丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶活性在不同保存條件下的穩(wěn)定性分析

李巖 王宏 苑雪峰

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶活性在不同保存條件下的穩(wěn)定性分析

李巖 王宏 苑雪峰

目的探討血標(biāo)本存放溫度、時(shí)間及血細(xì)胞與血漿分離保存對(duì)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測(cè)結(jié)果的影響。方法采集抗凝血標(biāo)本立即離心檢測(cè)ALT初始值，然后分離血漿分別在25℃、4℃、-20℃、-80℃條件下保存，分別檢測(cè)不同時(shí)間ALT活性。結(jié)果在所有保存條件下血標(biāo)本中ALT活性隨保存時(shí)間延長(zhǎng)而下降，4℃保存時(shí)可以穩(wěn)定一周，分離血漿冰凍保存-80℃比-20℃更加穩(wěn)定，靠近血細(xì)胞層血漿ALT下降率低于血漿表層。結(jié)論ALT活性的穩(wěn)定性與血標(biāo)本存放的溫度有著密切的關(guān)系，認(rèn)識(shí)血標(biāo)本ALT活性在貯存過(guò)程中的變化規(guī)律，有助于確保血液檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT);保存條件;穩(wěn)定性

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶是肝臟功能診斷的重要指標(biāo)之一，已被衛(wèi)生部指定為采供血機(jī)構(gòu)對(duì)供血者初篩和血液復(fù)檢的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目［1～2］。一般情況下，ALT檢測(cè)的最佳時(shí)間應(yīng)該是采集血樣后立即檢測(cè)。但在各血液中心(血站)的實(shí)際工作中，ALT的復(fù)檢通常要在采集的血樣保存一段時(shí)間后才能進(jìn)行，在這期間由于保存方式、時(shí)間、溫度等因素的影響，ALT的測(cè)定值將會(huì)有不同程度的變化。本文旨在探討不同保存條件下ALT最適檢測(cè)時(shí)限，以減少檢測(cè)結(jié)果誤差，確保血液安全。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 隨機(jī)選擇經(jīng)過(guò)健康詢問(wèn)，自述無(wú)繼往病史，ALT快速檢驗(yàn)合格的健康獻(xiàn)血者40人，各采集EDTA抗凝血8 ml，無(wú)明顯溶血脂血。

1.2 儀器與試劑 ECOM-F6124型半自動(dòng)生化分析儀(倍肯公司);-80℃ 冰箱;-20℃冰箱;普通離心機(jī)等;ALT試劑盒(液體)(上海科華東菱診斷用品有限公司，批號(hào)20110921);

1.3 方法 采用半自動(dòng)生化分析儀的單波長(zhǎng)速率法分別檢測(cè)0 h(初始值)、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、8 d、9 d、10 dALT 值，冰凍血漿檢測(cè)時(shí)間為 1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、8 d、9 d、10 d、1 m。

實(shí)驗(yàn)選擇其中10份標(biāo)本，在采集后立刻離心并檢測(cè)ALT初始值，然后分離上層血漿分別放置在25℃、4℃、-20℃、-80℃條件下保存。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

2.2 圖1所示各種溫度下ALT活性隨時(shí)間延長(zhǎng)而呈下降趨勢(shì)。

2.3 采用單因素方差分析各溫度組內(nèi)保存時(shí)間對(duì)ALT活性的影響的顯著性，其方差分析結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 不同溫度、不同時(shí)間下分離保存的血漿ALT檢測(cè)結(jié)果(n=10)(U/L)

表2 溫度組內(nèi)保存時(shí)間對(duì)ALT活性的影響(n=10)

由上表可見(jiàn)，在保存8 d時(shí)間內(nèi)，25℃和-20℃時(shí)保存時(shí)間對(duì)ALT活性的影響顯著，而4℃和-80℃時(shí)在測(cè)定的時(shí)間內(nèi)ALT無(wú)顯著性變化，建議短期保存血漿采用4℃，在一周內(nèi)ALT活性是比較穩(wěn)定的。如果要長(zhǎng)期冰凍保存血樣則選擇-80℃要比-20℃更加穩(wěn)定。

2.4 采用t檢驗(yàn)分析在保存時(shí)間相同的情況下不同保存溫度時(shí) ALT活性的差異。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果見(jiàn)表3，4。

表3 25℃和4℃保存時(shí)間相同時(shí)ALT活性的差異的分析(n=10)

由上表可見(jiàn)，在24 h內(nèi)，二者ALT活性無(wú)明顯差異，從第2天開(kāi)始出現(xiàn)顯著性差異，25℃保存2 d后，血漿ALT檢測(cè)的準(zhǔn)確性將受到影響。

表4 -20℃和-80℃保存時(shí)間相同時(shí)ALT活性的差異的分析(n=10)

由上表可見(jiàn)，從第5天開(kāi)始，二者ALT活性開(kāi)始出現(xiàn)顯著性差異，-20℃保存5 d后，血漿ALT檢測(cè)的準(zhǔn)確性將受到影響。

