HPLC法測定楤木皂苷膠囊中齊墩果酸含量＊

王 超 肖 茜 吳 寅 李玉文 賈 娜 趙 超 奚苗苗 文愛東

第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院藥劑科（西安 710032）

楤木皂苷膠囊是本院的院內(nèi)制劑，其主要成分為從太白楤木藥材中提取的楤木皂苷提取物，經(jīng)實驗及臨床驗證具有較好的降脂降糖效果，臨床主要用于糖尿病的治療。本實驗擬對楤木皂苷膠囊進行質(zhì)量研究，為控制楤木皂苷膠囊的質(zhì)量提供科學實驗依據(jù)，為后續(xù)開發(fā)應用提供質(zhì)量保證。本文成功建立了以高效液相色譜法測定楤木皂苷膠囊中齊墩果酸含量的方法。經(jīng)方法學驗證，所建立的方法具有良好的精密度和回收率，現(xiàn)報道如下。

1 儀 器 高效液相色譜儀Shimaduz LC－10Avp（日本島津）；紫外分光光度計Spectronic Genesys 2（美國）。

1.1 試劑 楤木皂苷膠囊（第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院藥劑科制備）、齊墩果酸準品（天津一方科技有限公司 含量98%）、甲醇（色譜純，天津彪仕奇科技發(fā)展有限公司，09099501）、磷酸（分析純）。

1.2 色譜條件 分析柱Diamonsil C18（2）（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇－0.1%磷酸水（80：20）；檢測波長210nm；流速：1.0mL／min；室溫；進樣量20μL。在此色譜條件下，主峰的理論塔板數(shù)為2403。

2 溶液的制備 2.1 對照品溶液的制備 精密稱定齊墩果酸對照品2.5mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密吸取2mL，置10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。（每1mL含齊墩果酸50μg）。

2.2 供試品溶液的制備 取楤木皂苷膠囊內(nèi)容物約0.25g，加20mL 10%稀硫酸，于70℃下水浴回流4h，提取液用氯仿60mL分3次萃取，合并氯仿層萃取液，用水洗滌2次，每次15mL，棄水液，蒸干，加甲醇溶解并定容到10mL，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 空白對照的制備 精密稱取按處方量制備的不含各成分的空白輔料0.25g，按樣品溶液的制方法操作，制成空白對照溶液。

2.4 檢測波長的確定 對齊墩果酸溶液在200～400nm進行掃描，在210nm處有最大吸收，故選擇210nm為測定波長。

3 HPLC法專一性考察 分別將對照品溶液、空白輔料溶液和樣品溶液20μL注入高效液相色譜儀，在210nm處測定吸收峰面積，保留時間為17.2min，其對照品，空白基質(zhì)及樣品的HPLC圖譜見附圖。

附圖 齊墩果酸對照品（A）、楤木皂苷膠囊供試品（B）、楤木皂苷膠囊陰性對照品（C）（17.2min：齊墩果酸的峰）

4 標準曲線的制備 精密吸取上述對照品溶液，分別用甲醇制成含量為 27.5μg／mL、41.25μg／mL、55μg／mL、82.5μg／mL、110μg／mL的齊墩果酸標準溶液，在上述色譜條件下進行分析（n＝6），以標準對照品濃度（C）對峰面積進行線性回歸，得回歸方程：Y＝9132.4 X－47376，r＝0.9997。

5 精密度試驗 選擇高、中、低3個標準濃度的齊墩果酸溶液，分別在日內(nèi)和日間測定3次，計算日內(nèi)和日間RSD%，結(jié)果見表1。

表1 齊墩果酸標準品精密度試驗結(jié)果（n＝6）

6 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的的樣品（齊墩果酸總量0.93mg／g）約20mg，分別精密加入齊墩果酸對照品溶液，按楤木皂苷膠囊的制樣方法處理，按樣品測定方法測定含量，計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 齊墩果酸回收率測定結(jié)果（n＝6）

7 樣品測定 精密稱取楤木膠囊內(nèi)容物20mg，按樣品溶液制備方法配制后，在相同色譜條件下測定峰面積，帶入回歸方程計算含量。結(jié)果3批樣品中齊墩果酸的含量分別為0.91mg／g，0.92mg／g，0.94 mg／g。

討 論 糖尿病是一種多病因的代謝疾病，以慢性高血糖為特征，伴隨因胰島素分泌及／或作用缺陷引起的糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝紊亂，可引起嚴重的并發(fā)癥。目前，關(guān)于治療糖尿病制劑的報道較多［1］，在對太白楤木進行生藥學及化學成分研究發(fā)現(xiàn)，太白楤木中主要含有三萜皂甙及揮發(fā)油等成分［2］，甙元齊墩果酸含量較高，且具保肝、降血脂及降血糖活性［3］。楤木皂苷膠囊是經(jīng)多年的臨床研究并不斷改進的院內(nèi)制劑，主要成分為太白楤木提取物，但由于沒有已上市的標準品，所以楤木皂苷膠囊的質(zhì)量控制難以實現(xiàn)。

我們發(fā)現(xiàn)，楤木提取物中的皂甙可經(jīng)稀硫酸水解為齊墩果酸，經(jīng)過不斷摸索，我們建立了穩(wěn)定的制樣方法。經(jīng)方法學驗證，70℃下水浴回流4h得到的樣品中齊墩果酸含量較高，該制樣方法不僅操作簡單而且可將樣品最大程度裂解為齊墩果酸。在該制樣方法的基礎(chǔ)之上，樣品中的齊墩果酸含量相對較高，從而解決了楤木皂苷膠囊中齊墩果酸含量較低的問題，這就使采用高效液相色譜法測定楤木皂苷膠囊中齊墩果酸含量變?yōu)榭赡堋Ｍ瑫r我們堅持流動相最簡單的原則基礎(chǔ)之上用磷酸調(diào)節(jié)PH值使峰形得到了有效矯正。

［1］龔翠芬，喬小利，劉小賓，等.消癥通痹膠囊與顆粒治療糖尿病下肢血管病變療效觀察［J］.陜西中醫(yī)，2011，4：427－428.

［2］湯海峰，易楊華，王忠壯，等.太白楤木根皮中三萜皂甙成分研究［J］.藥學學報，1996，31（7）：517.

［3］王忠壯，蘇中武，胡晉紅，等.太白楤木對實驗性糖尿病大鼠血糖及血脂的影響［J］.中國中藥雜志，1996，21（10）：628.