乙型肝炎病毒外膜大蛋白檢測在乙型肝炎診療中的臨床價值

李滿庫 王 莉 牟紅香 辛 華 劉麗秋 胡曉欣 王 琳

(佳木斯大學附屬第一醫院檢驗科，黑龍江 佳木斯 154002)

目前，臨床上主要以肝功能改善、乙型肝炎(乙肝)病毒e抗原(HBeAg)血清轉陰和乙肝病毒(HBV)DNA轉陰作為判斷HBV復制與抗病毒療效的監測指標。檢測乙肝病毒抗原(HBVAg)血清標志物只能反映病毒入侵人體的信息，不能直接反映HBV在病患體內的復制情況，也不能作為患者是否具有傳染性的直接證據;而定量檢測HBV DNA含量是衡量HBV傳染性最精確的指標，是確定HBV感染不同復制狀態的有效檢查手段。研究表明，HBV大蛋白(LP)的前S蛋白具有跨膜構象拓撲結構，與HBV的感染、復制及預后密切相關〔1，2〕。本文研究乙肝患者血清HBV LP、HBeAg和HBV DNA水平的相關性，探討HBV LP與乙肝病毒復制的關系及其臨床應用價值。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2010年1月至2011年1月在我院門診和住院部診治的乙肝患者305例，其中男165例，女140例，年齡15～65〔平均(37.8±21.6)〕歲。均符合2000年中華醫學會修訂的“病毒性肝炎防治方案”中的病毒性肝炎診斷標準，且無其他嗜肝病毒合并感染，所有患者采集血清標本離心吸取血清于－80℃冰箱保存備用。

1.2 方法 乙肝血清標志物HBeAg酶標試劑盒購自上海科華股份有限公司;HBV LP單克隆抗體酶標試劑盒由北京熱景生物技術有限公司提供。HBeAg、HBV LP檢測采用ELISA法，采用針對構象型前S抗原的單克隆抗體，Cutoff值為0.105;HBV DNA定量檢測采用實時熒光定量PCR方法，檢測試劑盒購自中山大學達安基因股份有限公司，采用美國ABI公司的7300自動實時熒光PCR分析儀。＞5×102拷貝/ml為HBV DNA陽性，嚴格按試劑說明書操作。酶標法采用北京普朗新技術有限公司的DNM-9606型酶標儀測定;HBV LP臨界值=陰性對照孔OD均值×2.1(陰性對照孔OD平均值低于0.05者按0.05計算)。

1.3 統計學方法 應用SPSS11.0統計軟件進行分析，計量資料用±s表示，計數資料用率表示。率的比較采用χ2檢驗，相關性檢驗采用線性相關分析。

2 結果

2.1 血清HBV DNA水平和HBV LP水平的關系 178例HBV LP、HBV DNA同為陽性的血清標本中，HBV LP含量(OD值)和HBV DNA拷貝數對數值之間呈現良好的正相關關系，相關分析結果r=0.354。見表1。

表1 血清HBV DNA水平和HBV LP水平之間的關系(±s)

表1 血清HBV DNA水平和HBV LP水平之間的關系(±s)

1)13例血清標本HBV DNA均為陽性(＞5×102拷貝/ml)

HBV DNA拷貝數n HBV LP陽性例數(n)陽性率(%) OD 均值102 131)7 53.85 0.328±0.20 103 45 26 57.78 0.404±0.201 104 80 70 87.5 0.524±0.311 105 45 44 97.78 0.675±0.367 106 21 21 100.00 0.882±0.402 10710 10 100.00 1.096±0.523

2.2 HBV LP、HBV PNA、HBeAg陽性率 305例HBV感染者血清中HBV LP和HBV DNA的陽性率分別73.44%(224/305)和70.16%(214/305)，兩者檢出一致率為71.25%，兩者間差異無統計學意義(P＞0.05)。HBeAg陽性156例，陽性率51.15%。

2.3 HBeAg不同模式中HBV LP和HBV DNA的陽性檢出率HBe Ag陽性156例中，HBV LP和HBV DNA陽性檢出率分別是90.38%(141例)和86.54%(135例);HBeAg陰性149例中HBV LP和HBV DNA陽性檢出率分別是55.70%(83例)和53.02%(79例)，兩者間差異均無統計學意義(P＞0.05)。

