心腦通絡液對腦梗塞大鼠腦組織Es－mRNA表達的影響

陳鵬，吳限，陳曦

(黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院，黑龍江 哈爾濱 150040)

細胞粘附分子是一類介導細胞間或細胞與細胞外基質相互作用的糖蛋白。粘附分子使白細胞、血小板等易于粘附于血管內皮，促進炎癥的發生發展。而與腦缺血炎癥損傷密切相關的細胞粘附分子主要為選擇素家族中的E－選擇素(E－selectin)。我們觀察了心腦通絡液對局灶性腦缺血大鼠腦組織Es－mRNA表達的影響，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及實驗藥物 參考課題組前期研究成果［1］。

1.2 試劑及儀器 PT－PCR試劑盒(美國Promega);引物設計合成(大連寶生物公司);瓊脂糖(北京原平皓生物技術有限公司);DNA Marker DL2000(大連寶生物公司);水平電泳儀(北京六一儀器廠);DYY－8B;PCR擴增儀(德國艾本德);DL2000。

1.3 方法

1.3.1 分組及給藥 大鼠隨機分為5組，即模型組、假手術組、步長腦心通對照組(簡稱對照組)、心腦通絡液高劑量組(簡稱高劑量組)、心腦通絡液低劑量組(簡稱低劑量組)，在造模成功48h后各取8只。高、低劑量組和對照組分別于術前5天至處死前，每天給予灌胃給藥，高、低劑量組均給予心腦通絡液10.71ml/kg/d(低劑量組給藥前將心腦通絡液用蒸餾水按1∶1稀釋);腦心通組給予腦心通0.33g/kg/d;假手術組、模型組則予等體積的的0.9%蒸餾水灌胃，1日1次。

1.3.2 模型建立 參照文獻［2］，建立腦梗死大鼠模型，于造模成功后48h檢測Es－mRNA表達的變化。

1.3.3 檢測指標及方法

在造模成功48h后，檢測Es－mRNA表達的變化，按照試劑盒步驟進行。

PCR擴增引物:引物由大連寶生物公司設計和合成，引物序列以及引物特異性介導擴增的PCR產物大小見表1。

表1 PCR擴增引物

1.4 統計學處理

2 結果

對局灶性腦缺血大鼠腦組織E－選擇素mRNA表達的影響，見表2及圖1。

表2 藥物對局灶性腦缺血大鼠腦組織E選擇素mRNA表達的影響(±s)

表2 藥物對局灶性腦缺血大鼠腦組織E選擇素mRNA表達的影響(±s)

注:與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;治療組與假手術組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01;高低劑量組與對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01;高劑量組與低劑量組比較，●P＜0.05，●●P＜0.01。

組別 n E－選擇素mRNA假手術組 8 0.43 ±0.07＊＊模型組 8 1.61 ±0.14對照組 8 1.28±0.10＊＊△△低劑量組 8 1.42±0.12＊＊△△#高劑量組 8 1.24 ±0.10＊＊△△●●

結果表明，與模型組比較，局灶性腦缺血48h時，假手術組E－選擇素mRNA的表達最低，差異具有統計學意義(P＜0.01);給予心腦通絡液和步長腦心通后，各治療組腦組織E－選擇素mRNA的表達均有不同程度降低，差異具有統計學意義(P＜0.01)，以高劑量組降低最為顯著，低劑量組與對照組比較差異具有統計學意義(P＜0.05);高劑量組與對照組比較差異具無統計學意義(P＞0.05)，與低劑量組比較差異具有統計學意義(P＜0.01);各治療組與假手術組比較，差異均具有統計學意義(P＜0.01)。

