維護后比測法在血球分析儀中的應用

李一龍，林金南

南京醫科大學附屬無錫人民醫院醫學檢驗科，江蘇 無錫 214023

0 前言

近年來，筆者參考相關文獻[1-3]，應用健康人新鮮血標本對科內不同品牌的血球分析儀進行定期的溯源性校準比對，并對各分析儀進行了校準前后的分析與比對，經應用觀察，此比對新方法已取得較好效果。

1 材料與方法

1.1 參比血球分析儀

儀器：以2008年購入的1臺LH750血球分析儀（美國Beckman Coulter公司），作為參比的基準儀器。試劑：稀釋液、溶血素、標準品S-cal（批號：4756）、全血血細胞質控物5Cplus（批號：高值870700、中值880700、低值860300）等進口配套產品。本校準品S-cal的紅、白細胞測量可以用ZBI方法溯源至A級，測量程序為國際公認，用于確定分量的參考值。

1.2 待比對儀器

儀器：2008年購入的1臺XS-800i NO:1173血球分析儀（日本SYSMEX株式會社）為待評的比對儀器。試劑：配套試劑、清洗液Cellclean、校準物SCS-1000（批號：10390525）、質控物e CHECK質控物（日本SYSMEX株式會社，高、中、低3個水平）。SCS-1000具有國際常規參考測量程序溯源鏈。

1.3 比對前準備

（1）溯源與校準。對各血球分析儀進行相應的保養，如管路清洗、維護儀器的硬件裝置，包括儀器的氣路、光路系統等，必須符合相關的要求，然后測定試劑的空白，本底必須符合要求。所用參比的基準儀LH750血球分析儀用S-cal標準品（Beckman Coulter公司），定期按校準程序由Beckman Coulter公司工程師進行儀器溯源性校準[4]，校準結果與靶值作比對，各校準結果與靶值之誤差在允許范圍內，以示校準到位。

（2）精密度。① 批內精密度：用配套原裝低、中、高3份定值質控品，每份連續重復測定11次，統計后10次各項目的變異系數CV值；② 日間精密度：用配套原裝低、中、高3份定值質控品，每份連續重復測定20天，統計各項目的變異系數CV值。

（3）線性。用NCCLS EP6-A 文件有關程序[5]，使用高濃度或濃縮標本，與配套稀釋液按比例稀釋，至少各參數配制5種以上濃度，每種濃度并作2次隨機檢測。將所測精密度在允許范圍內的結果作線性回歸分析，尋出各項目線性范圍。

（4）攜帶污染率。采用國際血液學標準化委員會制定的程序[6]ICSH (International Committee for Standardization in Hematology)，將高濃度的樣本連續檢測（H1、H2、H3）后緊接進行 3次低濃度（L1、L2、L3）測定，再根據式(1)計算攜帶污染率，

（5）總不確定度。用配套定值質控品低、中、高3份，應用NCCLS EP10-A2文件有關程序[7]對LH750血球分析儀作總不確定度評價。各參數應低于NCCLS EP10-A2文件允許總不確定度。

（6）校準判斷標準。 根據第3版《全國臨床檢驗操作規程》[8]進行判斷（表1）。各項目參數均值與定值的差異全部≤表1中的第1列數值時，儀器不需進行調整，記錄檢測數據即可；若各參數均值與定值的差異大于表中的第2列數值時，需請維修人員核查原因并進行處理；若各參數的均值與定值的差異在表中第1列與第2列數值之間時，需對儀器進行調整。

表1 中華醫學會檢驗分會校準判斷標準（百分數差異）

1.4 比對方法的執行

參考按NCCLS EP9-A2的比對方法[9]。作各參數的回歸分析、相關性分析，并作線性圖、散點圖以及偏倚圖。

1.5 比對判斷標準

結 果 應 滿 足 精 密 度 ：WBC、RBC、HGB、HCT、PLT檢 測 的 CV均 ＜ 2%；攜 帶 污 染 率 ：WBC、RBC、HGB、HCT、PLT的交叉污染率均＜2%；總重復性好：除PLT為 外，WBC、RBC、HGB、HCT檢 測 的 CV均 ＜ 2%；線性范圍好：WBC、RBC、HGB、HCT、PLT檢測的相關系數接近1.0。

