冷凍聯合125I粒子植入治療對Ⅳ期胰腺癌患者組織CEACAM6表達的影響

曾健瀅 周序瓏 姚飛 劉衛群 陳繼冰 李家亮 牛立志 左建生 徐克成

冷凍聯合125I粒子植入治療對Ⅳ期胰腺癌患者組織CEACAM6表達的影響

曾健瀅 周序瓏 姚飛 劉衛群 陳繼冰 李家亮 牛立志 左建生 徐克成

冷凍消融作為近年興起的腫瘤消融治療的手段之一，目前已應用于治療不能手術切除的胰腺腫瘤[1-4]。近年有報道指出，經皮冷凍聯合125I粒子植入治療是一種可降低腫瘤負荷、消除殘存腫瘤組織、有效延長患者生存期的微創聯合治療方法[5-6]。癌胚抗原相關細胞附著分子6(carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6，CEACAM6)屬于CEA家族中一種具有癌基因功能的黏附分子蛋白，在胰腺癌發生的早期即表達，被認為是一種新的胰腺癌標記物。Duxbury等[7]報道，92%的胰腺癌組織表達CEACAM6，且其表達水平與癌分化程度有密切關系。本研究觀察冷凍聯合125I粒子植入治療胰腺癌后，癌組織CEACAM6表達的變化，評估該聯合療法的應用價值。

一、材料與方法

1．標本來源：收集廣州復大腫瘤醫院2010年7月至2011年11月應用冷凍聯合125I粒子植入治療的4例原發性胰頭癌患者，其中男性3例，女性1例，平均年齡55歲。腫瘤長徑4.7～6.0 cm。TNM分期皆為Ⅳ期。1例伴肝動脈淋巴結轉移，2例伴肝轉移，1例伴肝、肺轉移。1例因胰腺癌侵犯胃竇部十二指腸降部曾行膽腸吻合術，1例因十二指腸梗阻曾行膽總管支架植入術及胃腸吻合術，1例因皮膚及鞏膜黃染，肝內膽總管、胰管擴張曾行3個胃腸吻合術，1例伴胰動、靜脈侵犯。冷凍前當天及冷凍后7 d，在B超引導下用18G活檢鉗從病灶處不同方向取組織2條，置中性甲醛固定。

2．冷凍消融治療及125I粒子植入：患者取仰臥位，用B超加CT掃描定位后將2～4支1.7 mm冷凍探針于穿刺點插入胰腺頭部腫塊靶區內。在B超確認探針到位并未傷及胃腸道后，視腫瘤大小冷凍3～10 min。冷凍溫度為-110～-170℃。冷凍術后，取PET/CT顯示有活性處為靶區，在B超引導下用PTC針從穿刺點分別插入胰頭部腫塊的靶區內布粒子，125I粒子間隔0.5～1 cm，記錄總活度及半衰期。

3．腫瘤組織病理學檢查及CEACAM6蛋白檢測：胰腺組織常規行病理學檢查。采用ChemMate EnVision HRP試劑盒檢測樣本的CEACAM6蛋白，嚴格按說明書操作。用已知陽性片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。對全片染色強度較低的病例隨機選取5個視野，對全片染色強度較高病例則隨機選取1個視野，每個40倍視野至少有200個可用于評價的腫瘤細胞。參考McCarty等[8]標準進行評分。

二、結果

1．組織病理學改變：冷凍聯合125I粒子植入治療前腫瘤細胞大小不等，圓形或卵圓形，核大深染，染色質粗，呈乳頭狀排列，有不規則腺腔結構；治療后腫瘤中心區凝固性壞死，壞死邊緣區纖維組織內見少量腫瘤細胞(圖1)。

a:治療前(HE ×400)；b:治療后腫瘤壞死中心(HE ×400)；C:治療后腫瘤壞死邊緣(HE ×200)

圖1冷凍聯合125I粒子植入治療前后胰腺癌組織病理變化

2．腫瘤組織CEACAM6表達：CEACAM6陽性表達主要定位于腫瘤細胞的胞膜和胞質內，呈棕黃色顆粒狀。冷凍聯合125I粒子植入治療前胰腺癌細胞呈強陽性反應；治療后腫瘤壞死中心區殘余細胞碎片示非特異性染色，壞死邊緣區腫瘤細胞呈弱陽性反應。治療前后胰腺癌細胞CEACAM6表達評分分別為(1.12±0.08)和(0.75±0.22)分，差異有統計學意義(P= 0.013，圖2)。

a:治療前(IHC ×400)；b:治療后腫瘤壞死中心(IHC ×400)；c:治療后腫瘤壞死邊緣(IHC ×200)

圖2冷凍聯合125I粒子植入治療前后胰腺癌組織CEACAM6表達

討論冷凍消融時，冷凍探針在靶組織區形成的冰球只有大于靶病變邊緣至少1 cm時才能保證靶組織完全處于有效冷凍區域內[9]。對于中晚期胰腺癌而言，腫瘤較大且邊緣多不規則，特別是位于胰腺頭部或鉤突部腫瘤，常無完整的“安全邊緣”[10-12]，冷凍形成的冰球難以覆蓋足夠寬的安全邊緣的腫瘤。因此，在冷凍后的腫瘤冷凍區邊緣部位植入放射性粒子，通過其發出的持續低能伽馬射線，可起到對殘余的腫瘤細胞及腫瘤干細胞持續殺滅作用。

CEACAM6是免疫球蛋白超家族甘油磷酸肌醇(GPI)相關成員，其N端有由108個氨基酸組成的免疫球蛋白可變區(IgV)樣結構域和6個免疫球蛋白恒定區(IgC)2型樣結構域，通過糖基磷脂酰肌醇連接在細胞膜上。它與多種惡性實體腫瘤的發生、發展及預后有著密切的相關性[13-16]。Kalinina等[17]報道，大鼠胰腺癌種植瘤CEACAM6的過表達與胰腺癌細胞黏附、侵襲、惡性轉移、腫瘤細胞化療敏感性及抗凋亡等生物學行為密切相關；下調種植瘤CEACAM6的表達可以減少微血管形成、抑制腫瘤生長和轉移，提高腫瘤細胞對化療藥物的敏感性。

本研究結果顯示，治療前癌組織CEACAM6強陽性表達，治療后冷凍中心區的胰腺腫瘤細胞完全壞死，但由于腫瘤過大，邊緣不規則，邊緣區殘存少量癌細胞。這些癌細胞的CEACAM6表達呈弱陽性，表明冷凍聯合125I粒子植入療法可下調殘存癌細胞CEACAM6的表達，提示該療法還可以抑制殘余腫瘤細胞的增殖與生長，降低腫瘤復發和轉移的可能性。

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10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2012.06.016

海珠區科技計劃項目(2010-Y-27)

510305 廣州，中國科學院廣州生物院附屬復大醫院，廣州復大腫瘤醫院中心實驗室

牛立志，Email:fudaclab@gmail.com

2012-03-16)

(本文編輯：呂芳萍)