氧化鋁對正天丸中芍藥苷含量測定結果影響的探析

北京市東城區藥品檢驗所（100027）尤立華 趙希賢

基層藥檢所的工作是按照藥品的質量標準對轄區的抽驗藥品進行檢驗，在對不合格藥品的判定過程中，除嚴格執行標準外，還要對各種影響因素進行試驗分析，從而得出正確的判定結果。近期一份抽驗檢品正天丸的檢測過程表明，僅僅依靠標準有時不能得出正確的結論，因為各種試劑、各種條件經常會發生變化，所以要求我們檢驗人員要具備各種檢驗標準的分析研究能力，才能得出一份合格的檢驗報告。

正天丸[1]是由鉤藤、白芍、川芎、當歸 、地黃、白芷等十五味中藥組成，具有疏風活血、養血平肝、通絡止痛的功效，用于外感風邪、瘀血阻絡、血虛失養、肝陽上亢引起的偏頭痛，緊張性頭痛，神經性頭痛，頸椎病型頭痛，經前頭痛。質量標準為國家藥品標準[2]WS3-B-3169-98-（2006）。

按照質量標準進行含量測定，芍藥苷含量測定值很低，且測定時樣品間的重現性不好，為了得出正確的判定結果，對供試品制備過程進行分析，發現不同批號的氧化鋁可嚴重影響檢測的結果，因此在檢驗中，當發生不合格等情況時要求我們認真查找測定過程中的影響因素，從而得出正確的判定結論。我們以對正天丸含量測定的具體情況為例，進行具體闡述，內容如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC2010液相色譜儀。

1.2 試藥 芍藥苷對照品(批號：110736-201035)（由中國藥品生物制品鑒定所提供）；層析用中性氧化鋁（100～200目）（批號：F20080305，F20090804，F20110124)（國藥集團化學試劑有限公司生產）；正天丸（批號：110515H）（華潤三九醫藥股份有限公司生產）；試劑為分析純，乙腈為色譜純。

2 方法

2.1 正天丸質量標準含量測定方法

2.1.1 色譜條件

色譜柱：WAT045905C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動相為乙腈-水（15：85）；檢測波長為230nm；溫度：30℃；流速：1.0ml/min。

2.1.2 對照品溶液制備

取芍藥苷對照品，精密稱定，置50ml的容量瓶中，加甲醇40ml后超聲處理10分鐘使其充分溶解，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1ml，將其置于10ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1ml含39.94μg的溶液，即得所需的對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液制備

取本品30g，研細，取約1g，精密稱定，加50%乙醇15ml，超聲處理（功率200W，頻率59KHZ）30分鐘，用適量的50%乙醇洗滌容器和殘渣，洗液并入濾液中，蒸干，殘渣中加入80%甲醇5ml使之溶解，加在中性氧化鋁柱（內徑0.9cm，100～200目中性氧化鋁4.5g）上，用80%甲醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液即得。

2.1.4 測定法 精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀中進行測定，即得。

2.1.5 系統適應性試驗

在上述色譜條件下，取對照品溶液，連續進樣5次，其峰面積測量值的RSD值為1.56%。理論板數均大于5000。樣品中芍藥苷峰附近未見干擾峰。

2.2 本批樣品含量測定結果

根據標準規定，測定結果應不少于0.5mg/g，但樣品測定結果為0.06mg/g 和0.09mg/g ，結果表明兩份樣品含量低于標準限值近8倍，且樣品間平行性不好。由于系統適應性試驗符合要求，復測時對照品重現性良好，故排除儀器設備的影響；又因芍藥苷含量測定多采用超聲提取的方法[3][4]，未發現超聲提取對芍藥苷測定有重大影響，因此考慮針對氧化鋁柱層析過程進行試驗，以找到檢測過程中芍藥苷含量測定結果的影響因素。

2.3 氧化鋁柱層析洗脫速度不同時樣品的測定結果

一般試驗時，氧化鋁柱層析的洗脫速度會對含量測定結果產生影響，因此設計試驗，分別采用不同的洗脫速度，層析氧化鋁用量為2g進行實驗，測定結果（見附表1）。

實驗結果表明：洗脫速度對芍藥苷含量測定結果有一定影響，但洗脫速度不同，測定結果的差別不大，不會對檢測結果產生本質性的影響。

2.4 不同用量氧化鋁的樣品測定

氧化鋁用量不同，對成分的吸附和保留程度也不同，因此采用不同用量氧化鋁處理樣品，比較芍藥苷的測定結果，層析氧化鋁的用量分別為0g，2g和4g，測定結果（見附表2）。

