反相高效液相法測(cè)定氯唑沙宗片含量及溶出度

北京市房山區(qū)藥品檢驗(yàn)所（102400）李靈 劉德江 張寧

氯唑沙宗片為中樞性肌肉松弛劑，臨床上用于各種急、慢性軟組織扭傷、挫傷，運(yùn)動(dòng)后肌肉酸痛，肌肉勞損所引起的疼痛，由中樞神經(jīng)病變引起的肌肉痙攣以及慢性筋膜炎等。中國藥典尚未收載該藥，目前，氯唑沙宗片的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X009）-2005Z[1]。此標(biāo)準(zhǔn)中依然采用紫外分光光度法測(cè)定含量和溶出度。本文建立了反相高效液相色譜法測(cè)定氯唑沙宗片含量及溶出度，該方法操作簡(jiǎn)便，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20A高效液相色譜儀，SPD-20A紫外檢測(cè)器，多賽利斯CP225D電子天平。氯唑沙宗片6批，規(guī)格為0.2g，廠家及批號(hào)見附表1。氯唑沙宗對(duì)照品購于中國藥品生物制品檢定所（批號(hào)100364-200301，100.0%）。甲醇為進(jìn)口色譜純?cè)噭疄橹卣羲?/p>

2 溶液的制備

2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液 取氯唑沙宗對(duì)照品約10mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。

2.2 對(duì)照品溶液 取氯唑沙宗對(duì)照品約10mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取5mL，置50mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為10μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液 取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于氯唑沙宗10mg），置100mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置50mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，即得濃度為10μg/mL的供試品溶液。

3 色譜條件

島津LC-20A高效液相色譜儀，SPD-20A檢測(cè)器，GL inertsil DOS-SP色譜柱（5020-02745，4.6mm×15cm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-水（60∶40），檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，流速為1.0mL/min，進(jìn)樣量為20μL。

4 方法與結(jié)果

4.1 耐用性和系統(tǒng)適用性 取對(duì)照品溶液，在不同品牌色譜柱和不同的流動(dòng)相比例下分別進(jìn)樣，比較分析，考察方法的耐用性，測(cè)定結(jié)果見附表2。在上述色譜條件下，氯唑沙宗理論塔板數(shù)為7438，色譜圖見附圖所示。

4.2 線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1、2、5、10、15、20mL，分別置50mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為：Y=375.76X+23.15（R2=1）。

試驗(yàn)結(jié)果表明，在2～40μg/mL范圍內(nèi)氯唑沙宗濃度與峰面積之間有良好的線性關(guān)系。

4.3 精密度試驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下氯唑沙宗對(duì)照品溶液，按照“3”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，求得峰面積的RSD為0.0068%。

4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取氯唑沙宗對(duì)照品，按“2.2”項(xiàng)方法制成含氯唑沙宗10μg/mL的溶液5份，分別按“3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，求得含量均值為9.95μg/mL，RSD為0.18%，試驗(yàn)結(jié)果表明該方法有較高的重復(fù)性。

附圖 氯唑沙宗對(duì)照品色譜圖

附表1 供試藥品廠家、批號(hào)及規(guī)格

附表2 不同色譜柱及流動(dòng)相比例下的保留時(shí)間

附表3 加樣回收率

附表4 新方法與原方法含量測(cè)定結(jié)果

附表5 新方法與原方法溶出度測(cè)定結(jié)果

4.5 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取已知含量的氯唑沙宗片（批號(hào)20110101，含量93.1%）共9份，分別精密添加一定量的對(duì)照品，按“2.3”項(xiàng)下方法操作，分別精密量取20μL，注入色譜儀并記錄色譜圖，結(jié)果見附表3，平均回收率為100.2%，試驗(yàn)結(jié)果表明該方法的回收率良好。

4.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取含量測(cè)定項(xiàng)下溶液置于室溫放置，分別于2，4，6，8，24，48小時(shí)進(jìn)樣分析，同時(shí)記錄色譜圖，求得峰面積的RSD為0.076%，試驗(yàn)結(jié)果表明含量測(cè)定用溶液室溫放置至少可穩(wěn)定48小時(shí)。

4.7 含量測(cè)定 取氯唑沙宗對(duì)照品及片劑，分別按照“2.2”和“2.3”項(xiàng)下方法，制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，精密量取20μL，注入色譜儀并記錄色譜圖，供試品圖譜與對(duì)照品圖譜一致，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品的含量，并同時(shí)按原標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定含量，結(jié)果見附表4。

4.8 溶出度測(cè)定 按國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X009）-2005Z溶出方法取樣，用流動(dòng)相配制成含氯唑沙宗10μg/mL的供試品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液，分別精密量取20μL，注入色譜儀并記錄色譜圖，供試品圖譜與對(duì)照品圖譜一致，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品的溶出度，并同時(shí)按原標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定溶出度，試驗(yàn)結(jié)果見附表5。

5 討論

5.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 分別掃描了以60%甲醇，0.1mol/L的NaOH溶液和0.1mol/L的HCl溶液為溶劑時(shí)氯唑沙宗的紫外光譜圖，確定測(cè)定波長(zhǎng)為280nm，在此波長(zhǎng)下無雜質(zhì)干擾，專屬性好。

5.2 流動(dòng)相的選擇 根據(jù)參考文獻(xiàn)[2][3][4][5]，確定流動(dòng)相為甲醇-水（60∶40），簡(jiǎn)單易配制，且較為環(huán)保。

5.3 供試品溶液處理方法的選擇 國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X009）-2005Z中含量測(cè)定和溶出度測(cè)定分別采用0.1mol/L的NaOH溶液和稀鹽酸為溶劑制備供試品和對(duì)照品，操作耗時(shí)，需要配置多種溶液造成浪費(fèi)。本方法中采用流動(dòng)相為溶劑制備含量測(cè)定和溶出度供試品及對(duì)照品，方法更具有系統(tǒng)性，更適于檢驗(yàn)工作人員操作。