血清藥理學(xué)方法研究四逆湯對(duì)離體蛙心心肌收縮力的影響

倪建新 林躍虹 陳妙珠

1.深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院藥學(xué)部，廣東深圳 518101；2.深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院社康科，廣東深圳 518101

血清藥理學(xué)方法研究四逆湯對(duì)離體蛙心心肌收縮力的影響

倪建新1林躍虹1陳妙珠2

1.深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院藥學(xué)部，廣東深圳 518101；2.深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院社康科，廣東深圳 518101

目的觀察大鼠灌胃給予四逆湯后，其含藥血清對(duì)離體蛙心心肌收縮力的作用。 方法 大鼠每日2次灌胃給予四逆湯（1 mL/次），給藥1 d 后，分別在末次給藥30、60、90、120 min 取血，分離血清。將含藥血清加入離體蛙心的灌流液中，觀察四逆湯對(duì)離體蛙心心肌收縮力的影響。 結(jié)果 灌胃給予四逆湯后，含藥血清均能顯著增強(qiáng)離體蛙心的心肌收縮力。其中末次給藥后90 min 采血分離的血清對(duì)離體蛙心的作用最強(qiáng)。 結(jié)論 四逆湯能增強(qiáng)離體蛙心的心肌收縮力。

四逆湯；血清藥理學(xué)；離體蛙心

四逆湯是出自我國(guó)漢代名醫(yī)張仲景的《傷寒論》治療少陰虛寒證的經(jīng)典名方，由附子（radix aconiti lateralis preparata）、干姜（rhizoma zingiteris）、甘草（radix glycyrrhizae）組成[1]。方簡(jiǎn)效宏，具溫中逐寒，回陽(yáng)救逆之功。現(xiàn)代藥理研究表明[2]：該方具有顯著的強(qiáng)心、增加冠脈流量和升壓的作用。臨床上用于治療低血壓、休克等癥，其口服液被列為中醫(yī)院必備急救用藥。本實(shí)驗(yàn)采用血清藥理學(xué)方法研究四逆湯對(duì)離體蛙心心肌收縮力的影響，為進(jìn)一步研究四逆湯對(duì)心臟的作用機(jī)制進(jìn)行初步探索。

1 材料與方法

1.1 一般材料

1.1.1 儀器 KMD 型控溫電熱套（山東甄城新年儀器廠）、RE-52C 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（鞏義市英峪予華儀器廠）、BL-410 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) （四川成都泰盟科技）、JH-2型肌張力傳感器（中國(guó)北京航天醫(yī)學(xué)工程研究所）、蛙類(lèi)手術(shù)器械、蛙心夾、主動(dòng)脈插管。

1.1.2 動(dòng)物 SD大鼠36只，青蛙46只，雌雄各半，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.3 藥品及試劑 附子、干姜、甘草均購(gòu)于寶安人民醫(yī)院中藥房。任氏液（Ringer’s solution）每1 000毫升中含NaCl 6.6 g、KCl 0.14 g、NaH2PO40.007 g、CaCl20.12 g、NaHCO30.12 g、葡萄糖 2.0 g。

1.2 方法

1.2.1 四逆湯的制備 依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典（2010版）中四逆湯的處方組成，稱取附子30 g，干姜20 g，炙甘草30 g，加水640 mL回流提取2次，時(shí)間分別為2.0 h和1.5 h ，合并提取液減壓濃縮至100 mL，4℃冷藏備用。每毫升四逆湯相當(dāng)于附子0.3 g，干姜0.2 g，炙甘草0.3 g。

1.2.2 含藥血清的制備 取體重（200±20）g的SD大鼠24只，隨機(jī)分成4組，每組6只。灌胃給予四逆湯（1 mL/次）。每日灌胃2次，給藥1 d。分別于末次給藥后30、60、90、120 min自心臟取血6～8 mL，3 000 r/min離心15 min，分離得含藥血清，于-79℃冷凍備用。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

