黔曲發酵工藝研究

余良忠，文萍，李梅

(1.江西省中醫藥研究院，江西 南昌 330046;2.江西省宜黃縣中醫院，江西宜黃344400)

黔曲發酵工藝研究

余良忠1，文萍1，李梅2

(1.江西省中醫藥研究院，江西 南昌 330046;2.江西省宜黃縣中醫院，江西宜黃344400)

目的建立黔曲發酵工藝的控制技術。方法用氣相色譜法測定黔曲發酵樣品中乙醇的含有量，考察其主要影響因素。結果最佳發酵工藝參數為溫度約30℃，加水量約700mL，發酵時間4～5 d。結論發酵工藝參數和檢測指標量化，檢測方法操作簡便，可靠，切實可行。

黔曲;發酵工藝;乙醇;氣相色譜

黔曲載于部頒標準·中藥成方制劑第2冊(WS3-B-0465-90)，具有健脾開胃，理氣導滯，清暑化濕的功效，用于食積飽脹，胸悶腹痛，不思飲食，暑濕感冒。黔曲由二十四味中藥材經發酵制備而成，其傳統發酵程度判斷指標—以主觀嗅覺嗅酒香氣，缺乏具體的客觀量化指標，對結果判斷存在較大的差異性，有關黔曲的發酵工藝以及控制方法的相關研究均尚未見報道。本課題采用現代分析技術和儀器，對黔曲發酵工藝中的量化指標進行篩選研究，建立以乙醇量為量化指標的黔曲發酵工藝控制技術。

1 儀器與試藥

PS—240中藥破碎機(杭州富陽康華機械設備有限公司)，GC—2010氣相色譜儀(日本島津);AG—135電子天平(梅特勒-托利多);酒曲(安琪酵母股份有限公司);黔曲，試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 檢測指標以內標法氣相色譜法測定發酵樣品中乙醇的含有量作為指標。

2.2 供試品溶液的制備及測定

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗毛細管柱(30QC3/AC10，內徑0.25 mm)，進樣口溫度150℃，檢測器溫度150℃，柱溫110℃。理論板數按正丙醇峰計算應不低于8 000。

2.2.2 校正因子測定精密量取無水乙醇4、5、6 mL，分別置100 mL量瓶中，分別精密加入正丙醇(內標物)5 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取上述3種溶液各適量，注入氣相色譜儀，分別連續進樣3次，測定峰面積，計算校正因子。

2.2.3 供試品溶液的制備取樣品約10 g，精密稱定，加水50 mL，充分振搖混合，離心，取上清液25 mL置100 mL量瓶中，精密加入正丙醇5 mL，加水稀釋至刻度，即得。

2.2.4 測定法取各供試品溶液1 μL，注入氣相色譜儀，測定，計算。

2.3 加水量考察曲類制劑發酵藥材加水拌勻時，一般以完全潤濕為宜，本次研究對加水量出現偏干(每個處方加水約600 mL)、適中(每個處方加水約700 mL)和偏濕(每個處方加水約800 mL)的3種情況進行了考察，每組取5個處方量藥材進行發酵試驗，發酵溫度約30℃，分別采集第0天至第5天的的樣品進行含乙醇量測定。實驗結果見表1、圖1。從表1、圖1中可以看出，發酵到第2天含乙醇量開始明顯增加，第4天發酵基本完全，而在加水量較少的情況下，發酵效果較差，延長發酵時間也沒有作用，因此，在加水拌勻藥材時，以保證充分潤濕為宜，每個處方加水量在700 mL左右。

表1 不同加水量發酵含乙醇量測定結果(10－3mL·g－1)

2.4 發酵溫度考察選取約10(10～15)℃、20(20～25)℃、30(30～35)℃、40(40～45℃)4個不同溫度進行比較試驗，每組取5個處方量藥材進行發酵試驗，分別采集第0天至第6天的的樣品進行含乙醇量測定。結果見圖2、表2。

圖1 不同加水量含乙醇量和發酵時間關系圖

圖2 含乙醇量和發酵時間關系圖

表2 不同溫度發酵含乙醇量測定結果/(10－3mL·g－1)

