幽門螺桿菌相關性胃癌患者局部Th1/Th2細胞免疫應答變化*

江 泳 楊清峰 張 旭 周 磊 張 爽 張群超 張 毅

安徽省蚌埠市第三人民醫院消化內科(233000)

大量流行病學和病因學研究證明，幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)感染與胃癌具有部分因果關系。目前認為Hp感染后宿主的免疫病理反應是胃癌的主要致病機制之一，研究宿主免疫反應與胃癌之間的關系，對探明胃癌的發生機制具有重要意義［1］。本研究通過檢測Hp相關性胃癌患者黏膜局部干擾素-γ(IFN-γ)和白細胞介素-4(IL-4)表達情況，旨在探討Hp感染時宿主Th1/Th2細胞免疫應答變化及其在胃癌發生中的作用。

對象與方法

一、研究對象

連續收集2011年1～6月因上腹部不適癥狀而接受胃鏡檢查的胃癌患者，診斷符合病理學檢查。剔除標準:過去2周內服用過抑酸劑、鉍劑、抗生素、非甾體消炎藥和腎上腺皮質激素者;有支氣管哮喘、炎癥性腸病、自身免疫病者。同時選取同期胃鏡下表現為非特異性黏膜充血水腫者作為對照。

胃癌患者于病灶邊緣或明顯隆起部位取4～5塊組織，對照組于距幽門3 cm的胃竇大彎側取2塊組織，保存待測。

二、研究方法

1.Hp的檢測:入選者均接受14C-尿素呼氣試驗、Hp抗體檢測，其中1項結果陽性者視為Hp陽性，2項均陰性者視為 Hp 陰性［2］。

2.免疫組化法檢測IFN-γ和IL-4表達:IFN-γ和 IL-4單克隆抗體試劑盒購自北京四正柏生物科技有限公司，具體步驟嚴格按照試劑盒說明書操作。

結果判斷:細胞質呈明顯棕黃或棕褐色著色者為陽性細胞。隨機選取5個視野，高倍鏡(×400)下觀察細胞染色情況，共計數200個細胞。根據陽性細胞數判斷表達情況:-，無細胞染色;+，陽性細胞數1% ～25%;++，26% ～50%;+++ ，51% ～100%［3］。

三、統計學分析

結 果

一、一般情況

共入選55例患者，其中對照組28例，胃癌組27例，兩組一般情況見表1。Hp總體感染率為61.8%，兩組性別構成比、平均年齡、Hp陽性率相比差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

表1 兩組患者一般情況

二、IFN-γ和IL-4表達情況

1.Hp陽性患者:胃癌組IFN-γ表達以+、++為主，而對照組IFN-γ表達以+++為主(見圖1)，達61.1%;胃癌組IL-4表達以+++為主(見圖2)，達43.8%，而對照組IL-4表達以-、+為主。兩組IFN-γ、IL-4表達相比差異均有統計學意義(P ＜0.05)(見表2)。

2.Hp陰性患者:胃癌組和對照組IFN-γ表達均以+或++為主;而IL-4表達均以-或+為主，++、+++少見。兩組IFN-γ和IL-4表達相比均無明顯差異(P＞0.05)(見表3)。

圖1 Hp陽性對照者IFN-γ表達(免疫組化染色，×400)

圖2 Hp陽性胃癌患者IL-4表達(免疫組化染色，×400)

3.胃癌患者:Hp陽性胃癌患者IFN-γ表達與陰性者無明顯差異(P＞0.05)，而IL-4表達差異有統計學意義(P＜0.05)(見表 2、表 3)。

4.對照組:Hp陽性者IFN-γ表達與Hp陰性者相比差異有統計學意義(P＜0.05)，而IL-4表達無明顯差異(P＞0.05)(見表 2、表 3)。

表2 Hp陽性者中IFN-γ、IL-4表達情況n(%)

表3 Hp陰性者中IFN-γ、IL-4表達情況n(%)

