毛發，行為活動，呼吸，心跳，瞳孔、眼淚和飲食等)、死亡情況和每周體重等。

b.血液學指標:血紅蛋白、血小板數、紅細胞計數、白細胞計數。

c.血液生化指標:谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、血糖(GLU)、白蛋白(ALB)、肌酐(CR)、甘油三酯(TG)、總蛋白(TP)和總膽固醇(TCH)。

d.病理檢查:臟體比(臟器系數)、大體觀察及病理組織檢查。

1.2.3 數據處理 用SPSS 18.0對相關數據進行t檢驗或單因素方差分析。

2 結果與分析

2.1 急性毒性實驗結果

2.1.1 預實驗結果 當劑量達到15g·kg-1時小鼠仍未死亡，因此未能測出LD50，初步確定了最大耐受量為 15g·kg-1。

2.1.2 正式實驗結果 給藥2h內，小鼠活動減少、食量減少，12h后癥狀基本消失，24h后癥狀完全消失。13d實驗恢復期間，20只小鼠無死亡，其毛色、活動和飲食均正常。在給藥前，給藥后3d、7d、14d動物稱重(表1)，顯示體重隨周齡而增長，且雌雄各組間無顯著性差異。確定了灰氈毛忍冬芽對小鼠經口的最大給藥量為15g·kg-1·BW，說明灰氈毛忍冬芽對小鼠正常生長影響小，安全性高。

2.2 亞急性毒性實驗結果

2.2.1 一般體征觀察 實驗期間各組的雌、雄大鼠均正常生長，各組動物皮毛光滑、毛色正常，無死亡［14-16］。給藥30d后，各劑量組雌、雄大鼠的體重增長情況良好，雄性大鼠體重增長都略高于雌性大鼠，但各劑量組的體重和體重增重與純水組相比無顯著性差異(p＞0.05)，大鼠體重及體重增長變化值見表2。

2.2.2 血液學指標 見表3。大鼠給藥30d后，在血液學各項指標中，各劑量組與純水組比較無顯著性差異(p＞0.05)，均在正常值范圍內。

2.2.3 血液生化指標 見表4。大鼠給藥30d后，各劑量組的血液生化指標與純水組比較無顯著性差異性(p＞0.05)，均在正常值范圍內。

2.2.4 病理組織檢查 見表5。解剖后經切片、染色、鏡檢檢查，大體標本未發現明顯病變。取各臟器稱重比較知各組臟器系數與純水組相比差異無顯著性(p＞0.05。

3 討論

通過急性毒性實驗確定了灰氈毛忍冬芽對KM小鼠的最大給藥量為15g·kg-1·BW，據此可以得出結論，灰氈毛忍冬芽的急性毒性很小，在常規劑量下服用是安全可靠的。從急性毒性來看，飲用灰氈毛忍冬芽具有很高的安全性，但是任何事物都有一個合理的使用范圍，超過這個限量就不可能發揮好的作用，據研究大鼠在攝入過高量的蒸餾水也會致死，因此科學地飲用灰氈毛忍冬芽則是飲茶健身的必然要求。

表3 灰氈毛忍冬芽灌胃給藥30天對大鼠血液的影響(±s，n=10)Table 3Effects of Lonicera bud on rats’blood by ig in 30 days(±s，n=10)

表3 灰氈毛忍冬芽灌胃給藥30天對大鼠血液的影響(±s，n=10)Table 3Effects of Lonicera bud on rats’blood by ig in 30 days(±s，n=10)

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表4 灰氈毛忍冬芽灌胃給藥30天對大鼠血液生化指標的影響(±s，n=7)Table 4Effect of Lonicera bud on biochemical indexes of rat blood by ig in 30 days(±s，n=7)

表4 灰氈毛忍冬芽灌胃給藥30天對大鼠血液生化指標的影響(±s，n=7)Table 4Effect of Lonicera bud on biochemical indexes of rat blood by ig in 30 days(±s，n=7)

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表5 灰氈毛忍冬芽灌胃給藥30天對大鼠臟器系數的影響(g/100g，±s，n=10)Table 5Effect of Lonicera bud on organ index of rat by ig in 30 days(g/100g，±s，n=10)

表5 灰氈毛忍冬芽灌胃給藥30天對大鼠臟器系數的影響(g/100g，±s，n=10)Table 5Effect of Lonicera bud on organ index of rat by ig in 30 days(g/100g，±s，n=10)

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通過慢性毒性實驗得到灰氈毛忍冬芽對SD大鼠生長發育無不良影響，血常規、血液生化指標和臟器指數均在正常值范圍內，皆無潛在的毒性作用［17-18］，病理學檢查未見明顯病變。表明灰氈毛忍冬芽無明顯毒性，可為其應用推廣的安全性提供相關實驗依據。

綜上所述，灰氈毛忍冬芽具有豐富的營養價值，經過一定的衛生處理和加工后，對人體健康不會造成危害，可作為新食品資源進行開發利用。

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