高效液相色譜法測定芎菊上清丸中梔子苷含量

郜鳳香，梁 艷

(河南省醫藥學校，河南 開封 475000)

芎菊上清丸是由川芎、菊花、黃芩、梔子等16味中藥組成的復方制劑，主要療效是清熱解表、散風止痛。處方中梔子所含梔子苷具有鎮痛、抗炎、治療軟組織損傷和降低胰淀粉酶等作用。原標準[1]無梔子苷的含量測定。為提高產品質量，筆者采用高效液相色譜法對其進行含量測定，現報道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀島津LC－10ADvp泵，SPD－10Avp紫外檢測器，CS－light色譜工作站;CD－225D型電子天平(Sartorias)。梔子苷(中國藥品生物制品檢定所，批號為110749－200410);芎菊上清丸為市售品(批號為20110602，110322，110514);試藥甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agela Promosil C18柱(250 mm ×4 mm，5 μm);流動相:乙腈 － 水(17 ∶83)，流速:1.0 mL/min;檢測波長:240 nm，柱溫:30 ℃ ;進樣量:20 μL。

2.2 溶液制備

精密稱定梔子苷對照品適量，用甲醇制成質量濃度為0.040 96 g/L的溶液，作為對照品溶液。取本品約1.0 g，剪碎，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇50 mL，稱定質量，超聲處理(功率400 W，頻率40 kHz)60 min，取出，放冷，稱定質量，用甲醇補足減失的質量，過濾，精密吸取續濾液10 mL，水浴蒸至近干，加1.0 g氧化鋁拌勻，加至中性氧化鋁柱(100目，1 g，內徑1 cm)中，70%乙醇100 mL洗脫，收集洗脫液置水浴上蒸干，加甲醇溶解并轉移至5 mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液即得供試品溶液。按處方量并以相同工藝制備不含梔子的陰性對照樣品，按供試品的制備方法同法操作制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:取2.2項下3種溶液，按2.1項下色譜條件測定。結果表明陰性樣品的其他組分對梔子苷的測定無干擾，高效液相色譜圖見圖1。

線性關系考察:在擬訂的色譜條件下，精密吸取對照品溶液 2，5，10，20，50 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積。以對照品峰面積為縱坐標(Y)、對照品的質量濃度為橫坐標(X)進行線性回歸，得回歸方程Y=252 380 X－20 561，r=0.999 8。結果表明梔子苷進樣量在 0.081 9 ～2.048 μg范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

精密度試驗:精密吸取同一對照溶液 20 μL，連續進樣6次。結果峰面積的RSD 為 0.68%(n=6)。

重復性試驗:取同一批號(20110602)樣品6份，分別按上述方法處理后進行測定。結果梔子苷平均含量為0.051 2%，RSD為1.03%(n=6)。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別在配置后0，2，4，8，12，16，20，24 h 時各進樣 1 次。結果峰面積的 RSD 為 0.88%(n=8)，表明梔子苷在供試品溶液中24 h內穩定。

加樣回收試驗:取已知含量的同批(批號為20110602，含量為0.051 2%)樣品 6份，每份約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，以兩份為1組，共3組，每組分別精密加入梔子苷對照品0.409 6，0.819 2，1.228 8 μg，依法制備溶液并測定，計算回收率。結果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 梔子苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

精密量取3個批號供試品溶液各2份，依法制備供試品溶液并進行含量測定。結果批號分別為20110602，110322，110514的樣品中梔子苷含量分別為 0.051 2%，0.043 9%，0.046 8% 。

3 討論

取梔子苷對照溶液，在220～260 nm波長范圍內掃描，結果在240nm波長處有最大吸收，故選擇240 nm為檢測波長。曾分別以甲醇、50%甲醇、70%乙醇、95%乙醇為提取溶劑，結果以70%乙醇提取梔子苷含量明顯高于其他3種溶劑。對甲醇－水、乙腈－水進行了流動相考察，結果以乙腈－水(17∶83)為流動相時，梔子苷與其他組分能實現完全分離。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:676.