2.4 HBV DNA陽性血清中HBV LP和HbeAg陽性率比較在214例HBV DNA陽性血清中，HBV LP的陽性率是83.18%(178/214)，明顯高于HBeAg的陽性率〔49.06%(105/214)〕差異有統計學意義(χ2=66.23，P ＜0.01)。

3 討論

HBV S基因編碼合成的HBV外膜蛋白由3種蛋白組成，包括主蛋白(HBsAg)，中蛋白(HBsAg和PreS2)和大蛋白即LHBs(HBsAg、PreS1，和PreS2)。HBV LP在病毒進入時作為受體蛋白起作用;在病毒組裝時，則基質類似蛋白，同時還行使調節功能。Bruns等〔3〕通過發現鴨易感病毒血清的感染性不僅依賴于具有感染性的病毒顆粒(Dand顆粒)的多少，而且還依賴于缺乏核酸的亞病毒顆粒的數量;亞病毒顆粒在HBV感染過程中，能顯著增強細胞內的病毒復制和基因表達，而這種增強作用是由HBV LP前S區反式激活作用觸發的。慢性HBV感染患者體內HBV LP持續過量表達，轉錄反式激活病毒的啟動元件與病毒復制密切相關，因此檢測HBV LP對于反映病毒持續復制、預后有重要的臨床意義。

HBV DNA定量檢測是直接對HBV的遺傳物質DNA進行基因擴增，是病毒復制存在的最早期、最靈敏、最可靠的指標。但由于DNA的檢測條件特殊，對于不具備HBV DNA檢測條件的基層醫院無法開展，而HBV LP的檢測不需要特殊的設備，適合各級醫院開展。

本文中 HBV LP的陽性率與孫穎等〔4〕報道的陽性率(79.4%)相近，ELISA檢測HBV LP濃度與HBV DNA含量(拷貝數對數)具有良好的正相關性，表明乙肝患者體內HBV LP與病毒復制密切相關，提示檢測HBV LP能準確反映患者體內病毒復制情況，可以作為判斷HBV感染、復制和乙肝患者診斷、治療和預后的重要參考指標，具有較好的臨床應用價值;但HBV LP能否完全或基本替代HBV DNA的檢測，則有待進一步的探討。

HBeAg是HBV感染與復制重要的血清學指標，反映機體的免疫狀態〔5〕。HBsAg轉陰是急性乙肝有效治療的監測指標，但由于HBV基因前C區或CP區發生變異可以導致其合成障礙，而HBV仍然活躍復制，故在較多的HBeAg陰性慢性乙肝患者中仍然呈現HBV DAN檢測陽性的結果〔6〕，進而其轉陰并不能排除病毒復制和傳染性。本研究HBV LP檢出率高于HBV DNA的檢出率，與樂愛平等〔7〕的研究一致。說明HBV LP的檢測能提早診斷出HBeAg陰性慢性乙肝患者體內HBV復制情況，有利于及時治療，從而有效避免肝硬化、肝癌的發生。

1 Chai N，Gudima S，Chang J，et al.Immunoadhesins containing pre-S domains of hepatitis B virus large envelope protein are secreted and inhibit virus infection〔J〕.J Virol，2007;81(10):4912-8.

2 Patient R，Hourioux C，Sizaret PY，et al.Hepatitis B virus subviral envelope particle morphogenesis and intracellular trafficking〔J〕.J Virol，2007;81(8):3842-51.

3 Bruns M，Miska S，Chassot S，et al.Enhancement of hepatitis B virus infection by noninfectious subviral particles〔J〕.J Virol，1998;72(2):1462-8.

4 孫 穎，辛紹杰，雷 厲，等.乙肝病毒外膜大蛋白檢測對判定HBV DNA復制的意義〔J〕.世界華人消化雜志，2006;14(3):354-7.

5 Yamada T，Iwabuki H，Kanno T，et al.Physicochemical and immunological characterization of hepatitis B virus envelope particles exclusively consessting of the entire L(pre S1+pre-S2+S)protein〔J〕.Vaccine，2001;19(23-4):3154-63.

6 Hamasaki K，Nakata K，Nagayama Y，et al.Changes in the prevalence of HBeAg-negative mutant hepatitis B virus during the course of chronic hepatitis B〔J〕.Hepatology，1994;20(1):8-14.

7 樂愛平，鞠北華，胡慶宏.HBV preS1-Ag、HBV PreS2-Ag、HBV-DNA、HBV M的相關性分析及其意義〔J〕.臨床肝膽病雜志，2003;19:344-6.