中國(guó)人群IL-1RN基因VNTR多態(tài)性與宮頸癌遺傳易感性關(guān)系的研究

黃加忠，李靖，楊學(xué)藝

淮陰衛(wèi)生高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校，江蘇 淮安 223300

宮頸癌是指發(fā)生在宮頸陰道部或移行帶的鱗狀上皮細(xì)胞及宮頸管內(nèi)膜的柱狀上皮細(xì)胞交界處的惡性腫瘤。在婦女腫瘤病中，宮頸癌的發(fā)生率僅次于乳腺癌。最近的全球資料顯示，在全世界婦女中，每年的新發(fā)病例數(shù)為460000，其中，80%病例發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家[1]。我國(guó)每年新發(fā)病例13.15萬(wàn)，約占世界宮頸癌新發(fā)病例的28.8%，經(jīng)過(guò)幾十年廣泛開(kāi)展婦科普查，宮頸癌的發(fā)病率及病死率降低了近68%[1]，但宮頸癌的患病率仍居我國(guó)婦女惡性腫瘤之首，且宮頸癌的發(fā)病正呈現(xiàn)一種年輕化趨勢(shì)。在20世紀(jì)90年代初，人類致癌類型乳頭狀瘤病毒（HPV）的持續(xù)感染被確定是宮頸癌發(fā)展的致病因素[2]。隨著時(shí)間的推移，一些研究注重風(fēng)險(xiǎn)因素在獲得持續(xù)的HPV感染或預(yù)浸潤(rùn)性病變向?qū)m頸癌發(fā)展方面的作用。文獻(xiàn)已經(jīng)證明，盡管HPV有致癌潛力，但它不足以導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生。盡管一些遺傳因素的作用已經(jīng)被強(qiáng)調(diào)，其潛在性仍需要探討。免疫因子對(duì)防止病原感染有重要作用，因此，預(yù)計(jì)對(duì)病毒相關(guān)疾病有很大影響，并可作為個(gè)體易感性的標(biāo)志物[3]。白細(xì)胞介素1受體拮抗劑（IL-1RN）是一種重要的免疫調(diào)節(jié)因子，與其他白細(xì)胞介素1家族成員（IL-1α和IL-1β）相競(jìng)爭(zhēng)，具有消炎作用的負(fù)調(diào)控作用。其表達(dá)通過(guò)免疫反應(yīng)導(dǎo)致促炎癥反應(yīng)信號(hào)傳輸?shù)慕Y(jié)束來(lái)避免細(xì)胞損害。前期研究已經(jīng)表明IL-1RN基因內(nèi)含子2的1個(gè)86bp的串聯(lián)重復(fù)序列（VNTR）多態(tài)性變化特點(diǎn)，而且IL-1RN等位基因2似乎與幾種疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)，包括多種癌癥以及病毒感染，最近兩位作者描述了多態(tài)性對(duì)宮頸癌的影響[4-5]。因此，本文以病例對(duì)照方法來(lái)研究在中國(guó)漢族人群中IL1RN VNTR多態(tài)性與宮頸癌發(fā)生的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 病例和對(duì)照

子宮頸病變組共有297名，年齡中位數(shù)在49歲（平均年齡49.1，標(biāo)準(zhǔn)差11.3），均為2010年1月～2012年10月來(lái)淮安市婦幼保健院及第二人民醫(yī)院就診的女性，進(jìn)一步病理組織學(xué)分類證實(shí)：37例為低級(jí)別上皮內(nèi)瘤樣變（LSIL），103例為高級(jí)別上皮內(nèi)瘤樣變（HSIL），157例浸潤(rùn)性宮頸癌（ICC）。健康對(duì)照組包括201例同期來(lái)這兩個(gè)醫(yī)院體檢且結(jié)果正常的女性，隨機(jī)選取的年齡中位數(shù)在47歲（平均年齡47.7歲，標(biāo)準(zhǔn)差14.1）。根據(jù)“赫爾辛基宣言”，試驗(yàn)由醫(yī)院倫理委員會(huì)通過(guò)，所有受試者均寫(xiě)了知情同意書(shū)。

1.2 樣本處理和基因分型

外周血標(biāo)本用含EDTA的抗凝管通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)靜脈穿刺技術(shù)采集，DNA用鹽析的方法從白細(xì)胞中提取。對(duì)IL-1RN可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列（VNTR）多態(tài)性通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）進(jìn)行基因分型，前向引物5'-CCCCTCAGCAACACTCC-3'和反向引物5'-GGTCAGAAGGGCAGAG-3'。用含5%溴化乙錠的3%瓊脂糖凝膠（Cambrex Bio Science Rockland Inc, USA）對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析。鑒定以下片段：410bp（等位基因 1），240bp（等位基因 2），325bp（等位基因 3），500（等位基因4）和595bp（等位基因5）。所有可能的基因型分 別 為 A1*A1、A1*A2、A1*A3、A1*A4、A1*A5、A2*A2、A2*A3、A2*A4、A2*A5、A3*A3、A3*A4、A3*A5、A4*A4、A4*A5和A5*A5。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

