豬支原體肺炎活疫苗(168株)的免疫效力研究

蘇國東，劉茂軍，周勇岐，2，劉冬霞，甘 源，朱曉瑋，2，毛火云，2，邵國青

(1.江蘇省農業科學院獸醫研究所·農業部獸用生物制品工程技術重點實驗室·國家獸用生物制品工程技術研究中心，南京 210014;2.南京天邦生物科技有限公司，南京 211102)

豬支原體肺炎(Mycoplasma Pneuoniae of swine，MPS)又稱地方性肺炎，該病是由豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneuoniae)引起的一種豬慢性呼吸道傳染病［1］。凡是有養豬的國家和地區都有此病存在。感染后病豬發生干咳、低燒、生長緩慢，飼料報酬低，發病率高，死亡率低，嚴重制約我國養豬業向前發展［2-3］。

防控豬支原體肺炎已成為豬場難纏的問題，疫苗防控是控制該病的重要手段［4］。為給豬場提供更加有效的豬支原體肺炎活疫苗，江蘇省農科院獸醫研究所經歷五十多年研制成功豬支原體肺炎活疫苗(168株)。本研究評價了該疫苗的免疫效力和免疫期，以及與同類制品的差異。

1 材料

1.1 疫苗、稀釋液和培養基 3批次豬支原體肺炎活疫苗(168株)(X+15)代和豬肺炎支原體JS株組織強毒由江蘇省農業科學院獸醫研究所保存。5批次豬支原體肺炎活疫苗(168株)(X+15)代由南京天邦生物科技有限公司生產。豬支原體肺炎活疫苗由北京海淀中海動物保健科技公司生產。疫苗專用稀釋液由南京邦生物科技有限公司制備。KM2培養基由江蘇省農業科學院獸醫研究所制備。

1.2 試驗豬 試驗使用5～15日齡健康小豬220頭，來源于江蘇省農科院豬場，仔豬和哺乳母豬均為豬肺炎支原體IHA抗體陰性，飼養于江蘇農業科學試驗動物房，各組隔離飼養，飼喂無抗生素飼料，飲用自來水。120頭商品豬來源于廣東某豬場，一直飼養于該豬場。

2 方法

2.1 免疫效力試驗 25頭5～15日齡健康仔豬分成5組，每組5頭。用3批豬支原體肺炎活疫苗(168株)按10倍稀釋成每頭份1 mL，分別肺內注射各1組，另設攻毒對照組和健康對照組各5頭不免疫。在免疫后60 d，用豬肺炎支原體JS株組織強毒1∶100稀釋后，氣管內注射5 mL，對所有免疫組和攻毒對照組試驗豬進行攻毒。攻毒后25 d，觀察臨床癥狀，撲殺5組試驗豬，按照28分評分法計算肺病變指數，以肺病變減少率達到60%以上判為保護［5］。

2.2 免疫期試驗 100頭5～15日齡健康易感豬分成5組，每組20頭，每頭在5～15日齡仔豬通過肺內接種豬支原體肺炎活疫苗(168株)1頭份。免疫后5個月、6個月、7個月、8個月，1～4組各取5頭豬逐次進行攻毒保護試驗，第5組各取5頭不攻毒作為對照。在攻毒后25 d內，觀察所有豬的臨床癥狀;在攻毒后25 d后，對所有豬進行剖檢，計算肺病變指數，判定保護率。

2.3 免疫效力比較試驗 35頭5～15 d齡健康易感仔豬分成4組，第1組、第2組各10頭分別按疫苗使用說明肺內免疫豬支原體肺炎活疫苗(168株)和北京中海動物保健科技公司生產的豬支原體肺炎活疫苗;第3組5頭不免疫，作攻毒對照組;第4組5頭不免疫，作健康對照組。在疫苗免疫后60 d，第1組、第2組和第3組用豬肺炎支原體JS株組織強毒1∶100稀釋氣管內注射5 mL進行攻毒，第4組5頭豬不攻毒作健康對照組。攻毒后25 d，觀察臨床癥狀，撲殺5組試驗豬，計算肺病變指數，判定保護率。

