RP-HPLC法測定益肺通絡顆粒中巖白菜素的含量

劉紅宇 楊勵 曾建國

1.湖南中醫藥大學第一附屬醫院藥劑科，湖南長沙 410007；2.湖南省長沙市中心醫院，湖南長沙 410004

RP-HPLC法測定益肺通絡顆粒中巖白菜素的含量

劉紅宇1楊勵2曾建國2

1.湖南中醫藥大學第一附屬醫院藥劑科，湖南長沙 410007；2.湖南省長沙市中心醫院，湖南長沙 410004

目的建立益肺通絡顆粒有效成分巖白菜素的含量測定方法。方法采用RP-HPLC法，Agillent高效液相色譜儀，Kromasil ODS（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱；甲醇-水（20∶80）為流動相；流速為1mL/min；柱溫為30℃；檢測波長為275 nm；靈敏度為0.05 AUFS。進樣量10μL。結果在該方法中，巖白菜素進樣量在0.054～0.540μg范圍內有良好的線性關系，r=0.999 06，平均回收率為98.53%，RSD為1.32%。結論本方法準確簡便，準確，重復性好，可用于益肺通絡顆粒中有效成分巖白菜素的含量測定。

益肺通絡顆粒；巖白菜素；含量測定；高效液相色譜法

益肺通絡顆粒由黃精、百部、天冬、鱉甲、白及、矮地茶、絲瓜絡、紫花地丁、太子參、款冬花、大薊11味中藥組成，具有益氣養陰、化瘀通絡、去腐生新的功效，主治氣陰兩虛夾瘀型肺結核。處方中除鱉甲單煎外，其余十味藥全部煎煮提取，合并二煎液濃縮制成顆粒。方中矮地茶化痰止咳，清利濕熱，活血化痰。全株主含揮發油0.1%～0.2%，在去油后的殘渣中分離得鎮咳有效成分矮茶素1號（即巖白菜素，bergenin）和矮茶素2號，尚含2-羥基-5-甲氧基-3-十五烯基苯醌等化合物及三萜類化合物。其活性成分矮茶素1號對電刺激貓喉上神經所引起的咳嗽及氨水噴霧引起的小鼠咳嗽都有明顯的止咳作用[1]；矮地茶有降低大鼠氣管-肺組織耗氧量的作用，矮茶素1號作用于含硫氫基必需基團的酶體系，因而降低了組織呼吸；每日吸入二氧化硫產生慢性氣管炎的大鼠，內服矮茶素1號有一定的預防及治療作用，表現為杯狀細胞減少、炎細胞浸潤、肺氣腫及肺萎縮程度減輕[2-3]。為控制益肺通絡顆粒中矮地茶的質量，本文在綜合相關色譜分析方法的基礎上[4-7]，建立了益肺通絡顆粒中巖白菜素的RP-HPLC含量測定方法，為益肺通絡顆粒中矮地茶的質量控制提供了方法和依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agillent高效液相色譜儀，色譜柱KromasilODS（250mm× 4.6 mm，5μm）；超聲波清洗器（KQ-600型）；萬分之一電子分析天平。

1.2 試劑及樣品

試劑：甲醇為色譜純（天津市科密歐化學試劑有限公司，20110406），水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。巖白菜素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：1532-200202）。益肺通絡顆粒（自制，批號：110605、110615、110625）

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適應性

Kromasil ODS（250 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱；甲醇-水（20∶80）為流動相；流速為1 mL/min；柱溫為30℃；檢測波長為275 nm；靈敏度為0.05 AUFS，理論塔板數大于3 000，拖尾因子（T）為0.940。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的巖白菜素5.4mg，用甲醇溶解制成0.054mg/mL的對照品溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備取本品顆粒約0.5 g，精密稱定，置入50mL量瓶中，加入甲醇40mL，超聲處理40min，放冷后加入甲醇至刻度，濾過，取續濾液10μL進樣，測定。

2.2.3 陰性溶液的制備按本品制劑工藝制備不含矮地茶的制劑，同供試品溶液制備方法制備，進樣量同上，測定。各溶液色譜見圖1。

2.3 線性關系考察

精密量取巖白菜素對照品溶液（0.054 mg/mL）1、2、4、6、8、10μL進樣。測定其峰面積，以峰面積值（A）對進樣量（C）進行回歸，得標準曲線方程A=63.705 84C-1.775 24（r= 0.999 06）。以上結果表明，在0.054～0.540μg范圍內，巖白菜素峰面積值與進樣量有良好的線性關系。

2.4 精密度試驗

精密吸取上述對照品溶液8μL，重復進樣6次，測定巖白菜素峰面積，結果分別為497.22、510.34、509.00、504.60、508.24、507.02，RSD為0.94%。

2.5 穩定性試驗

取供試品溶液（批號：110615）在0、1、2、4、8、24 h，分別進樣8μL，測定樣品中巖白菜素峰面積，結果分別為175.47、176.54、175.64、177.67、178.40、174.48，RSD為0.83%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.6 重現性試驗