以NCCLS標準文件EP9-A2制定的相關系數r＞0.975作為比對判斷規則，以CLIA’88對室間質控評估的允許誤差為依據，系統誤差(Se)≤允許誤差的1/2為臨床可接受水平，即不同檢測系統間的測定結果具有可比性。CLIA’88 1/2允許誤差范圍：WBC為7.5%，RBC為3%，HGB為 3.5%，PLT為 12.5%，HCT為 3%；CLIA’88 1/4允 許 誤 差 范 圍 ：WBC為 3.75%，RBC為 1.5%，HGB為1.75%，PLT為6.25%，HCT為1.5%[10]。若有較多的相關參數超出上述控制界限，則提示儀器需校準或需維修。

2 結果

2.1 結果比較

比對前，本室參比血球分析儀LH750批內、日間、總不確定度檢測全在限定要求內，見表2。比對前，參比LH750與待比SYSMEX XS 800i NO:1173的精密度比較，見表3。

2.2 攜帶污染率檢測

維護前，WBC、RBC、HCT、HGB、PLT分別為：1.58%、-0.44%、0.77%、0.87%、1.1%；維護后，0.99%、0.69%、0.74%、0.25%、0.87%，均小于公司設置界限2%、2%、2%、2%、2%。

2.3 線性回歸分析

線性：各項目測定濃度（Y）與稀釋倍數（X）進行線性回歸分析，對回歸系數作t檢驗，各項目濃度在：白細胞（0.3～300）×109/L，n=10；紅細胞（0.15～8.70）×1012/L，n=9；血色素（1～260）g/L，n=11；血小板（8～2461 ）×109/L，n=8時，P均>0.05，非線性統計有理由認為無顯著性意義。

表2 高、中、低3種濃度質控品 精密度、不確度度測試

表3 比對前 不同儀器測定精密度比較

表4 LH750與XS-800i NO:1173儀器測定結果相關性比較

表5 校正前 參比儀器與比對儀器800i 測定結果相對偏差%

表6 校正后 參比儀器與比對儀器800i 測定結果相對偏差%

圖1 校正后750與800i比對的相關（以WBC為例）

圖2 兩儀器測定結果比對偏倚（以WBC為例）

圖3 校正后 參比儀器與比對儀器800i 測定結果相對偏差%

3 討論

由表4可見，LH750與XS 800i NO:1173校準前后的比對中，WBC、RBC、HGB、HCT、PLT 5項指標的相關系數r都＞0.975，在醫學決定水平處的系統誤差（Se）均小于規定的允許總誤差（Ea）范圍。然而，由表5、表6可見，血球分析儀XS-800i NO:1173，校準前比對：這40個比對偏倚值中，僅有29個值（29/40，占72.5%）位于美國CLIA88比對允許誤差的標準內；校準后比對：這40個比對偏倚值中，有39個值（39/40，占97.5%）位于美國CLIA88比對允許誤差的在控標準內。顯然，通過校準與比對后，各參數因不同儀器所測的差異得到了有效地縮小。

通過比對工作，我們認識到：① 與應用前比較，工作人員漸漸養成了嚴格遵守《全國臨床檢驗操作規程》、《標準操作程序SOP》進行操作，逐漸提高了對血球分析檢測前、中、后的質量監控的重視程度。② 與其他分析儀比較，本室LH750血球分析儀測定過程的線性、精密度、準確度和攜帶污染率等，均達國內、國際先進水平。所測結果與浙江杭州王文娟等[1]結果基本相近。③ 通過比對，本科室LH750血球分析儀的“不穩定的性能特征”得到有效的評估：如醫學上偏倚值、最佳條件下的測定誤差（OCV）、已知值的質控物在常規檢驗條件下的誤差（RCVK）、未知值的質控物在常規檢驗條件下的誤差（RCVU）、重要誤差的發生率等。儀器檢測的準確性也得到了提高，使各血球分析儀檢測參數之間具有了可比性與溯源性。例如，2011年4月和7月，2次出現2臺儀器檢測結果不一致。于是啟用了比對程序，及時作了校準與比對，調整檢測參數，糾正了因儀器維修等而產生的儀器偏倚。④ 通過比對，所作散點圖、偏倚圖、線性圖等具有簡明直觀、易于分析觀察等優點。質控者根據圖中色點運行軌跡，便可以迅速判斷出這個時期內各項目檢測的狀態，便于綜合分析、及時發現問題，實行全面質量管理。⑤ 血球分析儀間的比對工作，在室內、室間質量控制工作中，在鞏固“省參比實驗室”“省重點實驗室”、貫徹落實衛生部的《醫療機構臨床實驗室管理辦法》等方面都起到了積極作用。同時，連續數年，我科取得了衛生部、江蘇省、無錫市血球分析室間質控的優秀成績。

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