金錢草對草酸鈣結石小鼠紅、白細胞數的影響

李 靜，賀紹君，趙書景，魏 鑫

（安徽科技學院 動物科學學院，安徽 鳳陽 233100）

金錢草對草酸鈣結石小鼠紅、白細胞數的影響

李 靜，賀紹君，趙書景，魏 鑫

（安徽科技學院 動物科學學院，安徽 鳳陽 233100）

研究金錢草對草酸鈣結石模型小鼠的紅、白細胞數目的影響.方法：30只小鼠按體重相近原則分為3組，Ⅰ組作為對照組小鼠自由飲用自來水，Ⅱ、Ⅲ組作為試驗組小鼠自由飲用主要由1%氯化銨和1%乙二醇配制成的成石液，每組小鼠每日灌服藥液0.5mL，Ⅰ、Ⅱ組小鼠灌服生理鹽水，Ⅲ組小鼠灌服金錢草水提取液.28天灌服結束后，選取每組小鼠，乙醚吸入麻醉，立即眶后靜脈采血，血樣放入加了抗凝劑的樣品管.采集的血樣用于紅細胞計數、白細胞計數和白細胞分類計數.結果：與試驗Ⅲ組小鼠白細胞數目和嗜中性粒細胞所占比例兩項指標相比，對照組Ⅰ組白細胞數目少了3211個/μL（P＜0.01），嗜中性粒細胞所占比例增多11%（P＜0.05）；試驗Ⅱ組白細胞數目少了2619個/μL（P＜0.01），嗜中性粒細胞所占比例增多17%（P＜0.05）.結論：金錢草能夠通過調整小鼠內白細胞的變化來改變機體的免疫力，進而發揮抗結石的作用.

金錢草；小鼠；草酸結石；紅細胞；白細胞

隨著人們生活節奏不斷加快、飲食結構發生變化，結石病的發病率逐年攀升，給人們的健康帶來了嚴重的危害.在結石病的防治方面，目前國內外大部分研究集中在對體內已形成的結石進行處理，促使其排出體外，而對于體內預防結石形成的研究報道較少.金錢草是《中國藥典》收錄的一味中草藥.體外內藥理研究表明，金錢草含有多種化學成分，具有利尿和排石作用[1].本研究采用1%乙二醇和1%氯化銨飲水誘導小鼠形成草酸鈣結石模型，用金錢草為干預因素進行給藥實驗，檢測小鼠血液紅、白細胞的變化，初步探討金錢草抑制草酸鈣結石形成的干預作用，進一步探究其藥用價值，為開發防治寵物尿石癥的藥物提供試驗依據，同時也為人類防治泌尿系統結石病提供參考.

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物

30只實驗用昆明小鼠（45日齡），雌雄各半.

1.1.2 試驗藥品試劑

氯化銨（NH4Cl），分析純，滬試生產，批號：F20050621；乙二醇（C2H6O2），分析純，分子量62.07，國藥集團化學試劑有限公司生產，批號：T20110608；金錢草，正品，安徽國鑫中藥飲片有限公司，批號：20110601；抗凝劑 EDTANa2（10%），濃度為0.01mol/L,分析純，國藥集團化學試劑有限公司生產，批號：T20090303；瑞氏染粉、甲醛、NaCl.

1.1.3 試驗飼料

實驗鼠顆粒飼料，安徽長臨河醫藥科技有限公司生產.

1.1.4 試驗主要儀器設備

生物顯微鏡：SA3000型，北京泰克儀器有限公司制造；蘇泊爾電磁爐：SDHC04-210x型，浙江蘇泊爾股份有限公司；立式壓力蒸汽滅菌器：LDZX-50FBS型，上海申安醫療器械廠；小鼠飼養籠具、電子天平、血細胞計數板、載玻片、染色缸、血蓋片、染色架、吸管.

1.2 試驗方法

1.2.1 動物分組

實驗用昆明小鼠30只，雌雄各半，45日齡，適應性飼養1w后，按體重相近原則分為對照組Ⅰ組和試驗組Ⅱ、Ⅲ組.每組雌鼠和雄鼠各5只.用染色筆標記，編號.

1.2.2 試驗藥品配制

成石液：1%氯化銨和1%乙二醇溶液的配制，用電子天平稱取氯化銨5g，置于500mL容量瓶中，用10mL移液管吸取5mL的乙二醇于容量瓶中，取200mL的蒸餾水注入容量瓶，搖動容量瓶使氯化銨完全溶解，用蒸餾水定容到500mL.