圖1 E選擇素目的基因和內參照β－actin電泳圖

3 討論

通過多年大量的臨床觀察，認為氣虛血瘀、腦絡閉阻為本病發病的主要病機，其機理為虛在肝腎，損在精氣血，因虛致瘀，瘀阻腦絡，中風乃作，中風乃本虛標實之證。且氣虛證候與瘀血證候貫穿病變之始終［3－4］。針對氣虛血瘀，腦絡閉阻的這一病機特點，我們采用補益氣血，活血化瘀為主要治法，選用心腦通絡液治療本病。方中君藥為黃芪，黃芪性甘，微溫，補氣升陽。《本草逢原》:“能通調血脈，流行經絡，可無礙于雍滯也”。太子參、菟絲子、當歸、水蛭四藥為臣藥，當歸甘辛，微溫，補血活血。《本草正》:“當歸，其味甘而重，故能補血，其氣輕而辛，故能行血，補中有動，行中有補，誠血中之氣藥，亦血中之圣藥……。”太子參性甘、微苦，補脾益氣。《飲片新參》:“補脾肺元氣，止汗，生津，定虛驚。”水蛭性咸，味苦平，破血逐瘀消癥。菟絲子性甘，味溫，補肝腎。川芎、赤芍、桃仁、紅花、地龍為佐藥。赤芍性苦，味微寒，歸肝經，涼血，散瘀。《本草綱目》:“赤芍散邪，能行血中之滯。”地龍性咸，味寒，通經活絡。川芎性辛，味溫，活血祛瘀。紅花性辛，味溫，活血通經。桃仁性苦甘，味平，活血化瘀。《本經逢原》:“桃仁入手、足厥陰血分，為血瘀血閉之專藥。苦以泄滯血，甘以生新血，畢竟破血之功居多。”

E－選擇素是誘導性粘附分子，TNF－α、IL－1或LPS均可刺激內皮細胞合成E－選擇素［5］，E－選擇素有介導活化的內皮細胞與中性粒細胞粘附的作用。E－選擇素介導的粘附作用既不依賴于白細胞的活化，也不需要白細胞整合素的參與。內皮細胞上E－選擇素可識別白細胞，介導活化，使白細胞穩定地粘附于內皮細胞，繼而遷移至血管外組織。Wang等［6］研究證實，E－選擇素mRNA在缺血側腦組織微血管的表達6h才開始出現，12h達高峰，可持續3～5天。E－選擇素主要在直徑為7.5～30μm的毛細血管前動脈和毛細血管后靜脈的內皮細胞表達。在缺血性腦損傷中發揮著重要作用。

本實驗結果顯示，與模型組相比，給予心腦通絡液和步長腦心通后，各治療組腦組織E－選擇素mRNA的表達均有不同程度降低，差異具有統計學意義(P＜0.01)，以高劑量組降低最為顯著，低劑量組與對照組比較差異具有統計學意義(P＜0.05);高劑量組與對照組比較差異無統計學意義(P＞0.05)。表明心腦通絡液可降低腦組織E－選擇素mRNA的表達，從轉錄水平降低腦組織E－選擇素mRNA的表達，減輕炎性細胞的聚集、浸潤，減輕炎癥和免疫反應，有效減輕局灶性腦梗死引起的缺血性損傷。

［1］ 吳限，陳鵬.心腦通絡液對腦梗塞大鼠腦組織凋亡基因Bcl－2、p53 的影響［J］.中醫藥信息，2011，28(4):64－65.

［2］ Zea － Longa E，Weinstein PR，Carlson，et al.Reversible middle artery occlusion without craniectomy in rats［J］.Stroke，1989，20(1):84 －91.

［3］ 朱慧淵.運用“治未病”理論防治腦中風探析［J］.中醫藥學報，2010，38(6):6 －8.

［4］ 鈔建峰，賈慧，孫風平.試述以“虛”為核心的中風病機觀［J］.中醫藥學報，2011，39(2):67 －68.

［5］ WillamG.Leukocyte responses to injury［J］.Arch Surg，2003，128(11):1260－1267.

［6］ Wang X，Feuerstein GZ.Induced expression of adhesion molecules following focal brain ischemia［J］.J Neurotrauma，1995，12:825 －829.