三亞地區婦女人乳頭瘤病毒感染的分子流行病學調查

王玉豐， 林 玲， 劉春雨， 劉 斌， 李志霞， 李 強

(1．海南省第三人民醫院檢驗科，海南三亞 572000;2．海南省第三人民醫院科教科，海南三亞 572000;3．三亞市人民醫院檢驗科，海南三亞 572000)

三亞地區婦女人乳頭瘤病毒感染的分子流行病學調查

王玉豐1， 林 玲2， 劉春雨1， 劉 斌1， 李志霞1， 李 強3

(1．海南省第三人民醫院檢驗科，海南三亞 572000;2．海南省第三人民醫院科教科，海南三亞 572000;3．三亞市人民醫院檢驗科，海南三亞 572000)

目的 分析三亞地區婦女人乳頭瘤病毒(HPV)的感染狀況以及病毒亞型在人群中的分布情況。方法

采用核酸分子快速導流雜交技術，對2009年2月至2011年4月在三亞地區醫院婦產科門診就診的2 302例婦女進行生殖道21種HPV基因型的篩查。結果 2 302例婦女中共檢出HPV陽性562例，陽性率為24．41%，其中≤20歲年齡組HPV陽性率最高(36．00%)，陽性率隨年齡增加呈下降趨勢。多重感染比例為58．54%，以二重感染最多見。HPV基因型檢出率由高到低依次為:HPV16(21．06%)、HPV6(14．16%)、HPV58(13．02%)、HPV18(9．63%)、HPV52(9．29%)、HPV11(6．80%)、HPV31(6．34%)、HPVCP8304(5．21%)、HPV42(3．06%)、HPV53(2．04%)、HPV51(1．70%)、HPV66(1．70%)、HPV68(1．02%)、HPV33(0．91%)、HPV39(0．68%)、HPV44(0．68%)、HPV35(0．57%)、HPV45(0．57%)、HPV56(0．57%)、HPV43(0．57%)、HPV59(0．45%)。結論

三亞地區婦女HPV感染率及多重感染率均較高，HPV常見高危型別依次為16、58、18、52和31型，分布具有一定區域性。

人乳頭瘤病毒;宮頸腫瘤;流行病學

許多流行病學調查和實驗室研究都已證明，幾乎所有的宮頸癌病例(99%)都與生殖器官感染人乳頭瘤病毒(HPV)有關。因此世界衛生組織(WHO)建議，將HPV DNA的檢測作為宮頸癌初篩的手段，以降低其發病率及死亡率。近年來，國內外資料表明，HPV在人群中的感染率及感染基因型別具有較大的區域差異性。三亞市作為海南省國際旅游島最重要的旅游城市，人口流動性較大，有關該地區婦女人群HPV感染的流行病學特征，目前文獻未見報道。為此，我們采用核酸分子快速導流雜交技術，對該地區婦女宮頸分泌物進行HPV檢測分析，以期了解該地區婦女人群HPV的感染狀況，為該地區宮頸癌的防治提供依據。

材料和方法

一、病例來源

選擇2009年2月至2011年4月在海南省第三人民醫院及三亞市人民醫院婦科門診就診的、自愿接受生殖道HPV感染篩查的2 302例有性生活史婦女，年齡18～68歲。剔除二次復查數據。

二、儀器及試劑

HPV檢測試劑盒和HybriMax醫用核酸分子快速雜交儀由潮州凱普生物化學公司提供;基因擴增儀為杭州博日科技有限公司產品(型號為TC-25/H)。

三、方法

1．標本采集 使用窺陰器暴露宮頸，先用棉拭子除去宮頸口處多余的分泌物，后將一個專用小刷子完全插入陰道內，在子宮頸處輕輕地旋轉2～3圈，以收集宮頸口內外的脫落細胞。將采集了細胞的小刷子放入裝有專用細胞保存液的小瓶中，及時送檢。

2．HPV分型檢測步驟 (1)HPV DNA分離提取;(2)聚合酶鏈反應(PCR)擴增;(3)核酸分子快速導流雜交;(4)顯色及結果判斷。以上過程均嚴格按照試劑盒操作說明進行。該系統可一次性檢測出21種HPV基因型，包括13種高危型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)、5 種低危型(HPV6、11、42、43、44)以及 3 種中國人群常見基因型(HPV 53、66、CP8304)。以上HPV基因型如同時出現2種或2種以上陽性，為多重感染。