2.4 免疫期比較試驗 80頭健康易感豬分成4組，1、2組各20頭分別按使用說明免疫中海動物保健科技公司生產的豬支原體肺炎活疫苗和南京天邦生物科技有限公司生產的豬支原體肺炎活疫苗(168株)，3組20頭不免疫作攻毒對照，4組20頭不免疫不攻毒作健康對照。免疫后5個月、6個月、7個月、8個月，1～3組各取5頭用豬肺炎支原體JS株組織強毒1∶100倍稀釋逐次氣管內注射5 mL進行攻毒保護試驗，4組5頭不攻毒作為對照;在攻毒后25 d內，觀察所有豬的臨床癥狀，在攻毒后25 d后，對所有豬進行剖檢，計算肺病變指數，判定保護率。

2.5 臨床免疫試驗 用5批次南京天邦生物科技有限公司生產的豬支原體肺炎活疫苗(168株)在廣東某豬場進行免疫，每批次免疫20頭，1頭份/頭，對照20頭不免疫。疫苗免疫后2個月、3個月、4個月、5個月進行臨床觀察，觀察是否有食欲不振、弓背、長期咳嗽、低燒、生長緩慢和皮毛粗亂等臨床癥狀。免疫5個月后對所有試驗豬進行剖檢，計算肺病變指數，判定保護率。

3 結果與分析

3.1 免疫效力試驗結果 豬支原體肺炎活疫苗(168株)免疫5～15日齡仔豬60 d后攻毒，在攻毒25 d后解剖觀察肺部病變情況見圖1。結果顯示，3個免疫組平均肺病變指數均與攻毒對照組差異顯著，與健康對照組無差異，攻毒保護率均在80%以上。

3.2 免疫期試驗結果 3批次免疫組免疫5個月和6個月后攻毒，25 d內80%以上免疫豬不表現豬支原體肺炎臨床癥狀;免疫7個月后攻毒25d內仍有60%以上免疫豬不表現臨床癥狀。攻毒25 d后逐次解剖5頭，各組豬的平均肺病變指數見圖2。結果顯示，3批次豬支原體活疫苗(168株)免疫5～7個月攻毒，3個免疫組平均肺病變指數均與攻毒對照組差異顯著，與健康對照組無差異，攻毒保護率均在60%以上;免疫后8個月攻毒，3個免疫組平均肺病變指數均與攻毒對照組和健康對照組均差異顯著，攻毒保護率均在40%以上，表明豬支原體活疫苗(168株)的免疫期至少在6個月以上。

圖1 3批疫苗免疫攻毒肺病變結果

圖2 3批疫苗不同免疫期攻毒肺病變結果

3.3 同類制品免疫效力比較試驗結果 在兩種豬支原體肺炎活疫苗免疫5～15日齡仔豬60 d后攻毒。攻毒25 d內，免疫試驗組和同類疫苗免疫試驗組都有80%免疫豬沒有表現臨床癥狀，攻毒25 d后解剖觀察肺部病變，結果見圖3。結果顯示，兩種豬支原體肺炎活疫苗免疫后60 d有80%免疫豬獲得保護，兩組免疫試驗組平均肺病變指數無差異，均與攻毒對照組差異顯著，與健康對照組無差異。

3.4 同類制品免疫期比較試驗結果 兩種豬支原體肺炎活疫苗免疫5～15日齡仔豬5個月、6個月和7個月后攻JS強毒株，攻毒25 d內80%以上免疫豬不表現豬支原體肺炎臨床癥狀;免疫8個月后攻毒25 d內仍有60%以上免疫豬不表現臨床癥狀。攻毒25 d后逐次解剖5頭，免疫豬免疫7個月后仍有60%以上免疫豬的肺部無病變。攻毒對照組攻毒后25 d內和25 d后解剖表現豬支原體肺炎的臨床癥狀和典型的肺部病變，健康對照組沒有表現肺部病變。說明南京天邦生產的豬支原體活疫苗(168株)和北京中海的支原體肺炎活疫免疫5～7個月后均有80%以上的豬獲得保護，兩種豬支原體活疫苗的免疫期至少在6個月以上，免疫保護期沒有明顯差異。兩種豬支原體肺炎活疫苗不同免疫期的攻毒保護率見圖4。

