篩查實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HIV抗體陽性結(jié)果分析

王鳳蓮， 黃春梅

(海南省三亞市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科， 海南 三亞 572000)

人類免疫缺陷病毒(HIV)是獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS，艾滋病)的病原體。該病是一種性傳播疾病，人類感染HIV后，經(jīng)過2－8周或更長時(shí)間可產(chǎn)生HIV抗體。HIV抗體檢測(cè)分篩查試驗(yàn)(初篩和復(fù)檢)和確證試驗(yàn)。待檢血清先經(jīng)篩查試驗(yàn)，陽性結(jié)果再經(jīng)確證試驗(yàn)檢測(cè)，確證試驗(yàn)陽性的才能確定為HIV感染。HIV抗體篩查試驗(yàn)以酶聯(lián)免疫(ELISA)檢測(cè)為主，ELISA法靈敏性和特異性較高，但由于各種原因，有少許假陽性結(jié)果出現(xiàn)，會(huì)短時(shí)給臨床和病人帶來困擾和擔(dān)憂。我們將近幾年HIV抗體篩查實(shí)驗(yàn)陽性結(jié)果標(biāo)本，與當(dāng)?shù)卮_證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)反饋結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比分析，結(jié)果如下:

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象:2009年10月至2011年8月我院住院病人(術(shù)前檢測(cè))及門診病人(臨床檢測(cè)和自愿咨詢檢測(cè))篩查出的HIV抗體陽性血清標(biāo)本21份，其中男 15例，女6例，年齡在24－75歲之間。

1.2 篩查試劑:ELISA實(shí)驗(yàn)使用試劑為英科新創(chuàng)試劑、上海科華試劑、珠海麗珠試劑，均在有效期內(nèi)使用，批批檢合格，按說明書操作。

1.3 試驗(yàn)方法:ELISA試驗(yàn)在室內(nèi)質(zhì)控在控條件下，用英科新創(chuàng)試劑初篩查出HIV抗體陽性的病人，重新抽取第二份樣本，再用原來英科新創(chuàng)試劑和上海科華試劑或或珠海麗珠試劑重復(fù)檢測(cè)。結(jié)果呈陽性反應(yīng)或一陰一陽，送至當(dāng)?shù)卮_認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。所有方法的實(shí)驗(yàn)操作均嚴(yán)格按原廠試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 儀器:安圖－2010酶標(biāo)儀、安圖24200洗板機(jī)、TL－600 D水浴箱。

1.5 結(jié)果判定:ELISA法S/CO≥1時(shí)判定為陽性。

2 結(jié)果

2.1 初篩試驗(yàn)檢出的21例HIV陽性樣本，送至當(dāng)?shù)卮_認(rèn)實(shí)驗(yàn)室，反饋結(jié)果16例確認(rèn)陽性，陽性率76%;有3例反饋為HIV抗體陰性，占14%，2例為HIV抗體不確定，占9.5%。

2.2 反饋結(jié)果為陽性的樣本S/CO值為(S/CO)≥6。(S/CO)≥6的標(biāo)本確認(rèn)陽性率為100%，比文獻(xiàn)報(bào)道:兩種試劑初篩實(shí)驗(yàn)標(biāo)本光密度/臨界值(S/CO)≥6的標(biāo)本確認(rèn)陽性率為90.9%［1］要高。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)分析，HIV－ELISA為假陽性時(shí)的S/CO值與HIV－ELISA真陽性時(shí)有差別。

2.3 2例HIV抗體不確定樣本，1例為一種試劑陽性，另外一種試劑陰性(一陰一陽);另1份樣本為兩種試劑均陽性，但顯色弱陽性，S/CO值較小，范圍為S/CO＜ 6。

2.4 反饋的3例陰性樣本，均為一種試劑檢測(cè)陽性，另外一種試劑檢測(cè)陰性(一陰一陽)。

表1 21份篩查陽性樣本與確認(rèn)結(jié)果比較 n(%)

3 討論

HIV抗體檢測(cè)分初篩試驗(yàn)和確證試驗(yàn)。初篩試驗(yàn)臨床用ELISA及RIA法檢測(cè)抗體較多。ELISA法因?yàn)槊舾刑禺悾⒖稍谌詣?dòng)酶免儀上批量處理，符合艾滋病初篩試劑的要求，目前在臨床上得到廣泛使用。但ELISA法出現(xiàn)假陽性結(jié)果也有一些原因，綜合本實(shí)驗(yàn)室陽性送檢情況分析為:

