原子吸收分光光度法快速檢測化妝品中金屬硫蛋白含量

燕艷 李牧 季志會 杜偉 董金 張春蘭 陳健

1.北京市通州區科學技術委員會，北京 101101；2.北京市通州區植物保護站，北京 101117

原子吸收分光光度法快速檢測化妝品中金屬硫蛋白含量

燕艷1李牧1季志會1杜偉1董金1張春蘭1陳健2

1.北京市通州區科學技術委員會，北京 101101；2.北京市通州區植物保護站，北京 101117

目的快速檢測化妝品中金屬硫蛋白（MT）含量。方法利用原子吸收分光光度法，在檢測波長213.9 nm條件下對化妝品樣品A、B、C、D進行分析，外標法對化妝品中的MT進行定量測定，探討該方法的條件。結果建立了利用原子吸收分光光度計快速檢測食品中MT的分析方法，該方法線性良好，重復性高，加樣回收率為92.4%～96.4%。

結論該方法檢測化妝品中MT含量具有重大意義，具有一定的先進性和實際意義，可為測定化妝品中的MT提供可靠的手段，能更好地滿足實際樣品分析。

金屬硫蛋白；原子吸收分光光度法；化妝品

金屬硫蛋白（metallothionein，MT）是一類廣泛存在于生物界、低分子量、富含半胱氨酸、可被金屬和其他因素誘導合成的細胞內金屬結合非酶蛋白質。MT在生物體內有很重要的生理作用：清除體內自由基、防止機體衰老；解除重金屬的毒性；參與體內微量元素的代謝；增強機體對各種不良狀態的適應能力；鋅元素的貯存庫；防止細胞癌變等[1-2]。

利用MT的這些活性，研究其作為食品、化妝品添加劑的應用已成為當今的前沿課題之一。目前測定MT的方法較多，主要有高效液相色譜法和極譜法等，但這些方法的重復性較差，在實際樣品中沒有得到廣泛的應用[3-5]。采用原子吸收分光光度法成功地分析蛋白質已有了大量報道，但由于食品、化妝品成分比較復雜，能成功地測定食品中MT的方法還未見報道。為此，利用原子吸收分光光度計檢測食品、化妝品中MT含量具有重大意義，本實驗研究了從化妝品中檢測MT的方法，探討了該方法的條件，建立了利用原子吸收分光光度法快速檢測食品中金屬硫蛋白的分析方法，取得了比較滿意的結果。

1 儀器與試藥

原子吸收分光光度計（北京普析通用TAS990AFG）；離心機（日立公司）；勻漿器（上海標本）；0.02 mol/L Tris-HCl（pH 8.6）；Zn標準液0.1、0.3、0.6、1.0μg/mL；MT純度為90%，購于北京盛京華公司；化妝品：A（鳳凰甘油一號，上海百雀羚日用化學有限公司，產許許可證：XK16-1080418，批號：3B30UJI），B（大寶SOD蜜，北京大寶化妝品有限公司，批號：1310270A），C（海派SOD蜜，上海雅美日用化學品廠，生產許可證：XK16-1086809,批號：9D161201），D（雅霜，上海家化聯合股份有限公司，生產許可證：XK16-108 0443，批號：IDDJJ）；硝酸（色譜純）。

2 方法與結果

2.1 實驗方法

分別取10 g化妝品樣品A、B、C、D分別加入5 mg/mL MT 10μL定量加入10 mL硝酸，120℃電熱板上加熱至白煙。原子吸收設備檢測波長：213.9 nm，光譜帶寬：0.4 nm，濾波系數：0.3，推薦燈電流：3 mA，負高壓：346.25 V，燃燒頭高度：6 mm，積分時間：3 s，空氣壓力：0.24 mPa，乙炔壓力及流量：0.05mPa及1 300mL/min。

2.2 工作曲線的繪制

分別配制質量濃度為0.1、0.3、0.6、1.0μg/mL的Zn標準液制定標準曲線，根據標準曲線法求出溶液的Zn含量，按照以下公式計算金屬硫蛋白含量：

2.3 實驗結果

2.3.1 工作曲線和線性范圍對0.1、0.3、0.6、1.0μg/mL標準濃度連續測定3次，結果見圖1。平均峰高與含量的線性方程為y=0.503 7x，相關系數r為0.997 8，提示線性良好。

2.3.2 方法的準確度和重現性取分別取10 g化妝品樣品A、B、C、D分別加入5mg/mLMT標準液。按實驗方法對樣品進行處理，定容至10mL連續做3個平行，計算加樣回收率。結果見表1。運用公式可看出用本法測定化妝品中的MT，加樣回收率為92.4%～96.4%。

表1 MT加樣回收率的測定結果

3 討論

MT的檢測方法都是建立在MT的理化特性和生物特性以及免疫學特性基礎上，主要分以下幾大類：金屬親和分析法，它的缺陷在于，采用的金屬除與MT結合外，還與其他一些小分子量化合物結合，由于利用金屬含量間接推算MT含量，因此特異性較差；電化學法是一種可以直接用于測定MT總量的方法，具有一定的特異性；色譜分析法主要有HPLC、RP-HPLC、HPLC-ICP-MS、HPLC-AAS等；蛋白質分析法/免疫法，尤其適合于微量檢測[6-8]，原子吸收分光光度法測定MT雖已有一些報道，但大多數停留在分離條件的探討和研究方面，未見應用于實際樣品的定量分析，本文利用原子吸收分光光度計快速檢測化妝品中的MT含量應用于實際樣品的定量分析，該方法重現性較好，操作簡單，適于實際樣品的分析。因此本文建立的檢測方法，具有一定的先進性和實際意義，為化妝品中的MT檢測方法的確立奠定了基礎。

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Content determ ination of metallothionein in cosmetics by atom ic absorption spectrophotometer rapid ly

YAN Yan1 LIMu1 JIZhihui1 DUWei1 DONG Jin1 ZHANG Chunlan1 CHEN Jian2
1.Science and Technology Committee in Tongzhou District of Beijing,Beijing 101101,China;2.Plant Protection Station in Tongzhou Districtof Beijing,Beijing 101117,China

ObjectiveTo rapidly detectmetallothionein(MT)content in cosmetics.MethodsWith themethod of atomic absorption spectrophotometer,cosmetic sample of A,B,C and D were analyzed under the conditions of 213.9 nm as detection wavelength.And quantitative determination of MT in cosmeticsweremeasured by external standard method to discuss the condition of thismethod.ResultsAn analysismethod in food fast detection of MT by atomic absorption spectrophotometer was established.Thismethod had good linearity,high repeatability.And its adding standard recovery was 92.4%-96.4%.ConclusionThismethod has certain advancement and practical significance for detection of MT content in cosmetics,and it has provided a reliablemeans for detection of MT content in cosmetics to satisfy the actual sample analysis.

Metallothionein;Atomic absorption spectrophotometer;Cosmetic

R927

A

1673-7210（2012）10（a）-0118-02

北京市科技計劃課題（課題編號：Z0006317043591）。

燕艷（1982.1-），女，河北昌黎人，東北農業大學生物化學與分子生物學專業碩士研究生，工程師；研究方向：生物化學與分子生物學。

季志會（1961.9-），女，北京市委黨校行政管理碩士研究生，研究員；研究方向：農產品深加工。

2012-05-04 本文編輯：衛軻）