凝膠滲透色譜法測定雙氯芬酸鈉滴眼液中玻璃酸鈉的含量

劉 悅

（南京中醫藥大學研究生院，江蘇 南京 210046）

雙氯芬酸鈉滴眼液為《中華人民共和國國家藥品標準新藥轉正標準》第30冊收載的品種，主要成分為雙氯芬酸鈉。臨床上主要用于治療葡萄膜炎、角膜炎、鞏膜炎等感染，其療效確切、副作用小。滴眼液中含活性成分玻璃酸鈉（Sodium hyaluronate，SH）又稱透明質酸鈉，是透明質酸（Hyaluronic acid，HA）的鈉鹽形式，是葡糖醛酸－N－乙酰氨基葡糖為雙糖單位組成的直鏈高分子酸性黏多糖，廣泛分布于動物和人體結締組織細胞外基質中，具有非常好的生物相容性，用于治療關節炎、干眼癥、皮膚潰瘍等。玻璃酸鈉在眼科的應用最早始于治療干眼癥，因其具有粘彈性流變學特性被提議用作人工淚液成分之一，可延長淚膜破裂時間，促進淺表角膜潰瘍的愈合，并且具有良好的舒適性和保水性［1］。但含玻璃酸鈉的雙氯芬酸鈉滴眼液標準中未對玻璃酸鈉進行質量控制［2］，筆者采用凝膠滲透色譜法測定雙氯芬酸鈉滴眼液中玻璃酸鈉的含量，方法簡便，結果準確，專屬性強，可有效控制產品的質量，報道如下。

1 儀器與試藥

色譜儀：美國Agilent公司Agilent1120高效液相色譜儀；檢測器：示差折光檢測器（RI）；對照品：玻璃酸鈉原料（山東正大福瑞達制藥有限公司，純度：99.0%）；雙氯芬酸鈉滴眼液（含玻璃酸鈉）：自制樣品（批號： 111001， 111002， 111003）；水為Milli－Q超純水；其它試劑均為分析純。

2 色譜條件

色譜柱：Shodex SB 805HQ（300mm×8mm）（多糖用凝膠色譜柱）；流動相：0.2mol／L 硝酸鈉水溶液（含0.02%疊氮鈉）；流速：0.3mL／min；柱溫40℃。

3 方法與結果

3.1 專屬性試驗

供試品溶液的配制：以樣品溶液作為供試品溶液，采用0.45μm為空濾膜過濾后進行測定；對照品溶液的配制：精密玻璃酸鈉原料適量，加水溶解并制成每lmL中約含0.1 mg的玻璃酸鈉溶液，搖勻，即得；空白溶液的配制：按處方量制備成不含玻璃酸鈉的陰性樣品適量，作為空白溶液。精密吸取上述溶液20μL，注入液相色譜儀，使主成分峰與其它雜質峰分離度符合要求。

結果：對照樣品與供試品溶液出現了相同的色譜峰，主峰與其它色譜峰分離度良好，空白樣品在相同的保留時間沒有出現色譜峰，說明雙氯芬酸鈉原料及其它輔料不干擾測定，本方法專屬性較好，如圖1所示。

圖1 專屬性試驗

3.2 線性試驗

取玻璃酸鈉原料10mg，精密穩定，置100mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；分另精密吸取3、4、5、6、7mL置10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濃度分別為30、40、50、60、70μg／mL。分別取上述溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度C為橫坐標，以峰面積Y為縱坐標，得回歸方程：Y＝2000.4C－19615，r＝0.996。表明玻璃酸鈉在30～70μg／mL濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

3.3 回收率試驗

按處方量的80%、100%、120%稱取玻璃酸鈉原料各3份，按處方量加入其它原輔料制成供試品進樣測定，以外標法，按照當日標準曲線計算玻璃酸鈉的回收率。回收率為98.5%、98.6%和98.3%，平均回收率為：98.5%，RSD%為0.59%，說明本法的準確度良好，見表1。

3.4 溶液的穩定性試驗

取上述供試品溶液，分別于第0、2、4、6、8h精密量取供試品溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積的平均值為78 921，RSD為1.07%，說明本品的水溶液在8h內穩定性良好。

3.5 精密度試驗

精密吸取樣品溶液20μL，連續進樣6次，峰面積分別為77596、78123、76899、77254、77028、77444，RSD%為0.57%，說明此方法的精密度良好。

3.6 樣品含量測定

按上述方法對自制的3批樣品進行測定，測得玻璃酸鈉含量相當于標示量的99.2%，RSD%為0.78%。結果見表2。

表1 回收率試驗結果 （n＝3）

表2 三批樣品含量測定結果

4 討論

雙氯芬酸鈉滴眼液（含玻璃酸鈉）為眼科臨床常用藥，其主要成分雙氯芬酸鈉具有較好的抗感染效果，活性成分玻璃酸鈉作為其輔料，因其具有非牛頓流體的特性和極好的生物相容性、耐受性，粘度隨切變力的增大而明顯減小，使藥液的粘度很高，眼臉仍可眨動自如，沒有粘糊的感覺。因為這些優點，使其成為滴眼液的良好載體，多用于干眼癥、眼角膜損傷等眼科疾病治療。目前文獻報道玻璃酸鈉的含量測定多采用咔唑比色法［3］，筆者在研究該方法時發現重復測定誤差較大，且樣品處理較為復雜。為選用更為簡便準確的測定方法，考慮玻璃酸鈉為大分子酸性粘多糖，沒有紫外吸收，本研究選擇凝膠滲透色譜法，采用示差折光檢測器對雙氯芬酸鈉滴眼液（含玻璃酸鈉）進行測定。結果顯示，本研究所建立的方法準確度良好，適用于本品中玻璃酸鈉的含量測定。

［1］ 高啟合，鄒志紅.滴眼液中玻璃酸鈉含量測定方法研究［J］.亞太傳統醫藥，2007，21（09）：38－39.

［2］ 國家藥典委員會.雙氯芬酸鈉滴眼液國家藥品標準（WS1－X－059－2002Z）［M］.北京：人民衛生出版社，2002.

［3］ 郭桂芬.玻璃酸鈉在滴眼液和干眼治療中的應用［J］.亞太傳統醫藥，2009，5（10）：125.