實驗結果表明：氧化鋁用量不同時，對芍藥苷的測定結果有很大影響，不進行氧化鋁柱層析洗脫樣品即氧化鋁用量為0g時，測定結果為合格。

2.5 不同批號及不同用量氧化鋁樣品測定結果

樣品采用氧化鋁柱層析的方法測定結果為不合格，而不進行氧化鋁柱層析則合格，是標準有錯誤嗎？但本藥品已研發多年，且其它藥品的芍藥苷測定過程也有采用氧化鋁柱層析的。如果本次檢驗不采用氧化鋁處理，那么檢驗結果不合法，由此可見，氧化鋁就成為影響含量測定結果的關鍵因素。考慮到是否是氧化鋁本身存在差異，因此我們考察了不同批號的氧化鋁對芍藥苷測定結果的影響，測定結果見附表3。

實驗結果表明，當采用11批號層析用氧化鋁測定時，使用不同用量的氧化鋁處理后的樣品，含量測定結果差別不大，且均符合標準規定，即含量測定值為合格。因此采用不同批號的氧化鋁測定時，芍藥苷的含量測定結果有很大差異，此差異可導致檢測判定結果的不同。

2.6 不同批號及不同用量氧化鋁對芍藥苷對照品測定結果

由于樣品中含有其它成分，為排除其它成分可能對氧化鋁柱層析吸附作用的干擾，同時也為了驗證不同批號氧化鋁對芍藥苷含量測定結果的影響，設計實驗，采用芍藥苷對照品溶液進行氧化鋁柱層析，以驗證不同批號不同用量層析用氧化鋁對芍藥苷含量測定的影響。

精密吸取對照品溶液3ml（3ml芍藥苷的含量為1.198mg），加在中性氧化鋁柱（內徑0.9cm，100～200目中性氧化鋁）上，其余按照供試品制備項下操作，測定結果見附表4。

實驗結果表明：進行氧化鋁柱層析后，和實際芍藥苷含量1.198mg比較，芍藥苷含量均下降，且證實了三種批號層析用氧化鋁處理芍藥苷后，測定結果均不相同。

附表1 不同洗脫速度樣品測定結果（n=2）

附表2 氧化鋁不同用量樣品測定結果（n=2）

附表3 不同批號及不同用量氧化鋁樣品測定結果（n=2）

附表4 不同批號及不同用量氧化鋁對照品測定結果（n=2）（mg）

3 討論

3.1 在過氧化鋁柱層析時，相同用量的氧化鋁，洗脫速度不同，對芍藥苷的吸附多少不同，結果不同，應適當控制洗脫速度。

3.2 在過氧化鋁柱層析時，氧化鋁用量不同，也會對芍藥苷含量測定的結果產生影響，但按照標準操作應能達到要求。

3.3 不同批號的柱層析氧化鋁對芍藥苷含量測定的結果有重要影響，可導致判定結果的錯誤。

在方法制定時，使用氧化鋁柱層析，不僅要考慮氧化鋁用量、洗脫速度、洗脫液體積，還應充分考慮到氧化鋁有可能發生變化，對芍藥苷測定結果產生的影響；有時一些問題如氧化鋁的吸附能力、各種變化不可能完全與制定標準時一致，這就有賴于藥品生產企業、檢驗部門及藥品質量研究部門等及時發現問題、解決問題，以避免誤判的發生，影響藥品含量測定的結果。

3.4 在質量標準使用過程中，我們要隨著各種條件的變化，針對有些原來不重要的細節要逐漸變為需受控的條件，例如本次實驗中采用了三種批號的氧化鋁，結果發現它們對芍藥苷均有吸附作用，且吸附大小不同，這些變化了的細節作為生產廠家應該最為熟悉。

當我們每發出一份不合格報告時，為保證不錯判，對于方法中容易存在問題的地方我們會與企業進行溝通，以避免誤判。因此，我們也希望企業能真正對自己的藥品負責，及時發現質量標準中逐漸成為判定結果影響因素的那些細節，并對標準提出修改，以便能更好地控制藥品的質量。