金錢草水提取物的制備：將500g的金錢草在2.5L水中浸泡2h，進行煎煮.煎煮30min后，過濾；藥渣再次加入1.5L水煎煮20min后再次濾過.將兩次濾液混合，濃縮至250mL，相當于2g/mL.配制完成后倒入藥瓶并標記.

瑞氏染色液：稱取瑞氏染粉0.1g置于研缽中.加20mL甲醛研磨，使其溶解，然后將已溶解的染色液倒入潔凈的染色玻瓶，剩下未溶解的染料再加入10mL甲醇研磨，并將溶解的染色液合并，之后每次加入10mL甲醇研磨，如此繼續操作3次，直至全部染料溶解為止.在室溫中保存7日后即可應用.

1.2.3 動物飼養

小鼠飼養在安徽科技學院動物科學學院實驗動物房進行，每天固定時間換水換料，固定的時間給藥，自動飲水瓶每天固定時間清洗，用具每日固定時間紫外線消毒.使用刨花作為小鼠墊料，墊料在陽光下曬干，經紫外燈照射3～4h，再裝入自制的布袋中于121℃高溫蒸汽滅菌20min，然后置入干燥箱內60℃鼓風干燥后備用.

試驗Ⅱ、Ⅲ組小鼠飲用配制好的成石液，空白對照組Ⅰ組小鼠飲用自來水，小鼠自由飲水，環境溫度20～24℃，濕度50～65%，光照12～13h，每周定期稱重一次.小鼠給藥采用灌胃方式，空白對照組和試驗Ⅰ組灌胃生理鹽水0.5mL，試驗Ⅱ組灌胃金錢草水提取液0.5mL（相當于1g中藥），持續4w.試驗過程中認真進行小鼠的一般檢查，記錄小鼠的精神狀態、采食、飲水、活動、臨床癥狀、環境溫度與濕度及通風等情況.

1.3 樣品采集與處理

試驗結束時，小鼠禁食不禁水過夜，逐只稱重，采血，血樣放入加有抗凝劑的樣品管，用記號筆標記.采血后的小鼠立即解剖，取心、肝、脾、肺、腎、胸腺、脾臟進行稱重，記錄下重量和觀察情況.采集的血液分別用于紅細胞計數、白細胞計數和白細胞分類計數.

1.4 數據統計分析

所有試驗數據均采用均數±標準差（M±SD）.spss17.0統計軟件進行數據分析，利用單因素方差分析各數據之間的統計學差異，P＜0.05為有統計學意義.

2 結果與分析

2.1 金錢草對草酸鈣結石小鼠紅、白細胞數，白細胞比例的影響

表1 金錢草對草酸鈣結石小鼠紅、白細胞數，白細胞比例的影響

由表1可以看出，試驗Ⅲ組比試驗Ⅱ組白細胞數目多出2619個/μL（P＜0.01）、嗜中性粒細胞所占比例低17%（P＜0.05），比對照組Ⅰ組白細胞數目多出3211個/μL（P＜0.01）、嗜中性粒細胞所占比例低11%（P＜0.05）.分析：金錢草能夠刺激草酸鈣結石小鼠的白細胞的產生，使白細胞數目增多，嗜中性粒細胞所占比例減少來改變機體的免疫力，進而發揮抗結石的作用.

3 討論

血液細胞學檢查分析是診斷和鑒別診斷系統疾病的主要依據，針對血液成分開展的血液學檢驗所獲得的信息可及時了解發病原因、病情進展、疾病程度以及進行預后判斷,從而為疾病的診斷、治療及預防提供依據[2].金錢草具有緩解疼痛、減少血尿及促進排石等功效的經典中草藥，國內外對于體外抑制結石形成方面已有報道[3]，而臨床和體內實驗研究均鮮有報道.我們通過對小鼠結石模型形成過程進行給藥干預，檢測試驗28日齡小鼠血液紅細胞數、白細胞數、淋巴細胞、嗜酸性粒細胞比例、嗜中性粒細胞比例的變化，初步探討金錢草抑制草酸鈣結石形成的干預作用.

3.1 金錢草對草酸鈣結石小鼠紅細胞數的影響

與其它器官相比，腎臟內更容易形成結石，從而引起炎癥，使腎臟功能降低，分泌紅細胞生成素減少，從而引起紅細胞數目減少.本試驗數據顯示，試驗Ⅱ組和Ⅲ組比試驗Ⅰ組紅細胞數目少，但對照組和試驗組紅細胞數目比較差異不顯著（P＞0.05），說明結石在一定程度上能夠引起紅細胞數目減少，但這種減少變化輕微.試驗Ⅲ組比試驗Ⅱ組紅細胞數目多，說明金錢草可以通過干擾草酸鈣結石的形成，從而緩解因腎臟結石引起的炎癥反應對機體造成的影響.

