乙型肝炎病毒外膜大蛋白檢測在乙型肝炎診療中的臨床價值

李滿庫 王 莉 牟紅香 辛 華 劉麗秋 胡曉欣 王 琳

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗科，黑龍江 佳木斯 154002)

目前，臨床上主要以肝功能改善、乙型肝炎(乙肝)病毒e抗原(HBeAg)血清轉(zhuǎn)陰和乙肝病毒(HBV)DNA轉(zhuǎn)陰作為判斷HBV復(fù)制與抗病毒療效的監(jiān)測指標(biāo)。檢測乙肝病毒抗原(HBVAg)血清標(biāo)志物只能反映病毒入侵人體的信息，不能直接反映HBV在病患體內(nèi)的復(fù)制情況，也不能作為患者是否具有傳染性的直接證據(jù);而定量檢測HBV DNA含量是衡量HBV傳染性最精確的指標(biāo)，是確定HBV感染不同復(fù)制狀態(tài)的有效檢查手段。研究表明，HBV大蛋白(LP)的前S蛋白具有跨膜構(gòu)象拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，與HBV的感染、復(fù)制及預(yù)后密切相關(guān)〔1，2〕。本文研究乙肝患者血清HBV LP、HBeAg和HBV DNA水平的相關(guān)性，探討HBV LP與乙肝病毒復(fù)制的關(guān)系及其臨床應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2010年1月至2011年1月在我院門診和住院部診治的乙肝患者305例，其中男165例，女140例，年齡15～65〔平均(37.8±21.6)〕歲。均符合2000年中華醫(yī)學(xué)會修訂的“病毒性肝炎防治方案”中的病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，且無其他嗜肝病毒合并感染，所有患者采集血清標(biāo)本離心吸取血清于－80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法 乙肝血清標(biāo)志物HBeAg酶標(biāo)試劑盒購自上海科華股份有限公司;HBV LP單克隆抗體酶標(biāo)試劑盒由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供。HBeAg、HBV LP檢測采用ELISA法，采用針對構(gòu)象型前S抗原的單克隆抗體，Cutoff值為0.105;HBV DNA定量檢測采用實時熒光定量PCR方法，檢測試劑盒購自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司，采用美國ABI公司的7300自動實時熒光PCR分析儀。＞5×102拷貝/ml為HBV DNA陽性，嚴(yán)格按試劑說明書操作。酶標(biāo)法采用北京普朗新技術(shù)有限公司的DNM-9606型酶標(biāo)儀測定;HBV LP臨界值=陰性對照孔OD均值×2.1(陰性對照孔OD平均值低于0.05者按0.05計算)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計量資料用±s表示，計數(shù)資料用率表示。率的比較采用χ2檢驗，相關(guān)性檢驗采用線性相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 血清HBV DNA水平和HBV LP水平的關(guān)系 178例HBV LP、HBV DNA同為陽性的血清標(biāo)本中，HBV LP含量(OD值)和HBV DNA拷貝數(shù)對數(shù)值之間呈現(xiàn)良好的正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)分析結(jié)果r=0.354。見表1。

表1 血清HBV DNA水平和HBV LP水平之間的關(guān)系(±s)

表1 血清HBV DNA水平和HBV LP水平之間的關(guān)系(±s)

1)13例血清標(biāo)本HBV DNA均為陽性(＞5×102拷貝/ml)

HBV DNA拷貝數(shù)n HBV LP陽性例數(shù)(n)陽性率(%) OD 均值102 131)7 53.85 0.328±0.20 103 45 26 57.78 0.404±0.201 104 80 70 87.5 0.524±0.311 105 45 44 97.78 0.675±0.367 106 21 21 100.00 0.882±0.402 10710 10 100.00 1.096±0.523

2.2 HBV LP、HBV PNA、HBeAg陽性率 305例HBV感染者血清中HBV LP和HBV DNA的陽性率分別73.44%(224/305)和70.16%(214/305)，兩者檢出一致率為71.25%，兩者間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。HBeAg陽性156例，陽性率51.15%。

2.3 HBeAg不同模式中HBV LP和HBV DNA的陽性檢出率HBe Ag陽性156例中，HBV LP和HBV DNA陽性檢出率分別是90.38%(141例)和86.54%(135例);HBeAg陰性149例中HBV LP和HBV DNA陽性檢出率分別是55.70%(83例)和53.02%(79例)，兩者間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

2.4 HBV DNA陽性血清中HBV LP和HbeAg陽性率比較在214例HBV DNA陽性血清中，HBV LP的陽性率是83.18%(178/214)，明顯高于HBeAg的陽性率〔49.06%(105/214)〕差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=66.23，P ＜0.01)。

