P16和Ki-67在宮頸鱗癌癌前病變中的表達及其診斷價值

崔芳瑜，李青，黃文斌

1. 南京迪安醫(yī)學(xué)檢測中心 病理室，江蘇 南京 210010；2. 南京市婦幼保健院 病理科，江蘇 南京 210000；3. 南京市第一醫(yī)院 病理科，江蘇 南京 210006

0 前言

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其中最常見的組織學(xué)類型是鱗狀細(xì)胞癌。已有的研究表明，宮頸鱗狀細(xì)胞癌是由高危型人類乳頭狀瘤病毒（HPV）感染所致，導(dǎo)致宮頸鱗狀上皮發(fā)生上皮內(nèi)瘤變，并最終發(fā)展為浸潤性鱗狀細(xì)胞癌。本文應(yīng)用免疫組化方法研究宮頸癌前病變中P16和Ki-67表達，探討它們在宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變診斷和分類中的價值。

1 材料和方法

1.1 臨床資料

收集南京市第一醫(yī)院和南京市婦幼保健院2009年1～10月門診宮頸活檢病例51例，年齡28～49歲，平均43.7歲。51例宮頸活檢病例中慢性宮頸炎10例、低級別CIN16例、高級別CIN25例。所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋。

1.2 方法

采用免疫組化EnVision法。切片常規(guī)脫蠟，梯度酒精脫水，剩余步驟在自動免疫組化儀（Labvision）上進行。免疫組化具體染色步驟按照儀器操作說明書進行，抗原修復(fù)均采用高壓鍋高溫修復(fù)。鼠抗人單克隆抗體P16和Ki-67為Novocarstra公司產(chǎn)品，與檢測試劑盒均購于福州邁新生物公司。以已知陽性片分別作P16和Ki-67陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷

P16表達于細(xì)胞核或胞核伴胞質(zhì)，Ki-67定位于細(xì)胞核，見圖1～4。

圖1 P16在宮頸低級別CIN中的表達，EnVision法×200

圖2 P16在宮頸高級別CIN中的表達， EnVision法×100

圖3 Ki-67在宮頸低級別CIN中的表達，EnVision法×100

圖4 Ki-67在宮頸高級別CIN中的表達，EnVision法×200

P16根據(jù)陽性細(xì)胞分布而分為陰性、弱陽性（<25%）和強陽性（>25%）。Ki-67表達根據(jù)陽性細(xì)胞在上皮的分布而分為陰性、低表達（<1/3）、中等表達（1/3～2/3）和高表達（>2/3）。為了分析方便，我們將Ki-67為中等表達及以上者判為陽性，P16>25%作為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理。各組資料的比較采用χ2檢驗和Fisher精確概率檢驗。

2 結(jié)果

2.1 宮頸各組病變中P16和Ki-67的表達

由表1可知，P16在慢性宮頸炎中表達為陰性或局灶性表達，而在低級別CIN中有4例表達陽性，高級別CIN中陽性表達者20例，陽性率分別為25%和80%。P16在高級別CIN中的表達明顯高于低級別CIN和慢性宮頸炎，差異有顯著性（χ2=12.159，P=0.000；P=0.000），而P16在低級別CIN和慢性宮頸炎中的陽性表達率沒有差異（P=0.136）。Ki-67在慢性宮頸炎中主要表達于基底細(xì)胞，隨著宮頸病變的加重，Ki-67陽性細(xì)胞分布向表面上移，高級別CIN均超過上皮1/3，Ki-67在高級別CIN中的陽性表達率明顯高于低級別CIN和慢性宮頸炎（χ2=41.000，P=0.000；P=0.000），而在低級別CIN和慢性宮頸炎中表達無差異（P=0.385）。

表1 宮頸各組病變中P16和Ki-67的表達

2.2 P16和Ki-67單個或聯(lián)用在區(qū)分低級別CIN和慢性宮頸炎的價值

由表2可知，P16在區(qū)分低級別CIN和慢性宮頸炎的敏感性和特異性分別為25%和100%，Ki-67在區(qū)分低級別CIN和慢性宮頸炎的敏感性和特異性分別為0%和90%，P16在區(qū)分低級別CIN和慢性宮頸炎的敏感性和特異性雖然高于Ki-67，但差異無顯著性（P=0.101；P=1.000）。P16/Ki-67聯(lián)合檢測在區(qū)分LSIL和宮頸慢性炎的敏感性和特異性分別為25%和90%，敏感性與P16相當(dāng)，但＞Ki-67，特異性與Ki-67一樣，但略＜P16。