四、統計學方法

采用SPSS 16．0軟件進行統計學分析，各年齡組間HPV感染率的差異用χ2檢驗，P＜0．05為差異有統計學意義。

結 果

一、HPV總陽性率及不同年齡組陽性率比較

2 302例研究對象，共檢測出HPV陽性562例，總陽性率為24．41%。各年齡組HPV陽性情況見表1。從表中可見，20歲以下(含20歲)年齡組HPV陽性率最高，達36．00%，其次為21～30歲年齡組(28．69%)，但兩年齡組相比較，差異無統計學意義(χ2=2．801，P ＞0．05);31 ～40 歲、41～50歲及≥50歲年齡組陽性率依次為20．81%、20．00% 及 18．70%，與 20 歲以下年齡組相比較，差異均具有統計學意義(P＜0．05)。

表1 各年齡組HPV檢出情況

二、HPV多重感染情況

在檢測出HPV陽性的562例婦女中，單一的HPV基因型感染者233例，占41．46%;多重感染者329例，占58．54%，其中二重感染179例，占31．85%(179/562)，三重感染 86 例，占 15．30%(86/562)，四重感染 37 例，占 6．58%(37/562)，五重感染21例，占3．74%(21/562)，六重感染6例，占 1．07%(6/562)。

三、不同HPV基因型陽性構成

21種HPV基因型，在本研究中均被檢測出來。累計單一感染及多重感染，共檢測出883例HPV基因型陽性。檢出最高的是HPV16，共186例，占 21．06%(186/883)，最低的是 HPV59，僅 4例陽性，占0．45%(4/883)，其他基因型按陽性比例由高到低依次為:HPV6(14．16%)、HPV58(13．02%)、HPV18(9．63%)、HPV52(9．29%)、HPV11(6．80%)、HPV31(6．34%)、HPVCP8304(5．21%)、HPV42(3．06%)、HPV53(2．04%)、HPV51(1．70%)、HPV66(1．70%)、HPV68(1．02%)、HPV33(0．91%)、HPV39(0．68%)、HPV44(0．68%)、HPV35(0．57%)、HPV45(0．57%)、HPV56(0．57%)、HPV43(0．57%)。

討 論

年齡是宮頸癌和HPV感染的重要影響因素。本次調查結果顯示，三亞地區婦女人群以20歲以下(含20歲)年齡組HPV檢出陽性率最高，達36．00%，其次為 21 ～30 歲年齡組(28．69%)，50歲以上年齡組最低，為18．70%。感染率隨年齡增大呈下降趨勢，與 Beby-Defaux等［1］和 Sellors等［2］以及國內薛耀華等［3］的報道相似，提示年輕女性也是本地區HPV感染的主要高發人群。就這一特點，有學者推測可能與年輕女性性生活比較頻繁，免疫系統未被致免，易受HPV感染有關。約一半左右的年輕女性在開始性行為后的3年內會感染HPV，但絕大多數會在短期內自動消失，但可反復感染。而如果是持續的HPV高危型感染，則很可能進一步導致宮頸的惡性病變。因此，年輕女性應成為本地區宮頸癌篩查的重點人群。

HPV由于各種亞型之間編碼外殼蛋白的基因變異較大，不同亞型病毒之間基本上沒有交叉保護性抗體，容易造成不同亞型HPV的多重感染和多次感染。本研究采用核酸分子快速導流雜交技術調查三亞地區婦女HPV多重感染的比例為58．54%，明顯高于姚軍等［4］(37．77%)及 Bachtiary等［5］(43．9%)的報道。關于 HPV 多重感染是否會增加宮頸癌的風險，目前尚無統一意見，但更多學者傾向認為，HPV多重感染更易導致宮頸病變，增加宮頸癌的風險。Lee等［6］發現HPV多重感染發生宮頸癌的風險比單一型別感染增加1．5倍。為此，本地區婦女HPV多重感染率高的特點應引起臨床足夠重視。

目前，已明確宮頸病變的嚴重程度與HPV感染的型別密切相關。感染低危型可以導致輕度宮頸上皮內瘤樣變(CINⅠ)和部分中度宮頸上皮內瘤樣變(CINⅡ);感染高危型則可導致CINⅡ、重度宮頸上皮內瘤樣變(CINⅢ)及侵潤性宮頸癌［7］。諸多研究表明，目前世界范圍內HPV感染最常見的低危型為6和11型，這一點在本研究中也得到了驗證;最常見的高危型為16型，其他型別不同地區間存在較大差異，如文獻報道，非洲地區優勢 HPV 高危型為 16、18、58、52、51，歐洲為16、18、31、33、58，南美洲為 16、18、61、71、58，北美洲為 16、53、52、18、39，亞洲為 16、52、58、18、56(但這里報道的亞洲人群所包括的中國女性較少)［8］。而本研究顯示，三亞地區高危型HPV的優勢型別依次為16、58、18、52 和 31，與以上地區的優勢型別均有所不同。

