噴他脒對人卵巢癌CAOV3細胞的抑制作用研究

吳巖印，張明月，丁 虹，孫國棟，唐艷超，楊 敏，范茂丹

(本文編輯:張仲書; 英文編輯:王建東)

噴他脒是一種抗肺孢子蟲類藥物，國外研究報道噴他脒對腫瘤細胞亦有殺傷抑制作用［1］。噴他脒通過雙重抑制細胞有絲分裂蛋白和肝再生磷酸酶－2(phosphatase of regenerating liver，PRL－2)，降低腫瘤生長活性，減少腫瘤新生血管生成，使細胞喪失增殖能力。本研究通過觀察不同濃度的噴他脒對上皮性卵巢癌CAOV3細胞株的影響，探討其抗腫瘤的可能性。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 ①卵巢癌CAOV3細胞株(由浙江大學醫學院附屬婦產醫院贈送);②噴他脒(批號:X02040000217，河南新鄉制藥公司)。

1.2 儀器與試劑 噻唑藍(MTT)(Sigma)，二甲基亞砜 (dimethyl sulfoxide，DMSO)(Sigma)，RPMI－1640培養液 (Thermo)，胎牛血清(Gibco)，CO2細胞培養箱(Thermo Scientific HERA)。

1.3 實驗方法

1.3.1 細胞培養 用含10%滅活小牛血清、青霉素100IU/ml和鏈霉素100IU/ml的RPMI－1640培養液培養細胞，置37℃、5%CO2培養箱內，用0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)消化傳代，選用對數生長期細胞，調整細胞懸液濃度，分別于96孔板，每孔加100 μl，5000 ～6000 個/孔。置 37℃、5%CO2恒溫箱培養24 h。

1.3.2 噴他脒儲存液的配制 稱取噴他脒300 mg，加入5 ml二甲基亞砜，－20℃ 保存備用。

1.3.3 在細胞樣品中加入不同濃度的噴他脒 實驗組分別為噴他脒 0.10 μmol/L、1.00 μmol/L、10.00 μmol/L、100.00 μmol/L 組，同時設置空白組(培養基、MTT、DMSO)，對照組(細胞、噴他脒溶解介質、培養液、MTT、DMSO)，每組6個復孔，并分別培養 24 h、48 h、72 h。小心吸去上清，加入80 μl新鮮RPMI 1640培養液，再加入20μl MTT溶液，繼續培養4 h。吸掉上清，每孔加入150μl DMSO，置搖床上低速振蕩10 min，使結晶物充分溶解。使用酶標儀測定492 nm處各孔的吸光值。

1.3.4 計算抑制率 抑制率 =［(對照組 －空白組)－(實驗組－空白組)］/(對照組－空白組) ×100%。

1.4 統計學處理 采用SPSS 16.0軟件包進行統計分析，檢測數據以均數±標準差表示，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

不同濃度的噴他脒處理卵巢癌CAOV3細胞后，細胞生長受到以時間及濃度依賴方式的抑制。其中低濃度的噴他脒(0.10 μmol/L、1.00 μmol/L)作用24 h后只表現出對細胞的生長存在著輕微的抑制作用。但隨著噴他脒濃度的增加，卵巢癌CAOV3細胞的生長受到不同程度的抑制，表現為細胞生長抑制率明顯上升。而且高濃度組噴他脒的抑制率與低濃度組噴他脒的抑制率差異具有統計學意義(P＜0.05)，作用不同時間各組間抑制率差異也具有統計學意義(P＜0.05)。見圖1。

圖1 噴他脒對CAOV3細胞生長抑制實驗

3 討論

近年，臨床卵巢癌的治療已有許多進展，但進展期卵巢癌的死亡率仍超過女性其他生殖部位腫瘤之和，因此尋找治療卵巢癌的新藥正在成為研究的熱點問題。

噴他脒又稱戊烷脒(Pentamidine)，是一種抗寄生蟲藥，為芳香雙脒類化學合成藥物，半衰期為0.5～1 h。噴他脒可用于治療利士曼原蟲［2］、艾滋病卡式肺囊蟲感染等疾病，目前為治療引發卡式肺囊蟲繼發性肺炎的首選藥，被廣泛應用于艾滋病的治療，尤其是艾滋病合并卡式肺囊蟲感染的患者［3－4］。目前已有學者發現噴他脒有抗腫瘤作用［5］。

在體外試驗中，噴他脒有選擇性地殺傷癌細胞的能力［6－8］。也有實驗證實噴他脒可以在體外抑制包括惡性黑色素瘤、前列腺癌、直腸癌和乳腺癌等多種腫瘤細胞的增值能力［9－11］。

這些體內、體外的數據說明噴他脒可能是一個新的有效的抗腫瘤藥物。本研究從體內體外兩方面證實了噴他脒對卵巢癌細胞的抗腫瘤作用，這個結果為噴他脒治療卵巢癌提供了一定的實驗依據。

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