利用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四逆湯對(duì)離體蛙心心肌收縮力的影響

取體重（25±5）g的青蛙10只，常規(guī)制備蛙心，通過(guò)張力傳感器連接BL-410 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，記錄蛙心的心肌收縮力，按灌流液中四逆湯濃度由低到高依次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每次間用任氏液平衡。觀察心肌收縮力的變化，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，隨著灌流液中四逆湯濃度的增加，離體蛙心的心肌收縮力逐漸增強(qiáng)。

增強(qiáng)（%）=（給藥后肌力-給藥前肌力）/ 給藥前肌力×100%。

表1 四逆湯對(duì)離體蛙心心肌收縮力的影響（±s）

表1 四逆湯對(duì)離體蛙心心肌收縮力的影響（±s）

注：與20%組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；與15%組比較，##P＜0.01；與10%組比較，&&P＜0.01

四逆湯濃度（%） n 給藥前肌力（g）給藥后肌力（g）10 2.41±0.18 3.88±0.34 60.78±8.64**##&&10 10 2.37±0.21 4.76±0.43 101.24±14.50**##15 10 2.49±0.22 5.78±0.51 132.46±7.69*20 10 2.52±0.17 6.26±0.32 148.23±11.69增強(qiáng)（%）5

2.2 含藥血清對(duì)離體蛙心心肌收縮力的影響

取體重（200±20）g的 SD大鼠12只，隨機(jī)分成兩組，每組6只。第Ⅰ組為空白血清組，灌胃給予生理鹽水（1 mL/次）；第Ⅱ組為含藥血清組，灌胃給予四逆湯（1 mL/次）。以上各組每日灌胃2次，給藥1 d。末次給藥后30 min 自心臟取血6～8 mL，3 000 r/min離心15 min，分離血清，于-79℃冷凍備用。

取體重（50±10）g的青蛙12只，隨機(jī)分為兩組，常規(guī)制備蛙心，按上法記錄蛙心的心肌收縮力。第Ⅰ組為空白血清組，將30 min取血制備的空白血清加入灌流液中，體積分?jǐn)?shù)為10%。第Ⅱ組為含藥血清組，將30 min取血制備的含藥血清加入灌流液中，體積分?jǐn)?shù)同上。觀察心肌收縮力的變化，結(jié)果含藥血清與空白血清比較有明顯增強(qiáng)心肌收縮力的作用（P＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2 含藥血清與空白血清對(duì)離體蛙心心肌收縮力的影響（±s）

表2 含藥血清與空白血清對(duì)離體蛙心心肌收縮力的影響（±s）

注：與空白血清組比較，**P＜0.05

組別 n 給藥前肌力（g） 給藥后肌力（g） 增強(qiáng)（%）空白血清組 6 4.46±0.34 4.97±0.36 12.41±4.40含藥血清組 6 4.41±0.29 6.64±0.45 23.08±2.20**

2.3 不同時(shí)間取血所得含藥血清對(duì)蛙心心肌收縮力的影響

取體重（50±10）g的青蛙24只，隨機(jī)分為4組，常規(guī)制備蛙心，按上法記錄蛙心的心肌收縮力。待心肌收縮穩(wěn)定后分別加入大鼠末次給藥后30、60、90、120 min取血制備的含藥血清，含藥血清在灌流液中體積分?jǐn)?shù)為10%，觀察心肌收縮力的變化，比較給藥后間隔不同時(shí)間所制備含藥血清對(duì)心肌收縮力影響的差異，結(jié)果末次給藥后90 min取血制備的含藥血清對(duì)心肌收縮增強(qiáng)最為明顯。見(jiàn)表3。

