高效液相色譜法測定路邊菊中綠原酸含量

梁聶彥，陳學松

(1.廣西壯族自治區岑溪市人民醫院，廣西 梧州 543200;2.廣西壯族自治區梧州市食品藥品檢驗所，廣西 梧州 543002)

路邊菊始載于《本草拾遺》，原名紫菊，謂“其花呼為紫菊，以其花似菊而紫也”[1]，分布于我國南方各省，現無GAP基地。其性辛、苦，寒[2]，歸肺、肝、胃、大腸經，具有清熱解毒、散瘀止血、消積的功效。為更好地控制藥材質量，筆者對路邊菊的含量測定等進行了研究，現報道如下。

1 儀器與試藥

Shimadzu LC－20AD型高效液相色譜儀;AE240S型電子天平(梅特勒－托利多儀器＜上海＞有限公司);綠原酸對照品(批號為110753－200413，中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用);10批路邊菊樣品(分別采自廣西壯族自治區蒼梧縣新地鎮都梅村、龍圩鎮寨中村，梧州市)，經廣西壯族自治區梧州市食品藥品檢驗所鑒定為菊科馬蘭屬植物馬蘭 Kalimeris indica(L.)Sch.－Bip的全草;乙腈為色譜純(Merck)，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Agilent SB －C18柱 (250 mm ×4.6 mm，5 μm);流速:1.0 mL/min;檢測波長:348 nm;柱溫:35 ℃;進樣體積:10 μL;流動相:乙腈－0.1%磷酸溶液[3]。高效液相色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

取綠原酸5.21 g，精密稱定，置50 mL棕色量瓶中，得質量濃度為0.104 2 g/L的對照品溶液。取本品粉末(過一號篩)約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理(功率300 W，頻率45 kHz)40 min，放冷，再稱定質量，用70%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:取已配制好的對照品溶液，分別精密吸取0.25，0.50，1.00，1.00，4.00 mL 至 10，10，10，5，5 mL 量瓶中，加溶劑 70% 甲醇得質量濃度分別為 0.002 605，0.005 21，0.010 42，0.020 84，0.041 68 g/L的對照品溶液，按擬訂的色譜條件測定峰面積。以綠原酸進樣量(μg)為縱坐標(Y)、峰面積為橫坐標(X)繪制標準曲線，得回歸方程 Y=1 846 039 X－10 829，r=0.999 9(n=5)。結果表明，綠原酸進樣量在 0.026 05 ～1.667 2 μg 范圍內與峰面積具有良好線性關系。

精密度試驗:取同一對照品溶液(質量濃度為0.020 84 g/L)，按擬訂的色譜條件連續進樣測定。結果的 RSD=0.1%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，按擬訂的色譜條件分別在0，3，6，9，15，30 h 時進樣測定。結果峰面積積分值的 RSD 為0.6%(n=6)，表明供試品溶液在30 h內穩定。

重復性試驗:精密稱取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并進樣測定。結果綠原酸平均含量是0.19%，RSD=0.7%(n=6)。

加樣回收試驗:精密稱取已測定含量樣品(0.19%)0.25 g，置25 mL量瓶中，取樣9份，分別精密加入質量濃度為0.208 4 g/L的綠原酸對照品溶液 1.80，2.30，2.80 mL，按擬訂的方法測定，計算回收率。結果見表1。

表1 綠原酸加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取本品10批，按擬訂的色譜條件測定，計算樣品中綠原酸含量。結果10批樣品中綠原酸含量分別為0.20%，0.08%，0.19%，0.07%，0.06%，0.08%，0.26%，0.18% ，0.07%，0.07%。

3 討論

曾嘗試了控制路邊菊中木犀草苷的含量，但在出峰時間段干擾太嚴重。經試驗，流動相中加入0.1%磷酸，會使峰形更加對稱。

[1]張雪梅，劉 圓，孟慶艷.民族藥馬蘭的生藥學鑒定[J].時珍國醫國藥，2007，18(3):557.

[2]謝宗萬，范崔生.全國中草藥匯編(上冊)[M].北京:人民衛生出版社，1996:75.

[3]陳葉青.高效液相色譜法測定婦科止癢膠囊中綠原酸含量[J].中國藥業，2011，20(6):32.