肝細胞肝癌中HBX趨化因子受體CXCR4及配體CCR7與MMP9的相關(guān)性分析

黃 為 (潛江市衛(wèi)生局衛(wèi)生監(jiān)督局，湖北 潛江 433100)

胡曉立 (潛江市中心醫(yī)院外一科，湖北 潛江 433100)

肝細胞肝癌中HBX趨化因子受體CXCR4及配體CCR7與MMP9的相關(guān)性分析

黃 為 (潛江市衛(wèi)生局衛(wèi)生監(jiān)督局，湖北 潛江 433100)

胡曉立 (潛江市中心醫(yī)院外一科，湖北 潛江 433100)

目的：觀察趨化因子受體CXCR4及配體CCR7與基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase，MMPs)在肝細胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的表達和臨床病理學(xué)意義。方法：用免疫組織化學(xué)法檢測HCC組織40例中CXCR、CCR7和MMP9表達，并將上述檢測結(jié)果結(jié)合臨床資料進行相關(guān)性分析。結(jié)果：40例癌組織中20例呈CXCR4高表達，19例呈CCR7高表達，23例MMP9高表達，CXCR、CCR7和MMP9在HCC中，均與HCC病理分級和門靜脈癌栓以及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有明顯正相關(guān)；CXCR、CCR7均與MMP9呈明顯正相關(guān)。結(jié)論：CXCR、CCR7聯(lián)合 MMP9可以作為評估HCC惡性程度和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的腫瘤標(biāo)志物。

原發(fā)性肝癌；趨化因子受體CXCR4；趨化因子受體配體CCR7；基質(zhì)金屬蛋白酶9；病理分型

肝細胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率在全世界高居第5位，病死率高[1]。通過有效的腫瘤標(biāo)志物判斷HCC的惡性程度，進行針對性的診治在近年來越來越受到重視。研究顯示，趨化因子受體CXCR4與其配體CCR7構(gòu)成的生物學(xué)軸與多種腫瘤的趨向性侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)。基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)9可降解腫瘤細胞基底膜和細胞外基質(zhì)的蛋白成分，瘤細胞周圍基底膜通透性和運動能力發(fā)生變化[2]，從而改變腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移潛能。然而，CXCR4及其配體CCR7與MMP9的相關(guān)性卻尚不明確。我們將探究人HCC標(biāo)本中CXCR4/CCR7和MMP9的表達及臨床意義，并進一步分析其相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1材料

選取2005年9月至2010年10月潛江市中心醫(yī)院HCC患者腫瘤手術(shù)切除標(biāo)本40例，患者年齡30～72歲，平均年齡52歲，術(shù)前均未行任何治療，病理學(xué)診斷均為肝細胞肝癌。

兔抗人CXCLl2、CXCR4、MMP2和MMP9多克隆抗體、羊抗兔二抗均購自武漢三鷹公司， SP試劑盒、DAB顯色劑均購自武漢博士德公司。

1.2方法

標(biāo)本石蠟包埋，0.4μm連續(xù)切片。切片常規(guī)脫蠟，抗原微波修復(fù)，羊血清封閉，CXCLl2(1∶200)、CXCR4(1∶200)、MMP2(1∶100)和MMP9(1∶100)孵育；生物素化標(biāo)記二抗IgG孵育；鏈親和素過氧化物酶標(biāo)記三抗孵育；DAB顯色；蘇木精復(fù)染。PBs代替一抗作為陰性對照。

由2名病理科醫(yī)生以隨機、雙盲原則評定染色結(jié)果。以胞膜和胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃至棕褐色顆粒為陽性，光鏡下隨機選取5個視野(× 400)，以平均50%以上細胞定位明確、染色明顯的組織切片視為高表達組，低于50%為低表達組。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析

統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)用SPSSI3.0統(tǒng)計軟件包進行非參數(shù)秩和檢驗，χ2檢驗和Spearman rho相關(guān)性分析。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1病理組織學(xué)觀察結(jié)果

所有患者血清HBVAg均為陽性。患者臨床病理特點見表1，癌旁組織標(biāo)本作為對照。

表1 CXCR4/CCR7和MMP9的表達及臨床意義

2.2CXCR4/CCR7和MMP9在HCC中的表達情況

CXCR4、CCR7和MMP9均表達于癌細胞的細胞膜和細胞質(zhì)，呈淡黃色至棕黃色，胞核為藍色。在癌周基質(zhì)內(nèi)有時也可見弱染色。在40例HCC標(biāo)本中，有20例CXCR4染色陽性(50.0%)；臨床高病理分級HCC中CXCR4表達明顯增加(Plt;0.01)、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和門靜脈癌栓發(fā)生的病例中，CXCR4表達明顯增多(Plt;0.01)。CCR7染色陽性19例(47.5%)，MMP9染色陽性23例(57.5%)，CCR7和MMP9的表達與HCC臨床病理聯(lián)系與CXCR4有相同的趨勢，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.01)。癌旁組織標(biāo)本均未見CXCR4、CCR7和MMP9的明顯表達(見圖1～圖3、表1)。