3.1 原因分析

3.1.1 篩查試劑特異性不如確認(rèn)試劑高:我國規(guī)定確證試驗(yàn)必須用WB－蛋白印跡法，該法 主要用于鑒別抗特異性抗原決定簇的抗體［2］，免疫印跡法具有特異性強(qiáng)，敏感度高的優(yōu)點(diǎn)，由于篩查診斷試劑的敏感性高而特異性不如確認(rèn)試劑，故會(huì)出現(xiàn)復(fù)檢試驗(yàn)陽性經(jīng)確認(rèn)試驗(yàn)為HIV抗體陰性的結(jié)果。

3.1.2 篩查試劑的選用:由于各種原因，各廠家的試劑質(zhì)量仍可能出現(xiàn)較大差異.本實(shí)驗(yàn)室3例假陽性標(biāo)本為:用一種試劑初篩陽性，用另外一種試劑復(fù)檢為陰性。

3.1.3 生物因素影響:據(jù)報(bào)道，造成不確定的原因主要有:HIV新近感染抗體陽轉(zhuǎn)早期、肝病、自身免疫疾病、輸入血制品、腎衰和血透、妊娠、腫瘤、免疫接種等［3］。本實(shí)驗(yàn)2例HIV抗體不確定病人，1例為產(chǎn)科病人，1例為外傷病人。

3.1.4 操作人員因素:在初篩試驗(yàn)中筆者就碰到1例用一種試劑檢測(cè)陽性，即刻將該標(biāo)本用同試劑檢測(cè)為陰性情況，主要為酶免操作因素影響，應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化操作。

3.2 我們的工作體會(huì)

3.2.1 檢驗(yàn)人員在艾滋病檢測(cè)工作中要做好安全防護(hù)工作，防止HIV/AIDS職業(yè)暴露的發(fā)生。

3.2.2 試劑方面應(yīng)選擇特異性好和敏感性高的試劑，并定期對(duì)試劑進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。

3.2.3 影響酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)的因素有很多，工作人員一定要嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，進(jìn)行操作，認(rèn)真對(duì)待每一份標(biāo)本，對(duì)可疑的標(biāo)本要進(jìn)行復(fù)查，以確保檢驗(yàn)質(zhì)量，在現(xiàn)有試劑情況下避免人為因素引起假陽性結(jié)果。①每天應(yīng)做內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清和外部對(duì)照質(zhì)控血清，以監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和穩(wěn)定性;②標(biāo)本防止溶血、無微生物污染、無過多脂質(zhì)血標(biāo)本;③嚴(yán)格按說明步驟加酶試劑時(shí)不要滴出孔外;嚴(yán)格控制操作時(shí)間;保證洗板針暢通等。

3.2.4 雖然篩查試驗(yàn)有假陽性率，為了防止漏檢，也應(yīng)嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該嚴(yán)格按照《全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》(2009年版)要求，對(duì)于初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或廠家的試劑或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)，如果兩種試劑復(fù)檢均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性，均呈陽性反應(yīng)或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證試驗(yàn)［4］。

3.2.5 對(duì)于篩查試驗(yàn)呈陽性的結(jié)果應(yīng)該為病人做好保密工作，杜絕泄密事件的發(fā)生。一次篩查陽性不建議告知，兩次篩查陽性可告知可疑，要協(xié)助艾防科為病人做好結(jié)果解釋，并做好法律、醫(yī)學(xué)、生活等方面的咨詢工作。應(yīng)告知病人篩查試驗(yàn)陽性的結(jié)果需要再經(jīng)確證試驗(yàn)檢測(cè)，確證試驗(yàn)陽性的才能確定為HIV感染。

3.2.6 艾防科盡快將反饋結(jié)果以保密方式專人告知臨床負(fù)責(zé)醫(yī)生和病人，消除篩查假陽性引起的困擾和擔(dān)憂;對(duì)于確證試驗(yàn)陽性的病人要做好疫情上報(bào)工作;對(duì)于HIV抗體不確定的病人，應(yīng)做好隨訪復(fù)檢工作。

［1］常宏偉，劉國生，等.艾滋病篩查檢測(cè)結(jié)果分析［J］.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，5(6):709－710.

［2］唐珊熙，主編.微生物學(xué)及微生物學(xué)檢驗(yàn)［M］.人民衛(wèi)生出版社，2000.415.

［3］符鵬，王召乾，胡玉鑾，等.2004年至2006年海南省HIV初篩陽性標(biāo)本的復(fù)檢及確認(rèn)情況分析來源［J］.中國熱帶醫(yī)學(xué)，2007，7(8):1407－1408.

［4］中國疾病預(yù)防控制中心.全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2009年)［M］.2009.07.