檸檬總提取物對(duì)正常大鼠及SHR血壓、血脂影響的實(shí)驗(yàn)研究

李軍暉，劉曉帥，王果，劉孝林，曾南

檸檬（Citrus limon）又名檸果、洋檸檬、益母果，屬蕓香科(Rutaceae)柑橘屬常綠小喬木。我國(guó)栽培的檸檬主要分布在長(zhǎng)江以南，以四川栽培最多。四川省資陽(yáng)市安岳縣是檸檬之鄉(xiāng)，也是全國(guó)唯一的檸檬商品生產(chǎn)基地縣。檸檬含有豐富的檸檬酸、Vc 、VB 、VE 、黃酮類(lèi)、揮發(fā)油、橙皮苷、多種礦物質(zhì)及微量元素等，是一種營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值都極高的水果，具有殺菌、美容、穩(wěn)定情緒、提神、潤(rùn)喉、降低膽固醇、預(yù)防壞血病、防止腎結(jié)石和心血管動(dòng)脈硬化等功效[1]。本研究以安岳檸檬為研究對(duì)象，就其總提取物對(duì)正常大鼠及自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）的血壓、血脂水平的影響進(jìn)行了試驗(yàn)研究，以期為安岳檸檬的進(jìn)一步加工利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物

新鮮檸檬，由資陽(yáng)市安岳縣農(nóng)業(yè)局檸檬辦提供。檸檬總提取物，棕色液體分層，濃度50%，批號(hào)20100727，由成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院化學(xué)實(shí)驗(yàn)室夏厚林教授提供。試驗(yàn)時(shí)，采用0.5 %吐溫80溶液配制各劑量組藥液，濃度分別為0.3 g mL-1、0.18 g mL-1、0.108 g mL-1（即高、中、低劑量組），置4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。硝苯地平片，?guī)格10 mg，100片/瓶，批號(hào)100402，重慶青陽(yáng)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.2 試劑

葡萄糖（GLU）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）試劑盒，四川省邁克科技有限責(zé)任公司產(chǎn)品，批號(hào)分別為0310101、0610131、0610101。

1.3 動(dòng)物

SD大鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，體重180～220 g,由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK-川-2008-24。自發(fā)性高血壓大鼠（SHR），雄性，體重190～250 g；同源WKY大鼠10只，雄性，體重190～250 g，許可證號(hào)SCXK（滬）2007-0005，合格證號(hào)2007000514882，上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供。

1.4 儀器

BL-420F生物機(jī)能信號(hào)系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司產(chǎn)品；無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)定系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司產(chǎn)品；ST-360酶標(biāo)儀、ST-360洗板機(jī)，上?？迫A實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司。

2 方法

2.1 對(duì)正常大鼠血壓的影響（頸動(dòng)脈插管法）

取健康SD大鼠，體重180～220g，雌雄各半，按體重分層隨機(jī)分為5組：溶媒對(duì)照、硝苯地平、檸檬提取液高、中、低劑量組，連續(xù)灌胃給藥21 d。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日，動(dòng)物稱(chēng)重麻醉，分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，行主動(dòng)脈插管，銀針插入四肢皮下，行肢體導(dǎo)聯(lián)（標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)）連接BL-420F生物信號(hào)系統(tǒng)，待波形穩(wěn)定后，記錄給藥前及末次給藥（十二指腸給藥）30 min后動(dòng)物的心率、收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓，計(jì)算變化率，腹主動(dòng)脈取血，分離血清測(cè)定GLU、TC、TG含量。

變化率（降壓率）=[（給藥前-給藥后）÷ 給藥前]×100%

2.2 對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）血壓的影響（無(wú)創(chuàng)法）

取健康SHR，雄性，實(shí)驗(yàn)前大鼠每日固定時(shí)間段于固定網(wǎng)套中測(cè)定尾動(dòng)脈血壓1次，待大鼠血壓穩(wěn)定后，按體重和血壓值（記錄給藥前血壓、心率）隨機(jī)分組：SHR自身正常對(duì)照（同源WKY）、SHR對(duì)照、SHR+硝苯地平、SHR+檸檬提取液高、中、低劑量。然后開(kāi)始每日灌胃給藥1次，連續(xù)灌胃給藥28d。并分別于給藥7、14、21、28 d時(shí)測(cè)定給藥后2小時(shí)大鼠的血壓（一般重復(fù)測(cè)定3次，每次間隔1min，取其平均值作為測(cè)定值）和心率。給藥28 d后，測(cè)定完血壓與心率后，處死動(dòng)物，取血，分離血清，按試劑盒說(shuō)明測(cè)定血清GLU、TC、TG含量。

3 結(jié)果

3.1 檸檬總提取物連續(xù)給藥21 d對(duì)正常大鼠血壓、血脂與血糖水平的影響

結(jié)果表明，檸檬總提取物連續(xù)給藥21 d，對(duì)麻醉大鼠的血壓有降低趨勢(shì)，其中6.0 g kg-1對(duì)平均動(dòng)脈壓有顯著降低作用（P<0.05）；各劑量組對(duì)大鼠血清TG含量有顯著降低作用（P<0.01），血糖與總膽固醇水平影響不明顯。見(jiàn)表1、2。

