藏藥經典驗方“瑪奴西湯”顆粒免疫調節作用的實驗研究

紅 梅 陳秋紅 王志瑾 劉有菊

1.青海省藏醫藥研究院，青海西寧 810003；2.青海高原醫學科學研究所中心實驗室，青海西寧 810012

“瑪奴西湯”（縮寫為MNXT）系藏藥經典驗方，載于藏醫名著《四部醫典》，至今已有一千多年的臨床應用史，由藏木香、懸鉤木、寬筋藤和干姜4 味藥材組成，具有解表、發汗之功效。用于治療瘟病初期、流感初期、惡寒頭痛、關節酸痛、類風濕關節炎、發熱等病癥[1-2]。但目前臨床應用的劑型仍是傳統的湯散劑，存在攜帶不便、生物利用度差等問題，因此本項目為其確定適宜劑型，闡明其有效性及安全性，采用炭粒廓清法和2，4-二硝基氟苯（DNFB）所致的遲發性超敏反應法研究“瑪奴西湯”顆粒對免疫功能的影響，為藏藥“瑪奴西湯”顆粒在臨床中的應用提供依據。

1 儀器與試劑

1.1 實驗儀器

秒表，粵字03000122，飛亞運集團；紫外光柵分光光度計，型號：752，上海精密科學儀器有限公司；電子天平，型號：JD1060-2，沈陽龍騰電子稱量儀器有限公司。

1.2 實驗試劑

瑪奴西湯顆粒，規格：30 g/袋，生產批號：20111212，由青海省藏醫藥研究院基礎研究所傳統工藝室提供；醋酸潑尼松片，規格：5mg/片，生產批號：12020102，天津天藥藥業股份有限公司；生理鹽水，生產批號：H11021313，四川科倫藥業股份有限公司；羧甲基纖維素鈉，生產批號：20080399，常州市武進廟橋第二化工有限公司；2，4-二硝基氟苯，生產批號：20070519，成都市科龍化工試劑廠；丙酮，生產批號：2006年4月26日，天津市化學試劑六廠；硫化鈉，生產批號：060320，成都金山化學試劑有限公司生產；碳酸鈉，生產批號：030211，西安化學試劑廠；印度墨汁，生產批號：NBLD2012Y0518，北京諾博萊德科技有限公司；微量采血管，生產批號：201204，姜堰市健化醫療器械有限公司；靜脈血樣采集容器普通管，規格：5mL，生產批號：120226，湖南省瀏陽市醫用儀具廠。

1.3 實驗動物

昆明種小鼠，清潔級，體重18～22 g，合格證號：青醫動字號20120007，購于青海省實驗動物中心。

2 方法與結果

2.1 實驗方法

2.1.1 炭粒廓清法[3-4]取18～22 g雄性小鼠60只，隨機分為空白組、模型組、醋酸潑尼松組（10.0 mg/kg）、瑪奴高劑量組（2.0 g/kg）、瑪奴中劑量組（1.0 g/kg）、瑪奴低劑量組（0.5g/kg），每組10只。每組小鼠每日灌胃給藥1次，連續給藥7 d，給藥量按小鼠體重折算，空白組和模型組給予蒸餾水。末次給藥前禁食16 h，每組小鼠于末次給藥后1 h于尾靜脈注入用1%明膠溶液稀釋4 倍的印度墨汁（0.01 mL/g體重）。于注入墨汁后2 min及12 min用微量采血管從小鼠眼眶后靜脈叢取血20 μL， 立即吹入裝有2 mL，0.1%Na2CO3溶液的血液采集管中，并立即搖勻。以空白組血容液校零，用752 型分光光度計在680 nm處測定吸光度A。后將小鼠頸椎處死，取脾臟、 肝臟稱重。 并計算廓清指數：K=（lgA1-lgA2）/（t2-t1）（A1為 2 min時血樣的吸光度，A2 為12 min時血樣的吸光度，t1為第1次采血時間，單位為min，t2 為第2次采血時間，單位為min）；吞噬指數：a=體重 × K1/3/（脾重+肝重）（K為廓清指數）。