按擬定的含量測定方法，對同一批樣品（批號：110615）分別制備供試品溶液，測得峰面積值并計算含量，RSD為1.47%，表明方法重現性良好。

2.7 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品（批號：110615）約0.1 g，分別加入對照品溶液（0.054 mg/mL）3 mL，按上述樣品制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀，計算回收率。見表1。試驗結果表明，此方法可靠性良好。

表1 回收率試驗結果

2.8 樣品測定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法操作，按擬定的色譜條件測定其峰面積，每批樣品測定6份，結果取平均值，3批樣品中巖白菜素的含量分別為1.76、1.67、1.84 mg/g，見表2。

表2 樣品中巖白菜素含量測定結果

3 討論

矮地茶為本方主藥之一，且用量較大，其功用化痰止咳，清利濕熱，活血化痰，符合本方益肺通絡的中醫基本理論，巖白菜素為矮地茶的有效成分之一，故選擇巖白菜素作為控制本品質量的指標成分。

在巖白菜素的高效液相色譜法試驗中，在對巖白菜素進行全波長掃描中，發現該化合物有2個吸收峰，分別位于220 nm和275 nm，考慮流動相中甲醇在220 nm波長處對基線有影響，故試驗中檢測波長選擇為275 nm[8]，參照《中國藥典》2010年版[9]及相關文獻[10-12]，流動相考察了甲醇-水（15∶85），甲醇-水（20∶80），甲醇-水（25∶75）等，系統流速設置為1.0 mL/min，試驗結果顯示用甲醇-水（15∶85）洗脫，出峰時間超過20min，而用甲醇-水（25∶75）來洗脫則出現與其他峰相隔較近及基線不平現象，最后選用甲醇-水（20∶80）為流動相，色譜圖中巖白菜素的保留時間為12min左右，峰形較好，且無其他雜質峰干擾；供試品制備考察中，則對不同的超聲時間（30、40、50min）作了比較，結果表明40min和50min測得的含量相差不大，30 min得出的含量較低，故采用超聲40min為宜。試驗結果表明該方法具有分離效果好、靈敏度高、準確度高等優點，可作為益肺通絡顆粒的質控方法。

[1]呂修梅，王軍憲.巖白菜屬植物的研究進展[J].中藥材，2003，26（1）：58.

[2]劉偉林，楊東愛，余勝民，等.矮地茶藥理作用研究[J].時珍國醫國藥，2009，20（12）：3002-3003.

[3]陳少鋒，楊東愛，余勝民，等.矮地茶水提物及醇提物急性毒理學研究[J].中國民族民間醫藥雜志，2008，17（11）：3-4.

[4]付成效，劉高峰，鄒渭洪，等.反相高效液相色譜法測定生地茶止咳合劑中巖白菜素的含量[J].中南藥學，2012，10（2）：96-98.

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[6]金楊，王燕.正交試驗優選復方巖白菜素滴丸制備工藝[J].中國藥房，2011，22（7）：614-615.

[7]龍海燕，李慧，黃曉燕，等.HPLC測定復方矮地茶片中巖白菜素的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2010，16（9）：41-43.

[8]周興旺，陳忠，葉劍良，等.天然產物巖白菜內酯化學結構的二維NMR研究[J].廈門大學學報：自然科學版，1999，38（6）：947-9501.

[9]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：338.

[10]周文梟，崔德斌.高效液相色譜法測定抗癆膠囊中巖白菜素的含量[J].醫藥導報，2004，23（10）：777-778.

[11]鄧茂芳，田永華.HPLC法測定矽肺寧片中巖白菜素的含量[J].中國藥品標準，2005，6（2）：22-23.

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RP-HPLC determ ination of bergenin in Yifei Tongluo Granules

LIU Hongyu1 YANG Li2 ZENG Jian'guo2
1.Department of Pharmacy,the First Affiliated Hospital to Hu′nan University of Chinese Medicine,Hu′nan Province, Changsha 410007,China;2.The Central Hospital in Changsha City,Hu′nan Province,Changsha 410004,China

ObjectiveTo establish amethod for determination of bergenin in compound Yifei Tongluo Granules.MethodsThe RP-HPLC method was adopted.The Kromasil ODS column(4.6 mm×250 mm,5μm)was used at the column temperature of 30℃.The mobile phase consisted ofmethanol-water(20∶80)with the flow rate of 1.0 mL/min and the detection wavelength was 275 nm.ResultsThere was a good linear relationship between the peak area and the sample size of bergenin within the range of 0.054-0.540μg,r=0.999 06,and the average recovery rate was 98.53%with the RSD of 1.32%(n=6).ConclusionThemethod is simple,accurate and repeatable,which can be used for the quality control of Yifei Tongluo Granules.

Yifei Tongluo Granules;Bergenin;Content determination;HPLC

R927

A

1673-7210（2012）10（c）-0108-03

2011年度湖南省中醫藥科研計劃項目（項目名稱：“益肺通絡顆粒”的研制；項目編號：201113）。

劉紅宇（1973.1-），女，湖南長沙人，博士研究生，副主任藥師，主要從事中藥質量標準研究。

曾建國，男，湖南長沙人，本科，主任藥師，主要從事新藥研發工作。

2012-07-25 本文編輯：衛軻）