溫度考察試驗結果表明，溫度對發酵樣品中的含乙醇量影響較大，在10℃左右時，無法進行發酵，溫度過高也不利于發酵，發酵溫度須控制在30℃左右為宜。

3 討論

文獻報道發酵過程包括根霉菌糖化和酵母菌發酵兩個步驟，根霉菌能產生糖化酶，將淀粉水解為葡萄糖，且在糖化過程中還能產生少量的有機酸(如乳酸);酒曲中的酵母菌，則利用根霉菌糖化淀粉所產生的糖酵解為酒精［1-10］。因此，選取黔曲發酵過程中產生的乙醇作為量化指標進行氣相色譜法測定，考察影響發酵工藝的3個因素發酵溫度、藥材加水量及發酵時間和樣品中含乙醇量的相關性。

結果顯示，溫度和加水量是黔曲發酵工藝的主要影響因素，發酵前后樣品中的含乙醇量有明顯的變化，可以用氣相色譜法測定發酵樣品中的含乙醇量作為黔曲發酵工藝控制技術的量化指標。試驗研究表明，溫度是黔曲發酵工藝的關鍵因素，溫度偏低，發酵效果較差，延長發酵時間也沒有作用，過高的溫度也不利于發酵，適宜的發酵溫度在30℃左右，這和相關研究文獻是一致的［6-12］;加水量是影響黔曲發酵的主要因素，加水量不夠，藥材粉偏干，相對濕度小，不利于發酵，水量過大則藥材發黏，易霉爛，且延長了干燥時間;發酵時間是相對次要因素，發酵充分后(大約4～6 d)，含乙醇量不再增加，繼續發酵黔曲表面則會長出白毛;黔曲發酵溫度應控制在30℃左右，藥材粉加水混合時每個處方加水量約700 mL以保證藥材充分潤濕，發酵時間在4～5 d為宜。

黔曲部頒標準中規定酒曲的用量為冬、春季用1.25 g，夏、秋季用1.56 g，試驗考察中，30℃(夏)和20℃(秋)用量為每個處方1.25 g，10℃(冬)用量為每個處方1.25 g，從發酵樣品中含乙醇量來看，在自然狀態下，在夏季里黔曲的發酵效果最好，但黔曲成品的臨床效用是否與此相關，還有待進一步的研究。

［1］張東亮，王啟軍，張水華．生料釀酒工藝概述［J］．釀酒，2006，33(6):46-48．

［2］榮瑞金，李祖明．中國酒曲微生物研究進展［J］．中國釀造，2009，28(6):5-8．

［3］王世強，鄭揚云.2種地方酒曲主要微生物特性的比較研究［J］．中國釀造，2010，29(3):141-142．

［4］劉義剛．生料糖化與釀酒研究概述［J］．釀酒科技，2000，21(5):40-43．

［5］王懷能，王輝．生淀粉糖化酶的研究［J］．釀酒科技，2000，21(3):32-34．

［6］肖冬光，鄒海晏．生料釀酒技術有關問題探討［J］．釀酒科技，2000，21(6):39-42．

［7］李祥，呂嘉櫪，李小奎．生料釀酒工藝技術研究［J］．釀酒科技，2002，23(6):42-44．

［8］鄒東恢，梁敏，馬翠翠．生料釀酒技術的應用與開發［J］．釀酒科技，2005，26(6):61-64．

［9］何丹，肖更生，吳繼軍，等．生料釀酒技術的研究與應用［J］．現代食品科技，2007，23(10):93-96．

［10］李健容，蔡愛群．民間傳統酒曲主要微生物的分離及鑒定［J］．釀酒科技，2007，28(5):111-115．

［11］葉定江．中藥炮制學［M］．上海:上海科學出版社，1996:261．

［12］江西省食品藥品監督管理局．江西省中藥飲片炮制規范［S］．上海:上海科學技術出版社，2008:573．

R944

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1001-1528(2012)10-2041-02

2011-07-04

江西省衛生廳中醫藥科研科題(2010A106)

余良忠(1975—)，男，副研究員，從事中藥質量控制技術研究。Tel:(0791)88501125，E-mail:yczp4@yahoo．cn