表1 檸檬總提取物給藥21 d對(duì)正常大鼠血壓的影響（x±SD）

表2 檸檬總提取物給藥21 d對(duì)正常大鼠血清GLU、TC、TG含量的影響（x±SD）

3.2 檸檬總提取物連續(xù)給藥28 d對(duì)SHR血壓、血脂與血糖水平的影響

結(jié)果表明，檸檬總提取物6.0 g kg-1連續(xù)給藥21天時(shí)，對(duì)SHR的收縮壓、舒張壓及平均動(dòng)脈血壓有降低趨勢(shì)，其余給藥時(shí)間點(diǎn)（7、14、28 d），對(duì)SHR血壓影響不明顯。連續(xù)給藥28 d，6.0 g kg-1、2.16 g kg-1對(duì)SHR的血清TG含量有降低作用（P<0.05），對(duì)血糖與總膽固醇水平影響不明顯。見(jiàn)表3、4。

表3 檸檬總提取物不同給藥時(shí)間對(duì)SHR血壓的影響（x±SD）

注：與SHR模型組比較， *P<0.05，** P<0.01

表4 檸檬總提取物連續(xù)給藥28d對(duì)SHR血清GLU、TC、TG含量的影響（x±SD）

4 討論

有研究報(bào)道表明，檸檬果醇提水液有明顯增加豚鼠離體心臟冠脈流量、抗小鼠缺氧、降低家兔血壓的作用，對(duì)犬血壓呈現(xiàn)雙相反應(yīng)，先有短暫升壓然后降壓[2]。為進(jìn)一步探討其對(duì)血壓、血脂的影響，本研究以檸檬之鄉(xiāng)安岳的新鮮檸檬為研究對(duì)象，采用正常大鼠與SHR，觀察其總提取物連續(xù)灌胃給予對(duì)大鼠血壓及血清脂質(zhì)、血糖水平的影響，以期進(jìn)一步明確檸檬的降壓與降脂保健作用。結(jié)果表明，安岳檸檬總提取物連續(xù)給藥21 d，對(duì)麻醉正常大鼠的血壓有降低趨勢(shì)，其中6.0 g kg-1對(duì)平均動(dòng)脈壓有顯著降低作用（P<0.05），但檸檬總提取物連續(xù)給藥7、14、21、28 d，無(wú)創(chuàng)法觀測(cè)SHR的血壓，發(fā)現(xiàn)除6 g kg-1劑量在連續(xù)給藥21 d時(shí)，對(duì)SHR的收縮壓、舒張壓及平均動(dòng)脈血壓有降低趨勢(shì)外，其余給藥時(shí)間點(diǎn)對(duì)SHR高血壓影響均不明顯。無(wú)論對(duì)正常大鼠還是SHR，檸檬總提取物連續(xù)給藥21 d或28 d，能明顯降低大鼠血清甘油三酯含量，但對(duì)血糖與總膽固醇水平影響不明顯。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，安岳檸檬總提取物具有較明確的降低甘油三酯作用，能改善血脂代謝；其降血壓作用則有待進(jìn)一步考證——對(duì)正常麻醉大鼠以十二指腸方式給藥能顯著降低血壓，但對(duì)SHR以灌胃方式給藥對(duì)血壓無(wú)明顯影響，結(jié)果的差異推測(cè)與給藥途徑有關(guān)，灌胃方式給藥可能對(duì)其降壓成分有所破壞，因此不排除藥物可能具有降血壓的作用。

近年來(lái)，檸檬提取物藥理作用的研究主要集中在抗菌、抗病毒方面[3~4]，其次即為其所含化學(xué)成分如檸檬苦素、檸檬酸、檸檬烯等的抗腫瘤、抗病原微生物、改善糖代謝的藥理研究，然而檸檬的很多保健作用報(bào)道其實(shí)并非是檸檬總提取物的作用，往往是其單體成分的一些作用，以檸檬總提取物為研究對(duì)象的報(bào)道較少。安岳檸檬果實(shí)及其檸檬油的品質(zhì)居全國(guó)首位，為進(jìn)一步綜合利用開(kāi)發(fā)安岳檸檬，有必要對(duì)其降壓、降血脂等作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，提供更詳實(shí)的科學(xué)依據(jù)。

[1] 高 俊燕,朱春華,李進(jìn)學(xué),等.檸檬加工綜合利用的研究進(jìn)展[J].亞熱帶農(nóng)業(yè)研究,2009,5(1):64.

[2] 姚 權(quán)瑞,陳柏遐.檸檬果對(duì)心血管系統(tǒng)作用的部分研究[J].桂林醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1990,3(1):12.

[3] 王 玉芝,張向宇,劉劍,等.檸檬提取物抗單純皰疹病毒實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志,2008,24(5):627.

[4] 張 緯,徐建設(shè),孫曉明,等.檸檬提取物對(duì)多重耐藥金黃色葡萄球菌的抑菌作用[J].天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2008,14(1):47.