討 論

1986年Mosmann等［4］根據分泌的細胞因子和生物學功能的不同，將小鼠CD4+Th細胞分為Th1和Th2兩個細胞亞型。1991年Romagnani［5］證實，人 Th細胞亦可分為 Th1和Th2兩個亞型，產生與小鼠Th細胞相似的細胞因子和生物學功能。Th1細胞主要分泌IFN-γ、IL-2、IL-12等細胞因子，通過促進自然殺傷細胞(NK細胞)、細胞毒性T細胞和巨噬細胞的活化、增殖，介導細胞免疫;Th2細胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等細胞因子，刺激 B 細胞增殖并產生抗體，介導體液免疫［6］。正常生理情況下，Th1、Th2兩類細胞處于相互抑制、相互轉化的平衡狀態，一旦平衡被打破，機體會處于Th1細胞或Th2細胞優勢的漂移狀態，從而發生各種病理反應，甚至導致腫瘤［7］。Th1/Th2細胞因子表達間接反映了Th1、Th2細胞的功能，IFN-γ和IL-4分別是Th1、Th2細胞中典型的細胞因子［8］。

研究表明，機體對腫瘤的免疫反應以Th1型免疫應答為主，若機體Th1和Th2應答失衡，形成Th2型免疫應答，造成免疫抑制，使機體的抗腫瘤免疫受到嚴重削弱，易導致腫瘤的發生、發展［7，9］。本研究采用免疫組化法發現，Hp總體感染率為61.8%。Hp陽性患者中，胃癌組IFN-γ表達明顯低于對照組(P＜0.05)，IL-4表達明顯高于對照組(P＜0.05);Hp陰性患者中，胃癌組IFN-γ、IL-4表達與對照組均無明顯差異(P＞0.05)。Hp陽性胃癌患者IL-4表達明顯高于Hp陰性胃癌患者(P＜0.05)，Hp陽性對照組IFN-γ表達明顯高于Hp陰性對照組(P＜0.05)。說明Hp陽性對照者以Th1細胞介導的免疫應答為主，Hp陽性胃癌患者以Th2細胞為主，在與Hp感染相關的胃部疾病進展過程中，病變局部存在由Th1細胞介導的免疫應答向Th2細胞介導的免疫應答轉化，可能與胃癌的發生密切相關。但因本研究入組病例較少，同時細胞因子網絡間的相互作用是一個復雜的過程，某些細胞因子的檢測結果尚不能表明整個發病機制，因此，今后尚需擴大樣本行進一步研究。

1 蔡英，王晶桐.幽門螺桿菌相關慢性炎癥和免疫因子在胃癌中的研究進展［J］.中國綜合臨床，2009，25(3):331-333.

2 中華醫學會消化病學分會幽門螺桿菌學組/幽門螺桿菌科研協作組.第三次全國幽門螺桿菌感染若干問題共識報告(2007年8月 廬山)［J］.胃腸病學，2008，13(1):42-46.

3 Wang SK，Zhu HF，He BS，et al.CagA+H pylori infection is associated with polarization of T helper cell immune responses in gastric carcinogenesis［J］. World J Gastroenterol，2007，13(21):2923-2931.

4 Mosmann TR，Cherwinski H，Bond MW，et al.Two types of murine helper T cell clone.Ⅰ.Definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins［J］.J Immunol，1986，136(7):2348-2357.

5 Romagnani S.Human TH1 and TH2 subsets:doubt no more［J］.Immunol Today，1991，12(8):256-257.

6 Kidd P.Th1/Th2 balance:the hypothesis，its limitations，and implications for health and disease［J］.Altern Med Rev，2003，8(3):223-246.

7 Aniszewski JP，Valyasevi RW，Bahn RS.Relationship between disease duration and predominant orbital T cell subset in Graves’ophthalmopathy［J］.J Clin Endocrinol Metab，2000，85(2):776-780.

8 Berger A.Th1 and Th2 responses:what are they［J］?BMJ，2000，321(7258):424.

9 Murakami H，Ogawara H，Hiroshi H.Th1/Th2 cells in patients with multiple myeloma［J］.Hematology，2004，9(1):41-45.