圖3 兩種活疫苗攻毒保護比較試驗結果

圖4 兩種豬肺炎支原體疫苗不同免疫期免疫攻毒肺病變結果

3.5 臨床免疫試驗結果 5批次疫苗免疫臨床試驗豬2個月、3個月、4個月、5個月后，80%以上的試驗豬表現正常，未見食欲不振、弓背、長期咳嗽、低燒、生長緩慢和皮毛粗亂等臨床癥狀，而對照組未免5個月后，臨床表現長期咳嗽、低燒、生長緩慢和皮毛粗亂的豬占到40%。豬支原體肺炎活疫苗(168株)免疫5個月后對所有試驗豬進行剖檢，結果顯示5批次免疫組的肺病變與對照組差異顯著，免疫組的肺病變減少率均在60%以上。豬支原體肺炎活疫苗(168株)臨床試驗肺病變結果見圖5。

4 討論與結論

豬氣喘病的防治是控制豬場呼吸道綜合癥難題的關鍵，在今后我國養豬場仍然要把控制豬氣喘病成為重點防控疾病之一。目前我國很多豬場常用全群脈沖用藥方式控制豬氣喘病，疾病控制容易反復發生，藥物依賴性很強，花費巨大，防治效果不滿意。疫苗免疫成為豬場防控豬支原體肺炎疾病最有效的方法，在我國疫苗免疫有豬支原體肺炎滅活疫苗和活疫苗，滅活疫苗存在價格貴、應激大、免疫次數多和不能阻止野毒感染等諸多因素制約了滅活疫苗的推廣［6］，活疫苗由于價格低、應激小、免疫次數少、阻止野毒感染和置換豬場野毒等諸多優勢，在規模化豬場迅速得到推廣［7-9］。

圖5 5批次豬支原體肺炎活疫苗(168株)臨床免疫5月后肺病變結果

在豬支原體肺炎活疫苗(168株)免疫效力試驗和免疫期試驗中，疫苗免疫5～15日齡健康仔豬后60 d攻強毒，疫苗免疫保護率達到80%以上;疫苗免疫后5個月、6個月、7個月和8個月逐次攻強毒，免疫7個月后免疫保護率仍在60%以上，豬支原體肺炎活疫苗(168株)免疫期超過6個月以上。與同類制品比較免疫效力和免疫期，兩種豬支原體肺炎活疫苗的免疫保護率和免疫期相當。5批次豬支原體肺炎活疫苗(168株)免疫臨床5～15日齡小豬5個月后，85%以上的豬都得到免疫保護。綜合以上結果分析，說明豬支原體肺炎活疫苗(168株)具有很好的免疫效力，完全可以應用于我國豬場氣喘病的控制和凈化。

［1］Elieen L T.Mycoplasmal Diseases［M］//趙德明，張仲秋，沈建忠譯.豬病學.第9版.北京:中國農業大學出版社，2008:795-802.

［2］Maes D，Segales J，Meyns T，et al.Control of Mycoplasma hyopneumoniae infections in pigs.［J］.Veterinary Microbiology，2008，126(4):297-309.

［3］沈青春，寧宜寶，覃青松.豬肺炎支原體的研究進展［J］.中國獸藥雜志，2003，37(6):26-30.

［4］邵國青.豬喘氣病的控制與凈化方法的建議［J］.養豬，2010(6):65-69.

［5］邵國青，劉茂軍，孫佩元，等.豬氣喘病實驗豬模型的建立［J］.微生物與感染，2007，2(4):215-218.

［6］Chae C.Vaccinating pigs against Mycoplasma hyopneumoniae infection:Failure to prevent transmission［J］.Vet J，2011，188(1):7-8.

［7］ 周勇岐，趙永前.豬支原體肺炎(168株)活疫苗的作用機理與應用［J］.中國牧業通訊，2008，(10):49-50.

［8］ 劉茂軍，苗連葉，趙永前，等.豬支原體肺炎活疫苗(168株)臨床試驗［J］.畜牧與獸醫，2009，41(8):93-95.

［9］陳 兵.江蘇研制出豬支原體肺炎打破國外壟斷［N］.農業日報，2011-11-16.