表3 不同時(shí)間取血所得含藥血清對(duì)蛙心心肌收縮力的影響（±s）

表3 不同時(shí)間取血所得含藥血清對(duì)蛙心心肌收縮力的影響（±s）

注：與90 min組比較，**P＜0.01；與60 min組比較，#P＜0.05

時(shí)間（min） n 給藥前肌力（g） 給藥后肌力（g） 增強(qiáng)（%）30 6 4.55±0.16 5.62±0.18 23.82±5.50**#60 6 4.61±0.21 6.11±0.11 32.24±6.60**90 6 4.41±0.16 6.72±0.18 52.78±9.40 120 6 4.52±0.23 5.48±0.29 21.34±3.70**#

3 討論

據(jù)周明眉[3]報(bào)道，四逆湯能增強(qiáng)心肌收縮力，有強(qiáng)心作用。本實(shí)驗(yàn)將四逆湯直接加入蛙心灌流液中，觀察心肌收縮力的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，四逆湯能明顯增強(qiáng)心肌收縮力，且隨著灌流液中四逆湯濃度的增加，離體蛙心的心肌收縮力逐漸增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)中對(duì)采血時(shí)間及灌流液中含藥血清濃度進(jìn)行了考察。發(fā)現(xiàn)給藥后90 min的含藥血清作用最強(qiáng)，估計(jì)此時(shí)大鼠血液中四逆湯有效濃度最高；此外通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明含藥血清對(duì)心肌收縮力的作用強(qiáng)度與灌流液中血清濃度呈明顯的量效關(guān)系，但由于含藥血清量不夠，未能獲得完整的量效曲線。

觀察復(fù)方中藥對(duì)器官的影響方法很多，但若用復(fù)方中藥直接接觸器官，其復(fù)雜的成分可影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。而給動(dòng)物灌服中藥一定時(shí)間后，取其血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的藥理學(xué)方法就具有一定的優(yōu)勢(shì)，近年來(lái)越來(lái)越多中藥藥理實(shí)驗(yàn)采用此方法[4-5]。采用含藥血清進(jìn)行離體實(shí)驗(yàn)，可以保留通常離體實(shí)驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)由于血清的理化性質(zhì)與細(xì)胞所處的內(nèi)環(huán)境相似。因此，在某種程度上可排除中藥制劑直接離體實(shí)驗(yàn)所具有的難確定因素的干擾，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度大大提高。

[1]哈小博 .漫談四逆湯 [J].求醫(yī)問(wèn)藥，2001，（3）：23．

[2]陳奇.中藥藥理學(xué)研究方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：414.

[3]周明眉.中藥血清藥理學(xué)的方法學(xué)研究——給藥方案的研究[J].中藥藥理與臨床，1999，15（3）：43-44.

[4]趙萬(wàn)紅，曹永孝.中藥血清藥理學(xué)的方法學(xué)探討[J].中藥新藥與臨床藥理，2002，13（2）：122-124.

[5]劉紅，艾民仙，陽(yáng)輝.運(yùn)用血清藥理學(xué)方法研究生脈散對(duì)豚鼠離體工作心臟的作用 [J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007， 18（8）：1815-1816.

Effect of Sini decoction on the frogs' hearts by serum pharmacology

NI Jianxin1 LIN Yuehong1 CHEN Miaozhu2

1.Department of Pharmacy,Baoan District People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518101,China; 2.Department of Community Health Service,Baoan District People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518101,China

Objective To observe the effect of Sini decoction on the frogs' hearts in vitro.Methods The experiment was accomplished by serum pharmacology.Dosages (1 mL/once) was administered to rats twice per day on one day.The blood was collected at 30,60,90,120 min after the last administration and the serum was separated.The separated serum was added to the frogs' hearts in vitro.The influence of the separated serum on the myocardial contractility was observed.Results The separated serum from adminstrered rats was observed to rose the amplitude of cardiac contraction markedly.The effect of serum collected on 90 min was strongest.Conclusion Sini decoction has the effect on rosing the amplitude of cardiac contraction markedly.

Sini decoction;Serum pharmacology;Heart in vitro

R285

A

2095-0616（2012）05-40-02

2011-11-22）