近年來，HPV疫苗的問世給人類宮頸癌的預防帶來了曙光。但是，目前研制成功的HPV疫苗主要為針對16、18型的二價疫苗和針對6、11、16和18型的四價疫苗。對于接種前從未感染過HPV的婦女，預計能對其中70%的人產生預防宮頸癌的作用，約90%的人產生預防生殖器疣的作用［9］。但由于HPV基因型在各地區的分布不盡相同，因此以上2種疫苗的預防效果可能因地而異。未來HPV疫苗的研制應覆蓋更多的HPV亞型。

［1］Beby-Defaux A，Bourgoin A，Ragot S，et al．Human papillomavirus infection of the cervix uteri in women attending a health examination center of the French social security［J］．JMed Virol，2004，73(2):262-268．

［2］Sellors JW，Mahony LB，Kaczorowski J，et al．Prevalence and predictors of human papillomavirus infection in women in Ontario，Canada．Survey of HPV in Ontario Women(SHOW)Group［J］．CMAJ，2000，163(5):503-508．

［3］薛耀華，陳子祥，鄭寶文，等．廣東婦女人乳頭瘤病毒感染及宮頸細胞學的對照研究［J］．中華腫瘤雜志，2005，27(5):283-285．

［4］姚 軍，李 曼，鐘 萍，等．HPV多重感染與宮頸病變的相關性研究［J］．華中科技大學學報(醫學版)，2010，39(5):705-707．

［5］Bachtiary B，Obermair A，Dreier B，et al．Impact of multiple HPV infection on response to treatment and survival in patients receiving radical radiotherapy for cervical cancer［J］．Int JCancer，2002，102(3):237-243．

［6］Lee SA，Kang D，Seo SS，et al．Multiple HPV infection in cervical cancer screened by HPV DNA chip［J］．Cancer Lett，2003，198(2):187-192．

［7］黃冰玉，鄒穎剛，徐耀宏，等．應用導流雜交基因芯片技術對HPV感染基因分型檢測的研究［J］．中國實驗診斷學，2009，13(8):1065-1067．

［8］趙方輝，喬友林．人乳頭瘤病毒感染分子流行病學研究［J］．中國實用婦科與產科雜志，2010，26(5):327-331．

［9］徐愛強，宋艷艷．宮頸癌病毒病因學說的確立及其發展［J］．醫學與哲學(臨床決策論壇版)，2011，6(4):70-72．

An epidem iological research on human papillomavirus infection among women in Sanya area

WANG

Yufeng1，LIN Ling2，LIU Chunyu1，LIU Bin1，LIZhixia1，LIQiang3． (1．Department of Clinical Laboratory，the Third People's Hospital of Hainan Province，Hainan Sanya 572000，China;2．Department of Scientific Education，the Third People's Hospital of Hainan Province，Hainan Sanya 572000，China;3．Department of Clinical Laboratory，People's Hospital of Sanya City，Hainan Sanya 572000，China)

Objective To study the status of infection and the genotype distribution of human papillomavirus(HPV)among women in Sanya area．M ethods A totalof2 302 outpatientwomen in Sanya area from February 2009 to April2011 were enrolled and determined for21 HPV genotypes by DNA flow-through hybridization technique．Results

Among 2 302 cases，562 cases were HPV positive，and the total positive rate was 24．41% ．The highest infection rate(36．00%)was found in the age group of≤20 years old，and the positive rate of HPV decreased with age．The total multiple infection rate was 58．54%．Among them，the double infection was common．The detection rate of detecting HPV genotypes were HPV16(21．06%)，HPV6(14．16%)，HPV58(13．02%)，HPV18(9．63%)，HPV52(9．29%)，HPV11(6．80%)，HPV31(6．34%)，HPVCP8304(5．21%)，HPV42(3．06%)，HPV53(2．04%)，HPV51(1．70%)，HPV66(1．70%)，HPV68(1．02%)，HPV33(0．91%)，HPV39(0．68%)，HPV44(0．68%)，HPV35(0．57%)，HPV45(0．57%)，HPV56(0．57%)，HPV43(0．57%)and HPV59(0．45%)．Conclusions The prevalence of HPV infection andmultiple infection are common in Sanya area．Themost common high-risk genotypes are HPV 16，58，18，52 and 31．The distributions have their own area character．

Human papillomavirus;Cervical tumor;Epidemiology

2011-12-19)

(本文編輯:姜 敏)

1673-8640(2012)08-0628-03

R373．9

A

王玉豐，男，1978年生，學士，主管技師，主要從事細胞遺傳及分子生物學檢驗工作。