3 討論

HBV S基因編碼合成的HBV外膜蛋白由3種蛋白組成，包括主蛋白(HBsAg)，中蛋白(HBsAg和PreS2)和大蛋白即LHBs(HBsAg、PreS1，和PreS2)。HBV LP在病毒進(jìn)入時作為受體蛋白起作用;在病毒組裝時，則基質(zhì)類似蛋白，同時還行使調(diào)節(jié)功能。Bruns等〔3〕通過發(fā)現(xiàn)鴨易感病毒血清的感染性不僅依賴于具有感染性的病毒顆粒(Dand顆粒)的多少，而且還依賴于缺乏核酸的亞病毒顆粒的數(shù)量;亞病毒顆粒在HBV感染過程中，能顯著增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)的病毒復(fù)制和基因表達(dá)，而這種增強(qiáng)作用是由HBV LP前S區(qū)反式激活作用觸發(fā)的。慢性HBV感染患者體內(nèi)HBV LP持續(xù)過量表達(dá)，轉(zhuǎn)錄反式激活病毒的啟動元件與病毒復(fù)制密切相關(guān)，因此檢測HBV LP對于反映病毒持續(xù)復(fù)制、預(yù)后有重要的臨床意義。

HBV DNA定量檢測是直接對HBV的遺傳物質(zhì)DNA進(jìn)行基因擴(kuò)增，是病毒復(fù)制存在的最早期、最靈敏、最可靠的指標(biāo)。但由于DNA的檢測條件特殊，對于不具備HBV DNA檢測條件的基層醫(yī)院無法開展，而HBV LP的檢測不需要特殊的設(shè)備，適合各級醫(yī)院開展。

本文中 HBV LP的陽性率與孫穎等〔4〕報道的陽性率(79.4%)相近，ELISA檢測HBV LP濃度與HBV DNA含量(拷貝數(shù)對數(shù))具有良好的正相關(guān)性，表明乙肝患者體內(nèi)HBV LP與病毒復(fù)制密切相關(guān)，提示檢測HBV LP能準(zhǔn)確反映患者體內(nèi)病毒復(fù)制情況，可以作為判斷HBV感染、復(fù)制和乙肝患者診斷、治療和預(yù)后的重要參考指標(biāo)，具有較好的臨床應(yīng)用價值;但HBV LP能否完全或基本替代HBV DNA的檢測，則有待進(jìn)一步的探討。

HBeAg是HBV感染與復(fù)制重要的血清學(xué)指標(biāo)，反映機(jī)體的免疫狀態(tài)〔5〕。HBsAg轉(zhuǎn)陰是急性乙肝有效治療的監(jiān)測指標(biāo)，但由于HBV基因前C區(qū)或CP區(qū)發(fā)生變異可以導(dǎo)致其合成障礙，而HBV仍然活躍復(fù)制，故在較多的HBeAg陰性慢性乙肝患者中仍然呈現(xiàn)HBV DAN檢測陽性的結(jié)果〔6〕，進(jìn)而其轉(zhuǎn)陰并不能排除病毒復(fù)制和傳染性。本研究HBV LP檢出率高于HBV DNA的檢出率，與樂愛平等〔7〕的研究一致。說明HBV LP的檢測能提早診斷出HBeAg陰性慢性乙肝患者體內(nèi)HBV復(fù)制情況，有利于及時治療，從而有效避免肝硬化、肝癌的發(fā)生。

1 Chai N，Gudima S，Chang J，et al.Immunoadhesins containing pre-S domains of hepatitis B virus large envelope protein are secreted and inhibit virus infection〔J〕.J Virol，2007;81(10):4912-8.

2 Patient R，Hourioux C，Sizaret PY，et al.Hepatitis B virus subviral envelope particle morphogenesis and intracellular trafficking〔J〕.J Virol，2007;81(8):3842-51.

3 Bruns M，Miska S，Chassot S，et al.Enhancement of hepatitis B virus infection by noninfectious subviral particles〔J〕.J Virol，1998;72(2):1462-8.

4 孫 穎，辛紹杰，雷 厲，等.乙肝病毒外膜大蛋白檢測對判定HBV DNA復(fù)制的意義〔J〕.世界華人消化雜志，2006;14(3):354-7.

5 Yamada T，Iwabuki H，Kanno T，et al.Physicochemical and immunological characterization of hepatitis B virus envelope particles exclusively consessting of the entire L(pre S1+pre-S2+S)protein〔J〕.Vaccine，2001;19(23-4):3154-63.

6 Hamasaki K，Nakata K，Nagayama Y，et al.Changes in the prevalence of HBeAg-negative mutant hepatitis B virus during the course of chronic hepatitis B〔J〕.Hepatology，1994;20(1):8-14.

7 樂愛平，鞠北華，胡慶宏.HBV preS1-Ag、HBV PreS2-Ag、HBV-DNA、HBV M的相關(guān)性分析及其意義〔J〕.臨床肝膽病雜志，2003;19:344-6.