2.1.2 遲發性超敏反應[4]取18～22 g小鼠60只，雌雄各半，分組與給藥方法同“2.1.1”。于給藥1 d后，每只小鼠用7%的硫化鈉溶液涂抹腹部脫毛[5]，并在24 h后將5%2，4-二硝基氟苯丙酮溶液50 μL均勻涂抹于小鼠腹部脫毛處致敏，繼續給藥7 d。末次給藥前禁食不禁水16 h，每組小鼠于末次給藥后1 h，于小鼠左耳兩面均勻涂抹20 μL，1%2，4-二硝基氟苯丙酮溶液進行攻擊，24 h后將小鼠頸椎處死，剪下小鼠左右兩耳，用直徑為7 mm的打孔器于小鼠左右兩耳片同部位等面積銃下耳片，用精密電子天平稱重，計算小鼠腫脹度（左右耳片重量差）。

2.1.3 統計學方法 采用統計軟件SPSS 12.0 對實驗數據進行分析，計量資料數據以均數±標準差（±s）表示，采用單因素方差分析，組間比較采用LSD-t檢驗。以P<0.05 為差異有統計學意義。

2.2 實驗結果

2.2.1 瑪奴西湯顆粒對小鼠廓清指數和吞噬指數的影響 連續給藥7 d后，瑪奴中劑量組的廓清指數和吞噬指數顯著提高，與模型組比較，差異有統計學意義 （P＜0.05 或P＜0.01）；并且高、低劑量組的吞噬指數顯著提高，與模型組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 瑪奴西湯顆粒對小鼠廓清指數和吞噬指數的影響（±s，n=10）

表1 瑪奴西湯顆粒對小鼠廓清指數和吞噬指數的影響（±s，n=10）

注：與模型組比較，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01；“-”表示無數據

組別 劑量 K 吞噬指數（a）空白組模型組醋酸潑尼組瑪奴高劑量瑪奴中劑量瑪奴低劑量----10.0 mg/kg 2.0 g/kg 1.0 g/kg 0.5g/kg 0.017 8±0.0152 0.016 8±0.008 8 0.022 5±0.0058 0.032 2±0.009 3*0.02 92±0.009 8 3.88±1.42 3.78±1.19 5.10±0.74*5.77±0.82**5.13±0.68*

2.2.2 瑪奴西湯顆粒對小鼠遲發性超敏反應的影響 連續給藥7 d后，用1%2，4-二硝基氟苯丙酮溶液攻擊小鼠的左耳兩面，瑪奴中、低劑量組的左右耳重量差明顯升高，與模型組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 瑪奴西湯顆粒對小鼠遲發性過敏反應的影響（±s，n=10）

表2 瑪奴西湯顆粒對小鼠遲發性過敏反應的影響（±s，n=10）

注：與模型組比較，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01；“-”表示無數據

組別 劑量 耳腫脹腫脹度（mg）空白組模型組醋酸潑尼組瑪奴高劑量瑪奴中劑量瑪奴低劑量--10.0 mg/kg 2.0 g/kg 1.0 g/kg 0.5g/kg 0.30±0.54**14.55±3.06 14.03±1.08 16.76±2.28 17.31±2.35*17.63±3.09*

3 討論

藏藥“瑪奴西湯”別名四味藏木香湯散，是藏藥中經典方劑之一，已有相關文獻證明該方劑有增強機體特異性體液免疫功能[6]。其主要成分是由藏木香、懸鉤木、寬筋藤、干姜四味藥物組成，藏木香是方劑中的君藥，為菊科旋覆花屬植物藏木香的根[7]，含有豐富的總黃酮[8]和可溶性多糖[9]成分，而黃酮類化合物和多糖具有對機體免疫功能調節作用[10]，并且方劑中含有豐富的微量元素與之相結合致使有效成分提煉[11]，在治療疾病時有獨特的療效[12]，這是藏藥文化優勢和獨到之處。

本文通過小鼠炭粒廓清法和遲發性超敏反應，觀察工藝優化的顆粒劑的免疫調節作用。實驗結果表明，小鼠灌服“瑪奴西湯”顆粒后，能顯著提高小鼠單核巨噬細胞的吞噬功能及2，4-二硝基氟苯丙酮溶液所致的耳腫脹度，說明“瑪奴西湯”顆粒具有增強機體免疫的功能，這為臨床用藥提供了科學的依據。

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