基因型分析用統(tǒng)計(jì)軟件包（SPSS16.0）通過(guò)卡方檢驗(yàn)（χ2）比較分類變量以5%的顯著性進(jìn)行評(píng)估。統(tǒng)計(jì)分析IL1-RN等位基因純合子（A2*A2 vs非A2*A2）的比值比（OR）和95%可信區(qū)間（CI）衡量基因型與疾病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)聯(lián)。

2 結(jié)果

2.1 IL-1RN VNTR 基因型在正常對(duì)照組和宮頸病變組中的分布頻率

在本項(xiàng)研究中，不可能鑒別的基因型如下：A2*A5、A3*A3、A3*A4、A3*A5、A4*A4、A4*A5和 A5*A5， 見(jiàn) 表1。基因型的分布表明，在宮頸病變或癌變患者中，19.5%的患者A2*A2是純合子，而對(duì)照組中只有11.9%，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異（P=0.016）。

2.2 IL-1RN VNTR 基因型與宮頸癌進(jìn)展的關(guān)系

根據(jù)組織學(xué)資料把病人分組后，結(jié)果表明IL-1RN VNTR 基因型在對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組（即有LSIL或HSIL的病人）相比沒(méi)有顯著性差異（P>0.050）；但可能會(huì)增加近2倍的宮頸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR=1.92；95%CI：1.09～3.14；P=0.013)。盡管如此，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析還表明IL1-RN A2*A2純合子患者的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)要高出HSIL患者近2倍（OR=1.94；95%CI：1.12～3.30；P=0.017)。

表1 IL-1RN VNTR 基因型的分布頻率

表2 IL-1RN VNTR 基因型與宮頸癌進(jìn)展的關(guān)系

3 討論

宮頸癌幾十年來(lái)一直是全世界研究最多的惡性腫瘤之一。雖然致癌因素HPVs的感染被證實(shí)是宮頸癌發(fā)展的必然原因，但并不是所有被感染的女性都會(huì)發(fā)生癌癥。持續(xù)感染HPVs被證實(shí)是正常上皮細(xì)胞向前期侵害性損傷，并且最后向侵襲性宮頸癌發(fā)展的關(guān)鍵因素[6]。

文獻(xiàn)已經(jīng)揭示HPV感染是受環(huán)境和宿主自身情況影響的，比如飲食和宿主免疫狀態(tài)，這將導(dǎo)致免疫抑制狀態(tài)。因此，關(guān)于遺傳因子在免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)作用的研究能為HPV感染易感性提供重要數(shù)據(jù)。白細(xì)胞介素1超家族包括了在宿主-病原體免疫反應(yīng)中的一些重要細(xì)胞因子。然而IL-1α和IL-1β有強(qiáng)大的促炎作用，IL-1受體拮抗劑（IL-1RN）導(dǎo)致促炎信號(hào)的終止，最終導(dǎo)致免疫反應(yīng)的終止。事實(shí)上，很多研究已經(jīng)報(bào)道了IL-1RN水平是有效地預(yù)示宿主免疫反應(yīng)，因?yàn)槠渌皆谘装Y反應(yīng)的最后一步會(huì)升高。

在本研究中，我們探討了IL-1RN基因VNTR多態(tài)性在宮頸癌發(fā)展方面的作用。數(shù)據(jù)提示IL-1RN等位基因2純合子能夠增加宮頸癌發(fā)展的危險(xiǎn)性。我們?cè)贚SIL或者HSIL病人中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有意義的結(jié)果，可能是因?yàn)椴±龜?shù)較少，但我們的數(shù)據(jù)指出在HSIL/ICC中增加了將近2倍的發(fā)展危險(xiǎn)性。這個(gè)數(shù)據(jù)是和其他文獻(xiàn)相一致的，因?yàn)橐呀?jīng)證實(shí)在LSILs中損傷自動(dòng)修復(fù)時(shí)HPV會(huì)頻繁感染。根據(jù)文獻(xiàn)，攜帶IL-1RN等位基因2的循環(huán)IL-1RN水平會(huì)比較高，因此我們假定這些狀態(tài)將會(huì)縮短免疫反應(yīng)，這有利于HPV持續(xù)感染和損傷向癌癥發(fā)展[7]。

綜上所述，在中國(guó)人群中IL-1RN等位基因2可能與縮短免疫反應(yīng)導(dǎo)致HPV易感性增加和宮頸癌發(fā)展有關(guān)。因此，IL-1RN VNTR多態(tài)性可能是宿主免疫反應(yīng)和腫瘤易感性相關(guān)病毒的一個(gè)有效標(biāo)記。但我們對(duì)于基因型與IL-1RN血清水平的相關(guān)性和其在宮頸癌致癌性方面的作用需要進(jìn)一步深入研究。

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