不同培養(yǎng)基對乙酰螺旋霉素片含量測定的影響

廣東省韶關市食品藥品檢驗所（512028）朱興保 嚴曉明 王莉蓓

乙酰螺旋霉素為大環(huán)內酯類抗生素，《中國藥典》2010年版（二部）規(guī)定其含量測定方法為抗生素微生物檢定法，其中管碟法是目前較常用的方法之一。由于管碟法測定抗生素效價的影響因素較多，除檢驗者操作技術、抑菌圈的測量、供試品與標準品溶液的配制等人為因素外，培養(yǎng)基的質量也是重要的影響因素之一[1][2]。我國生產培養(yǎng)基已有相當長的歷史，但生產出的培養(yǎng)基卻參差不齊，為探討培養(yǎng)基對抗生素微生物檢定結果的影響情況，本文對常用的培養(yǎng)基進行了檢測分析比對。

附表 采用不同生產廠家及同一生產廠家不同批號培養(yǎng)基的測定乙酰螺旋霉素含量結果

1 儀器與試藥

ZY-300Ⅳ多功能微生物自動測量分析儀（北京先驅威鋒技術開發(fā)公司）；梅特勒托利多XS-105電子天平；隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱。乙酰螺旋霉素標準品（中國藥品生物制品檢定所，規(guī)格：200mg，批號：130347-200403）；抗生素檢定培養(yǎng)基Ⅱ號（7.8～8.0）（北京某廠，批號分別：100616，110201，110910；廣東某廠，批號：20110524；青島某廠，批號：20110111）；枯草芽孢桿菌[ CMCC（B）63 501 ]（中國藥品生物制品檢定所）；磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉均為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液制備 精密稱取乙酰螺旋霉素標準品18.55mg，用10ml乙醇溶解后，加滅菌水制成每1ml中含1000單位的溶液，另取乙酰螺旋霉素片適量，同法制成每1ml中含1000單位的溶液，精密量取上述兩種溶液適量，臨用前用滅菌磷酸鹽緩沖液（pH=7.8）稀釋至每1ml中含5單位和10單位的溶液，作為標準品溶液和供試品溶液。

2.2 培養(yǎng)基配制 稱取抗生素檢定培養(yǎng)基Ⅱ號（7.8～8.0）干粉適量，按說明書配制，用1mol/L氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值使滅菌后為8.0～8.2。

2.3 檢驗方法 按照《中國藥典》2010年版（二部）抗生素微生物檢定法（附錄XI A）管碟法的二劑量法[3]，以枯草芽孢桿菌為試驗菌，以抗生素檢定培養(yǎng)基Ⅱ號（7.8～8.0）為檢定培養(yǎng)基，在35～37℃中培養(yǎng)16小時后，用ZY-300Ⅳ多功能微生物自動測量分析儀測量抑菌圈直徑，按照生物檢定統(tǒng)計法中的（2.2）方法進行可靠性測驗及效價計算，按乙酰螺旋霉素計算出標示量的百分含量。

2.4 檢驗結果 分別采用不同廠家及同一廠家不同批號的抗生素檢定培養(yǎng)基Ⅱ號（7.8～8.0），檢測乙酰螺旋霉素片的含量，比較不同批號間的結果差異，結果見附表。經(jīng)t檢驗，乙酰螺旋霉素片含量測定結果，與青島某廠批號20110111比較P＜0.05，與北京某廠批號100616比較P＜0.05，均有顯著差異。

兩人采用同一批號培養(yǎng)基，在相同條件下檢測乙酰螺旋霉素的含量，各進行六次，比較不同人員測定結果的重現(xiàn)性，結果分別為90.1%，90.6%，90.4%，91.2%，91.5%，90.9%和90.4%，92.0%，91.4%，90.2%，90.3%，91.3%，平均值分別為90.8%和90.9%，經(jīng)F檢驗，P＞0.05，結果無顯著差異。

3 討論

結果顯示，不同生產廠家與同一生產廠家生產的不同批號的培養(yǎng)基檢測結果均有差異，北京某廠批號100616與青島某廠批號20110111的產品之間平均含量相差為5.4%；北京某廠生產的不同批號培養(yǎng)基測出的結果也有明顯差異，其中批號100616與110201產品之間的平均含量相差4.4%。為排除人員實驗操作因素，選擇不同實驗者采用同廠家同批號培養(yǎng)基，在相同條件下檢測同一批的供試品，結果表明差異不明顯，重現(xiàn)性較好。

目前，培養(yǎng)基除用于藥品檢驗外，還廣泛用于醫(yī)院臨床檢驗、預防醫(yī)學、動植物檢驗、微生物學等各領域，但培養(yǎng)基生產廠家較多，以致生產出來的培養(yǎng)基的質量參差不齊，即使同一廠家不同批次的產品也會有明顯差別，直接影響到用于含量測定的微生物檢定法的準確性，尤其對藥檢所仲裁或判斷邊緣產品是否符合規(guī)定時加大了難度。因此，建議制定培養(yǎng)基質量控制的國家標準，嚴格從生產商的產品供應到實驗室制備、產品使用、產品銷毀和最終產品的質量控制等各方面和各環(huán)節(jié)作出詳細規(guī)定，用于保證微生物培養(yǎng)基的質量。