VEGF及血清激素水平與圍絕經期無排卵型功能失調性子宮出血的研究

河北省邢臺市第三醫院（054000）張志革

圍絕經期功能失調性子宮出血（dysfunctional uterine bleeding，DUB）是婦科常見病，發病率約占婦科門診患者的10%。其出血機制至今尚不清楚。現代研究表明，功血是在激素調節下，子宮局部微環境發生改變的結果[1]。尤其是血管內皮生長因子及其受體在子宮內膜的周期性血管生成中的作用是近年來人們關注的熱點[2][3]。本研究觀察發現，血管內皮生長因子[4][5][6]，在圍絕經期無排卵性功能失調性子宮出血患者子宮內膜中的表達及其與血清激素水平之間的關系。

1 資料與方法

1.1 研究對象 年齡40～55歲；根據排除法診斷為無排卵型功能失調性子宮出血；近3個月未使用激素類藥物及避孕器；無激素替代治療史；月經周期和（或）經期紊亂，經量增多者為病例組。既往月經正常，現月經周期不規則延長、經期正常或縮短、經量正常或減少（如此月經周期已達到或超過3次）為對照組。病例組85例，對照組10例。

1.2 方法 所有研究對象經過問診、體檢、B超及血常規、凝血分析檢查后，排除其他器質性病變，病例組即行診刮術，對照組月經來潮后6h內行診刮術，標本立即固定，同時采外周血3ml測定激素水平。

1.2.1 血清激素水平測定 采用放免法，測定促卵泡素（FSH）、黃體生成素（LH）、泌乳素（PRL）、雌二醇（E2）、孕酮（P）和睪酮（T），試劑盒為天津德普生物技術有限公司。

1.2.2 子宮內膜病理學診斷標準 按1998年國際婦科病理協會子宮內膜增生方法，分為簡單型增生（SH）、復雜型增生（CH）和不典型增生（AH）。

1.2.3 VEGF蛋白測定的表達 采用免疫組化SP法檢測，兔抗人VEGF一抗及試劑盒購于中山金橋生物技術有限公司，即用型SABC試劑盒及DAB顯色劑購自武漢博士德生物制品有限公司。按SP法行VEGF染色與DAB顯色，嚴格控制實驗條件。使用TBS緩沖液代替一抗作對照。所有切片標本的免疫反應與顯色反應在同一時間、相同條件下進行。

1.2.4 結果判定 VEGF染色陽性表達為棕黃色，主要存在于細胞質，胞膜和胞質同時著色亦為陽性。兩位醫師采用雙盲法同時觀察切片5個具有代表性的視野（×400）計數增生細胞總數和陽性細胞個數，得出陽性細胞百分率。計分標準采用3個參數的半定量積分方法，即染色強度（A）、陽性細胞數（B）和兩者積分的乘積。陽性細胞≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；著色強度以大多數陽性細胞呈現的染色來計分，淡黃色為1分，淺棕褐色為2分，深棕褐色為3分。兩者積分乘積，0分為陰性（-）、1～4分為弱陽性（+）、5～8分為中度陽性（++）、9～12分為強陽性（+++），中度陽性和強陽性為過度表達（++～+++），同時以此計算陽性率。

附表1 各組激素檢測結果（±s）

附表1 各組激素檢測結果（±s）

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附表2 VEGF表達的檢測結果

1.3 統計學方法 運用SPSS13.0統計軟件進行統計學處理，對計量資料運用t檢驗，對計數資料的比較采用χ2檢驗；標準水準α=0.05雙側。

2 結果

2.1 子宮內膜病理結果 對照組10例均為增殖期。病例組單純增生62例，復雜增生20例，不典型增生2例，子宮內膜腺癌1例。不典型增生及子宮內膜癌未列入統計。病例組與對照組比較，睪酮明顯升高，其他各項差異無顯著性，兩組除FSH高于10IU/L外，其他各值均在正常范圍。子宮內膜單純增生組（SH組）與復雜增生組（CH組）比較各項激素水平無顯著性，見附表1。

2.2 VEGF檢測結果 VEGF在病例組中表達陽性率為5 6.0 9%，低于對照組（8 0.0 0%），差異有統計學意義（P＜0.05），見附表2。

3 討論

女性更年期常因卵巢無排卵而發生功能性子宮出血。絕經前10年促卵泡素水平已開始升高，黃體生成素尚保持正常水平，隨著卵巢功能衰退，雖然促卵泡素、黃體生成素均升高，也不能使卵泡繼續生長，因此，促卵泡素水平升高是卵巢老化的早期表現。本研究中，病例組和對照組促卵泡素均高于10IU/L，提示兩組均存在卵巢功能減退，但兩者比較無差異性。

睪酮是女性體內最有活性的雄激素，它與雄激素受體結合產生效應，雄激素受體廣泛分布在中樞神經系統、外周神經系統和大腦皮層。絕經前的健康女性每日產生睪酮約300μg，大約是成年男性的5%。在生殖中期，循環中的睪酮水平和腎上腺產生雄激素的甾體化合物即脫氫表雄酮開始下降，并且一直持續到絕經后期。在正常月經周期中，睪酮不是主要調節激素。本研究中，觀察組血清睪酮水平明顯升高，提示血清睪酮升高在圍絕經期功血發生中發揮重要作用，但作用機制尚待進一步研究[7]。

引起異常子宮出血的原因很多，其中子宮內膜血管過度形成是其原因之一。子宮內膜血管生成是指新血管形成的過程，受多種因子調控，其中VEGF被認為作用最強，特異性最高的調控因子。

本研究發現，在病例組中VEGF在子宮內膜中的表達明顯低于對照組。VEGF主要作用于血管內皮細胞，與內皮細胞上的KDR和flt-1受體高親和力結合后，可作為內皮細胞特異性有絲分裂原，誘導內皮細胞增生，毛細血管袢形成[8]，同時可增加微血管通透性，通過誘導間質產生，促進體內新血管的生成[9]。VEGF通過自分泌或旁分泌機制刺激血管內皮增生、移位和結構形成，促進血管生長發育并維持血管的通透性[10]。觀察組VEGF表達顯著減少[11]，由于VEGF能為血管內皮的形成提供重要基質，子宮內膜中的微血管形成也相應減少，并可能導致子宮內膜血管發育不良，引起子宮異常出血，這表明VEGF在無排卵性功血的發病機制中起著重要作用。

綜上所述，功血的發生發展是一個復雜的過程，本文著重總結了血管內皮生長因子與功血的關系及其與相關因素的調節，若能將功血與VEGF的研究成果結合起來治療功能失調性子宮出血，必將為功血的靶向治療開辟一個全新的前景。