3 討論

在整個(gè)保存過(guò)程中，ALT活性的整體趨勢(shì)是下降的，這是符合酶的活性衰減規(guī)律的［3］。因?yàn)槊甘谴呋矬w內(nèi)化學(xué)反應(yīng)的一類特殊蛋白質(zhì)，離開(kāi)人體后的酶將逐漸失去活性。由上述實(shí)驗(yàn)證明［4］，不同溫度下不同時(shí)間ALT活性平均下降率是不同的，可以看出4℃保存血標(biāo)本是最穩(wěn)定的。因?yàn)?℃時(shí)，細(xì)菌是最不容易繁殖的，雖然ALT也應(yīng)該下降，但由于水分蒸發(fā)等因素存在，ALT的測(cè)定值在一周內(nèi)還是比較穩(wěn)定的。25℃也是較接近室溫，這種情況最適合細(xì)菌繁殖并產(chǎn)生大量的代謝物，導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂溶血，由于紅細(xì)胞內(nèi)ALT活性是血漿的7倍，所以溶血會(huì)導(dǎo)致血漿ALT檢測(cè)結(jié)果升高。另外可以看出，在長(zhǎng)期保存血漿時(shí)，ALT活性在-80℃比-20℃條件下穩(wěn)定，所以如果冰凍保存選擇-80℃。

同國(guó)內(nèi)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道相比，本文增添了分離血漿保存和冰凍保存及血液標(biāo)本自然沉降情況下來(lái)更加全面地分析ALT活性的變化。為了使實(shí)驗(yàn)與日常工作相一致，從而更具有知道意義，所有的血樣管都使用普通塑料軟管，血樣為EDTA抗凝的全血標(biāo)本。除-80℃外，其他溫度均用水銀溫度計(jì)進(jìn)行溫度監(jiān)測(cè)。而且盡量模擬血站日常工作的模式來(lái)進(jìn)行檢測(cè)ALT［5］，應(yīng)用半自動(dòng)生化分析儀也使實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性都得到提高。

盡管如此，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中難免出現(xiàn)誤差和錯(cuò)誤。首先，應(yīng)用半自動(dòng)生化分析儀有利也有弊，由于不能大量批量地檢測(cè)，使得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)較少，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程耗時(shí)過(guò)長(zhǎng)。第二，由于每份標(biāo)本的血漿數(shù)量有限，所以每次測(cè)量時(shí)不能多次測(cè)量取平均值，這將給數(shù)據(jù)帶來(lái)一定誤差。第三，ALT活性受到多種人為和非人為因素影響，如試劑的可靠和穩(wěn)定性、儀器的校準(zhǔn)、參數(shù)的設(shè)置、生理病理等因素，本實(shí)驗(yàn)盡量對(duì)上述種種因素加以控制，但難免出現(xiàn)紕漏。

總之，隨著血漿ALT成為輸血前檢驗(yàn)的一項(xiàng)重要指標(biāo)，ALT的檢測(cè)技術(shù)的研究越來(lái)越多。本文主要研究在不同保存條件下血漿丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定值的變化，通過(guò)試驗(yàn)來(lái)初步摸索保存血樣的最佳方式，從而提高對(duì)ALT檢測(cè)的準(zhǔn)確性與穩(wěn)定性。

4 結(jié)論

ALT活性的穩(wěn)定性與血標(biāo)本存放的溫度與血漿是否分離保存有著密切的關(guān)系。對(duì)于ALT檢測(cè)而言，4℃存放標(biāo)本是最理想的保存方式，在25℃存放標(biāo)本最好不要超過(guò)24 h［6］。如果分離血漿保存，則采用-80℃冷凍最穩(wěn)定［7］。認(rèn)識(shí)血標(biāo)本ALT值在貯存過(guò)程中的變化規(guī)律，有助于確保血液檢測(cè)的準(zhǔn)確性。相信經(jīng)本研究較系統(tǒng)的檢測(cè)、對(duì)比得出的結(jié)論，為血站檢驗(yàn)科在日常工作中標(biāo)本放置與保存提供有價(jià)值的參考，避免由于ALT檢測(cè)的不規(guī)范而造成的血液檢測(cè)不合格，盡量減少由此引起的血液報(bào)廢，同時(shí)對(duì)進(jìn)一步研究影響ALT改變的根本原因提供依據(jù)，對(duì)血液中心(血站)的ALT檢測(cè)提供更多的研究及參考價(jià)值。

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Stability of serum alanine aminotransferase activity in vary storge conditions

LI Yan，WANG Hong，YUAN Xue-feng.Changchun blood center，Changchun 130031，China

ObjectiveIn this study the authors discuss the effects of temperature，time and separated serum on serum alanine aminotransferase activity(ALT)levels.MethodsAnticoagulant samples were collected by venipuncture to centrifuging.Serum was tested immediately for baseline ALT levels and aliquots were stored at 25℃，4℃，-20℃，-80℃ for detecting ALT levels respectively.Results［2］A gradual loss of activity over time under all store conditions was observed.ALT levels were stability for one week when storing at 4℃.The degradation of ALT activity was greater at-20℃than at-80℃.The percentage of ALT levels decline in sample drawn distal to the red cells exceeded tuose drawn distal to the red cells.ConclusionThe relationship of Stability of serum alanine aminotransferase activity and temperature.It is useful for insuring the detect veracity to recognize the rule of the change of serum alanine aminotransferase activity．

Aminotransferase activity(ALT);Storge condition;Stability

130031長(zhǎng)春市中心血站

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 ALT測(cè)定值與初始值比較，計(jì)算出變化百分率，求其平均值。將整個(gè)實(shí)驗(yàn)的450個(gè)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，按實(shí)驗(yàn)組別列出表1。組間均值的差異采用t檢驗(yàn)，組內(nèi)均值差異采用單因素方差分析。