HPLC法測(cè)定活絡(luò)鎮(zhèn)痛片中淫羊藿苷的含量

劉曉燕

(江蘇省泗洪縣人民醫(yī)院藥劑科 223900)

HPLC法測(cè)定活絡(luò)鎮(zhèn)痛片中淫羊藿苷的含量

劉曉燕

(江蘇省泗洪縣人民醫(yī)院藥劑科 223900)

目的建立高效液相色譜法測(cè)定活絡(luò)鎮(zhèn)痛片中淫羊藿苷的含量測(cè)定方法。方法KromasilC18(5μm，250x4.6mm);流動(dòng)相:甲醇 －0.4%磷酸溶液(55:45);檢測(cè)波長(zhǎng):270nm，柱溫:35℃。結(jié)果 淫羊藿苷在0.072～0.36μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9999)，平均回收率為99.18%(n=5)，RSD為1.89%。結(jié)論結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

活絡(luò)鎮(zhèn)痛片;淫羊藿苷;含量測(cè)定;HPLC

活絡(luò)鎮(zhèn)痛片是由淫羊藿、天南星、紅花、防風(fēng)、白芷、當(dāng)歸等多味中藥組成的復(fù)方制劑。具有舒筋活血，消瘀止痛。主要用于閃腰岔氣，瘀血作痛，筋骨疼痛，腰痛、腿痛之功效。為控制該產(chǎn)品質(zhì)量，保證療效，我們參考相關(guān)文獻(xiàn)［1－4］，用 HPLC法對(duì)其中的淫羊藿進(jìn)行含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

UNICO UV－2102型紫外分析儀;JASCO 2000液相色譜儀，JASCO UV－1575紫外檢測(cè)器，N2000色譜工作站;BRANSON SB3200超聲波清洗器;Satorius BS 110S型電子天平。

淫羊藿苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用)，甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

活絡(luò)鎮(zhèn)痛片樣品與陰性樣品均由江蘇省洪州醫(yī)藥有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 KromasilC －18柱(4.6mmx250mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇 －0.4%磷酸(55:45);流速:1.0ml/min;柱溫:35℃;檢測(cè)波長(zhǎng):270nm;進(jìn)樣20μl。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

2.2 對(duì)照品溶液與供試品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含淫羊藿苷8μg的溶液，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取本品10片，除去糖衣，研細(xì)，混勻。取0.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷適量，加熱回流提取至無色，藥渣揮干，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率120W，頻率50KHz)40分鐘，放冷，稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液1ml，用稀乙醇定容至5ml，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 陰性試驗(yàn)取缺淫羊藿藥材的陰性樣品適量。按“2.2”供試品溶液的制備項(xiàng)下制得陰性對(duì)照溶液，并分別精密吸取供試品溶液、陰性溶液與對(duì)照品溶液，注入色譜儀，結(jié)果陰性樣品色譜在淫羊藿苷相應(yīng)保留時(shí)間上沒有干擾峰。

2.4 線性關(guān)系的考察淫羊藿苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量，置于50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)貯備液(36μg/ml)。精密吸取上述對(duì)照品溶液 1、2、3、4、5ml，分別用流動(dòng)相稀釋至10ml，搖勻，制成濃度分別為3.6、7.2、10.8、14.4、18.0μg/ml的對(duì)照品溶液。精密吸取上述對(duì)照品溶液各20μl注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄色譜圖。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，以峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程:Y=1883324.167X+289.84，R=0.99995，結(jié)果表明淫羊藿苷在0.072－0.36μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

表1 對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)精密吸取同一濃度對(duì)照品溶液，依法測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，RSD為1.28%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 同一樣品供試液(批號(hào)040501)，每隔2小時(shí)測(cè)定一次，共測(cè)6次，其峰面積RSD為0.82%，表明樣品在10小時(shí)內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 分別精密量取同一批號(hào)(批號(hào)040501)樣品5份，依法處理，測(cè)定，樣品含量為2.587、2.592、2.596、2.582、2.584mg/g，RSD 為 0.22%。

2.8 回收率測(cè)定精密量取已知含量的樣品(批號(hào)040501，含量為 2.588mg/g)5 份約 0.25g，各加入0.36mg/ml淫羊藿苷對(duì)照品溶液 1.5ml，依法處理，得供試品溶液。依法測(cè)定，并計(jì)算淫羊藿苷回收率為99.18%，RSD為1.89%，結(jié)果見表2

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

2.9 樣品測(cè)定分別精密量取不同批號(hào)的活絡(luò)鎮(zhèn)痛片樣品，按供試品溶液制備方法制備，如法測(cè)定，結(jié)果見表3

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 樣品提取條件的選擇在研究過程中分別進(jìn)行了不同溶劑(稀乙醇、70%乙醇、95%乙醇、甲醇)、不同提取方法(加熱回流、超聲提取)和不同提取時(shí)間(20、30、40、50min)的比較，最后確定以稀乙醇超聲40min。

3.2 由于該品種為中藥復(fù)方制劑，樣品所含成分較多，因此先將樣品用三氯甲烷回流提取后取藥渣進(jìn)行樣品的制備，以減少干擾。

［1］中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(2002年增補(bǔ)本).北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000.8.

［2］張林，楊瑞琪.HPLC法測(cè)定復(fù)方蛾公口服液中淫羊藿含量［J］.黑龍江醫(yī)學(xué)，2001:25(4):258－259.

［3］王樹松，王曉風(fēng)，徐鐸等，HPLC法測(cè)定益腎口服液中淫羊藿含量［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2001，17(5):282－283.

［4］中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部).北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000.

ObjectiveTo establish a HPLC method for the determination

of Icariin in Huoluo zhentong pian.MethodsHPLC was used to quantitative analysis.The kromasil C18 column(5?m，250x4.6mm)was used，and mobile phase was composed of methanol－0.4%H3PO4/Water(55:45).Detection wavelength was at 270 nm at 35℃.Result The linear range of methods was 0.072 ～0.36ug(r=0.9999)，the average recovery was 99.18%(n=5)with RSD=1.89% .ConclusionThe result is accurate and the reproducibility is good.The method can be used for quality control of Tinctura

Huoluo zhentong pian;Icariin;determination;HPLC

R284

B ［學(xué)科分類代碼］310.4720

2012－04－05

1001—814X(2012)04—0020—02