高效液相色譜法測定路邊菊中綠原酸含量

梁聶彥，陳學(xué)松

(1.廣西壯族自治區(qū)岑溪市人民醫(yī)院，廣西 梧州 543200;2.廣西壯族自治區(qū)梧州市食品藥品檢驗所，廣西 梧州 543002)

路邊菊始載于《本草拾遺》，原名紫菊，謂“其花呼為紫菊，以其花似菊而紫也”[1]，分布于我國南方各省，現(xiàn)無GAP基地。其性辛、苦，寒[2]，歸肺、肝、胃、大腸經(jīng)，具有清熱解毒、散瘀止血、消積的功效。為更好地控制藥材質(zhì)量，筆者對路邊菊的含量測定等進(jìn)行了研究，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Shimadzu LC－20AD型高效液相色譜儀;AE240S型電子天平(梅特勒－托利多儀器＜上海＞有限公司);綠原酸對照品(批號為110753－200413，中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用);10批路邊菊樣品(分別采自廣西壯族自治區(qū)蒼梧縣新地鎮(zhèn)都梅村、龍圩鎮(zhèn)寨中村，梧州市)，經(jīng)廣西壯族自治區(qū)梧州市食品藥品檢驗所鑒定為菊科馬蘭屬植物馬蘭 Kalimeris indica(L.)Sch.－Bip的全草;乙腈為色譜純(Merck)，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Agilent SB －C18柱 (250 mm ×4.6 mm，5 μm);流速:1.0 mL/min;檢測波長:348 nm;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣體積:10 μL;流動相:乙腈－0.1%磷酸溶液[3]。高效液相色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

取綠原酸5.21 g，精密稱定，置50 mL棕色量瓶中，得質(zhì)量濃度為0.104 2 g/L的對照品溶液。取本品粉末(過一號篩)約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率300 W，頻率45 kHz)40 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:取已配制好的對照品溶液，分別精密吸取0.25，0.50，1.00，1.00，4.00 mL 至 10，10，10，5，5 mL 量瓶中，加溶劑 70% 甲醇得質(zhì)量濃度分別為 0.002 605，0.005 21，0.010 42，0.020 84，0.041 68 g/L的對照品溶液，按擬訂的色譜條件測定峰面積。以綠原酸進(jìn)樣量(μg)為縱坐標(biāo)(Y)、峰面積為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=1 846 039 X－10 829，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，綠原酸進(jìn)樣量在 0.026 05 ～1.667 2 μg 范圍內(nèi)與峰面積具有良好線性關(guān)系。

精密度試驗:取同一對照品溶液(質(zhì)量濃度為0.020 84 g/L)，按擬訂的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定。結(jié)果的 RSD=0.1%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，按擬訂的色譜條件分別在0，3，6，9，15，30 h 時進(jìn)樣測定。結(jié)果峰面積積分值的 RSD 為0.6%(n=6)，表明供試品溶液在30 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:精密稱取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并進(jìn)樣測定。結(jié)果綠原酸平均含量是0.19%，RSD=0.7%(n=6)。

加樣回收試驗:精密稱取已測定含量樣品(0.19%)0.25 g，置25 mL量瓶中，取樣9份，分別精密加入質(zhì)量濃度為0.208 4 g/L的綠原酸對照品溶液 1.80，2.30，2.80 mL，按擬訂的方法測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 綠原酸加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取本品10批，按擬訂的色譜條件測定，計算樣品中綠原酸含量。結(jié)果10批樣品中綠原酸含量分別為0.20%，0.08%，0.19%，0.07%，0.06%，0.08%，0.26%，0.18% ，0.07%，0.07%。

3 討論

曾嘗試了控制路邊菊中木犀草苷的含量，但在出峰時間段干擾太嚴(yán)重。經(jīng)試驗，流動相中加入0.1%磷酸，會使峰形更加對稱。

[1]張雪梅，劉 圓，孟慶艷.民族藥馬蘭的生藥學(xué)鑒定[J].時珍國醫(yī)國藥，2007，18(3):557.

[2]謝宗萬，范崔生.全國中草藥匯編(上冊)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1996:75.

[3]陳葉青.高效液相色譜法測定婦科止癢膠囊中綠原酸含量[J].中國藥業(yè)，2011，20(6):32.