表2 P16和Ki-67在區(qū)分慢性宮頸炎和低級別CIN的價值

2.3 P16和Ki-67單個或聯(lián)用在區(qū)分低級別CIN和高級別CIN的價值

從表3可以看出，P16在區(qū)分高級別CIN和低級別CIN中的敏感性和特異性分別為80%和75%，而Ki-67在區(qū)分高級別CIN和低級別CIN中的敏感性和特異性均為100%，雖然Ki-67＞P16，但差異無顯著性（P＞0.05）。P16和Ki-67聯(lián)合檢測對區(qū)分高級別和低級別CIN的敏感性和特異性分別為100%和75%，與P16和Ki-67單用沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

表3 P16和Ki-67在區(qū)分高級別CIN和低級別CIN的價值

3 討論

宮頸癌是發(fā)展中國家最常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，已有的研究表明宮頸癌主要是由高危型HPV導(dǎo)致宮頸鱗狀上皮發(fā)生異型增生并進而發(fā)展為浸潤性癌。研究顯示在宮頸癌發(fā)生過程中涉及到多種抑癌基因的失活或癌基因的激活。P16基因位于人染色體9p21上，是第一個發(fā)現(xiàn)的直接參與細(xì)胞周期調(diào)控的抑癌基因。正常情況下P16基因產(chǎn)物通過與CDK4/6結(jié)合抑制細(xì)胞周期進展，因而阻止了Rb基因的磷酸化和活化。P16在宮頸CIN診斷中的價值國內(nèi)外已有較多研究，這些研究發(fā)現(xiàn)P16蛋白不僅在宮頸腫瘤性上皮細(xì)胞表達增加，而且與高危型HPV感染和CIN的程度密切相關(guān)[1-3]。我們的實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)慢性宮頸炎中P16不表達或散在表達，隨著宮頸上皮內(nèi)瘤變的加重，P16陽性表達率增加，高級別CIN中P16蛋白陽性表達率可達到80%。國外一些研究顯示高級別CIN中P16陽性表達率近90～100%，但有些研究結(jié)果卻顯示有15～30%高級別CIN不表達P16[4]。這些結(jié)果的差異可能與P16抗體的克隆號和陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)不一致有關(guān)。在人體其他組織器官惡性腫瘤中研究發(fā)現(xiàn)P16蛋白表達缺失或降低，在宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變和鱗狀細(xì)胞癌中異常表達可能是HPV E7導(dǎo)致Rb功能失活，繼發(fā)性的負(fù)反饋回路所致[5]。我們的研究結(jié)果也進一步證實了P16蛋白的檢測可有助于CIN診斷和分級。

Ki-67 的表達出現(xiàn)于除G0、G1早期以外的細(xì)胞周期中，并且有絲分裂后迅速降解或失去抗原決定簇，因此，被認(rèn)為能較可靠全面地反映細(xì)胞群體增殖活性的客觀指標(biāo)。研究表明，它與很多惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān)。國外多項研究發(fā)現(xiàn)正常情況下Ki-67表達于成熟宮頸鱗狀上皮的基底細(xì)胞和基底旁細(xì)胞，但隨著宮頸癌前病變的加重，Ki-67表達向上皮表面上移，Ki-67在鱗狀上皮上2/3層表達被認(rèn)為提高了CIN診斷的特異性[6]。國內(nèi)李曉玲等[7]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ki-67表達在宮頸良性病變中明顯低于惡性病變。本文的研究結(jié)果顯示Ki-67在慢性宮頸炎中主要表達于基底細(xì)胞，而在高級別CIN中Ki-67表達均超過上皮的1/3，也進一步表明Ki-67在宮頸CIN診斷中的價值。

本研究結(jié)果顯示P16在區(qū)分慢性宮頸炎和低級別CIN中的敏感性和特異性雖＞Ki-67，而在區(qū)分低級別與高級別CIN中，其敏感性和特異性均＜Ki-67，但差異均無顯著性，提示P16在宮頸CIN診斷中的價值與Ki-67基本相當(dāng)。P16和Ki-67聯(lián)合檢測對慢性宮頸炎和低級別CIN的敏感性和P16一致，但＞Ki-67，其特異性雖＜P16，但和Ki-67相一致。同樣，在區(qū)分低級別與高級別CIN中P16和Ki-67聯(lián)合檢測的敏感性與Ki-67一致，＞P16，特異性與P16一樣，但＜Ki-67，但均未達到統(tǒng)計學(xué)意義，提示P16和Ki-67聯(lián)合檢測對慢性宮頸炎和低級別CIN、低級別CIN和高級別CIN的鑒別診斷與單用P16或Ki-67相同，可能與我們研究的病例數(shù)相對較少有關(guān)，尚需要積累更多的病例進行深入地研究。根據(jù)本文的實驗結(jié)果，結(jié)合國內(nèi)外相關(guān)文獻的報道，我們認(rèn)為P16聯(lián)合Ki-67檢測可有助于宮頸CIN的診斷和分級。

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