3.2 金錢草對草酸鈣結石小鼠白細胞數的影響

動物機體發生炎癥或其他疾病時，可引起白細胞總數的變化，因此檢查白細胞總數成為輔助診斷的一種重要方法[4].體內結石的刺激容易引起炎癥，反之，炎性產物的聚集也促進結石的形成.研究表明，當機體由結石造成的損傷引起炎癥時機體會進行免疫反應，白細胞的數目會出現一定程度上的增多[12].本試驗數據顯示試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組比對照組Ⅰ組白細胞數目多，試驗Ⅲ組比試驗Ⅱ組白細胞數目多（P＜0.01）說明結石引起炎癥反應后刺激機體白細胞大量生成，進入感染部位進行抗炎，金錢草促進草酸結石小鼠白細胞數目的增多，增強機體免疫反應，金錢草對草酸鈣結石小鼠白細胞數的影響較大.

3.3 金錢草對草酸鈣結石小鼠淋巴細胞的影響

淋巴細胞是在適應性免疫中起關鍵作用的白細胞.研究表明，當機體由結石造成的損傷引起炎癥反應時機體會進行免疫反應，結石引起的炎癥反應對機體淋巴細胞的產生影響不大[5].本試驗數據顯示試驗Ⅱ組比對照組Ⅰ組淋巴細胞所占比例減少（P＞0.05），試驗Ⅲ組和試驗Ⅱ組、試驗Ⅰ組相比淋巴細胞所占比例出現增大（P＞0.05），說明金錢草可以促進草酸鈣結石小鼠淋巴細胞的產生，但影響不顯著.

3.4 金錢草對草酸鈣結石小鼠嗜酸性粒細胞的影響

嗜酸性粒細胞是白細胞的一種，一般認為在抗寄生蟲感染及I型超敏反應中發揮重要作用.本試驗中，對照組Ⅰ組和試驗組Ⅱ組嗜酸性粒細胞所占比例相比較結果相等差異不顯著（P＞0.05），試驗Ⅲ組比試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組嗜酸性粒細胞所占比例大（P＞0.05）說明金錢草能夠刺激草酸鈣結石小鼠機體產生嗜酸性粒細胞但影響不明顯.

3.5 金錢草對草酸鈣結石小鼠嗜中性粒細胞的影響

嗜中性粒細胞是白細胞的一種，結石引起的炎癥反應能夠刺激機體嗜中性粒細胞的產生.本試驗中，試驗Ⅱ組比對照組Ⅰ組嗜中性粒細胞所占比例大（P＞0.05），試驗Ⅲ組比試驗Ⅱ組、對照組Ⅰ組嗜中性粒細胞所占比例小（P＜0.05），說明金錢草能夠干擾小鼠體內草酸結石的形成過程，從而減少炎癥反應過程.

綜上所述，金錢草對草酸鈣結石小鼠白細胞影響較顯著，金錢草能夠刺激草酸鈣結石小鼠的白細胞的產生，使白細胞數目增多，嗜中性粒細胞所占比例減少.金錢草作為經典治療泌尿系結石的中草藥，能夠通過影響白細胞來改變機體的免疫力.

4 結論

金錢草能夠刺激草酸鈣結石小鼠的白細胞的產生，使白細胞數目增多，嗜中性粒細胞所占比例減少來改變機體的免疫力，進而發揮抗結石的作用.為進一步探究了其藥用價值，開發防治寵物尿石癥的藥物提供試驗依據，同時也為人類防治泌尿系統結石病提供參考.

〔1〕楊玲娟,狄留慶,方蕓.中藥防治泌尿系結石概述[J].中國醫院藥學雜志,2006,26（11）:1401-1403.

〔2〕中華檢驗醫學編輯部,加強形態的臨床檢驗專家座談會紀要[J].中華檢驗醫學雜志,2005,28（2）:147-148.

〔3〕Gohel MD,Wong SP.chinese herbal medicines and their efficacy in treating renal stones.Urol Res,2006,34,365-372.

〔4〕GENG J G.Diretional migration of leukocytes:Their path ological roles in inflamm ation and strategies for development of anti-inflammatory thera-pies[J].Cell research,2001,11（2）:85-88.

〔5〕崔治中,崔保安.獸醫免疫學[M].北京：中國農業出版社,2004.109-110.

S853.7

A

1673-260X（2012）09-0151-03

安徽科技學院自然科學研究項目（ZRC2012323）