圖1 CXCR4的表達情況(×200)

圖2 CCR7表達情況(×200)

圖3 MMP9表達情況(×200)

2.3CXCR4/CCR7與MMP9在HCC中相關(guān)性分析

CXCR4蛋白表達和MMP9蛋白表達明顯正相關(guān)(r=0.556，P=0.000)，見表2。CCR7蛋白表達和MMP9蛋白表達明顯正相關(guān)(r=0.413，P=0.008)，同CXCR4蛋白表達呈正相關(guān)(r=0.951，P=0.000)。

表2 CXCLl2/CXCR4和MMP2/MMP9 相關(guān)性分析

3 討 論

CXCR4是CXC家族趨化因子的重要受體，CCR7是其配體，兩者具有高度的特異性和親和力。有研究證實，CXCR4-CCR7構(gòu)成的生物軸通過調(diào)節(jié)惡性腫瘤如乳腺癌、肝癌、胃癌等的血管生成，直接活化腫瘤細胞，引導(dǎo)腫瘤細胞遷移到特定部位，從而在這些腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，HCC組織中CXCLl2和CXCR4蛋白表達明顯高于肝硬化、正常肝組織，提示CXCR4蛋白在HCC惡性轉(zhuǎn)化中起重要作用，參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移。本實驗中， CXCR4和CCR7表達和HCC的病理分級和門靜脈癌栓以及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移呈明顯正相關(guān)，提示趨化因子受體CXCR4及其配體CCR7共同參與肝癌細胞的發(fā)展和遷移，同時，CXCR4和CCR7在HCC中顯著正相關(guān)。可見，CXCR4和CCR7可同時作為評估HCC病理發(fā)展程度和轉(zhuǎn)移預(yù)后的一種腫瘤標(biāo)志物。

基質(zhì)金屬蛋白酶可降解很多種細胞外基質(zhì)(ECM)，是一個蛋白水解酶大家族[3]。基質(zhì)金屬蛋白酶9在腫瘤中，能降解變性膠原、彈性蛋白、肌蛋白等細胞外基質(zhì)成分，改變腫瘤細胞的運動能力，調(diào)節(jié)趨化、遷移速率[4]。既往研究發(fā)現(xiàn)，MMP9與HCC的病理類型和轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)，MMP9可以作為反映HCC惡性程度的重要指標(biāo)[5]，這一結(jié)果在本研究中也得到證實。本研究進一步證實，在HCC中， MMP9和門靜脈癌栓明顯相關(guān)。本研究結(jié)果還發(fā)顯示，在CXCR4/CCR7高表達的HCC中，MMP9高表達，且呈顯著正相關(guān)。

CXCR4/CCR7和MMP9蛋白表達在HCC組織中均與病理類型、門靜脈癌栓以及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)，這提示CXCR4/CCR7蛋白可能通過某些通路對MMP9的表達進行調(diào)控而導(dǎo)致HCC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。然而，具體CXCLl2/CXCR4和MMP9/MMP2之間在HCC中的確切聯(lián)系及始動因素、調(diào)控因素以及與其他細胞因子與信號通路的相關(guān)作用等還需要更多的體外實驗和裸鼠模型來證實。但是，通過在HCC標(biāo)本的CXCR4/CCR7和MMP9的表達和相關(guān)性分析，仍然為HCC的惡性程度評估提供了有效的標(biāo)志物組合，也為我們進一步探討HCC的早期診斷、發(fā)展和預(yù)后提供了一定的線索。

[1]Schrader J,Gordon-Walker T T,et al.Matrix stiffness modulates proliferation,chemotherapeutic response,and dormancy in hepatocellular carcinoma cells[J].Hepatology，2011，53(4)：1192-1205.

[2]Roderfeld M,Rath T,Lammert F,et al.Innovative immunohistochemistry identifies MMP-9 expressing macrophages at the invasive front of murine HCC[J].World J Hepatol，2010，2(5)：175-179.

[3]Park S Y,Jeong K J,Panupinthu N,et al.Lysophosphatidic acid augments human hepatocellular carcinoma cell invasion through LPA1 receptor and MMP-9 expression[J].Oncogene，2011， 30(11)：1351-1359.

[4]Kim S W,Kim H Y,Song I C,et al.Cytoplasmic trapping of CXCR4 in hepatocellular carcinoma cell lines[J].Cancer Res Treat，2008，40(2)：53-61.

[5]Huang F,Geng X P.Chemokines and hepatocellular carcinoma[J].World J Gastroenterol，2010，16(15)：1832-1836.

[編輯]一 凡

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2012.03.002

R735.7；R361.3

A

1673-1409(2012)03-R003-03

2012-02-10

黃為(1969-)，男，湖北潛江人，主治醫(yī)師，主要從事肝膽外科臨床工作;通訊作者：胡曉立，E-mail: winterhxl@sina.com。