靜脈注射sCD14對嚴重燙傷內毒素血癥小鼠血清C-反應蛋白和降鈣素原以及血糖水平的影響

萬 玲，胡曉潞，張 萍，王 湞，王占科

(解放軍第九四醫院檢驗科，南京軍區檢驗醫學專科中心，江西 南昌 330002)

內毒素是通過其細胞膜上的受提發揮作用，有文獻報告，細胞膜內毒素受體為膜白細胞分化抗原14(mCD14)[1]。嚴重創傷患者血液LPS水平升高與感染等有關，靶組織細胞mCD14與血液中內毒素結合，啟動內毒素信號轉導，導致機體全身炎癥反應綜合征 (SIRS)和多器官功能不全綜合征(MODS)[2]。可溶性白細胞分化抗原14(sCD14)游離存在于血液和各種體液中，可通過競爭膜受體與LPS結合，對LPS病理效應起到抑制作用[3]，sCD14對嚴重創傷感染機體C-反應蛋白和降鈣素原以及血糖水平的影響，國內外報道不多。本文以嚴重燙傷內毒素血癥小鼠為創傷感染動物模型，觀察靜脈注射sCD14對嚴重創傷感染機體C-反應蛋白和降鈣素原以及血糖水平的影響，旨在證明sCD14可作為拮抗炎癥反應的有效藥物并改善糖代謝障礙提供實驗依據，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 燙傷模型制作與分組 昆明種小鼠 (南昌大學醫學院實驗動物中心提供,合格證號JXA2000176)18～20g，雌雄不拘，自由喂養，按30%體表面積背部剪毛，89oC熱水浸泡9s，制作III度燙傷模型(燙傷皮膚病理切片見圖1)，隨機分為sCD14治療組(n=20)、及sCD14治療對照組(n=20,除不注射藥物外，其他與藥物治療組同)；另設正常對照組(n=20,不進行燙傷，其余同燙傷模型組)。

圖1 嚴重燙傷小鼠Ⅲ度燙傷皮膚病理切片(HE染色，×400)

1.2 材料來源 基因工程產品sCD14從深圳晶美生物工程有限公司購買。血糖和C-反應蛋白測定試劑盒從寧波美康生物診斷有限公司購買；降鈣素原測定試劑盒從羅氏診斷公司購買。

1.3 治療方法 基因工程產品sCD14用生理鹽水稀釋，參考文獻[4]，每天按5mg/kg體重，分2次尾靜脈注射，連續3d。治療對照組和正常對照組只注射生理鹽水，其它同治療組。各組小鼠均在治療3d后，第4d斷頭處死，肝素抗凝，收集血液標本，4 000r/min離心，分離血漿。血糖測定小鼠，需要空腹8h以上。

1.4 測定方法 血清C-反應蛋白采用免疫比濁法，血糖采用葡萄糖氧化酶法，通過AU2700全自動生化分析儀測定；降鈣素原采用磁珠電化學發光法，通過全自動羅氏電化學發光測定儀測定。

2 結果

2.1 血清C-反應蛋白和降鈣素原以及血糖水平變化見表1。

表1 各組小鼠血清C-反應蛋白和降鈣素原以及血糖水平變化

由表1結果可見，sCD14治療組小鼠血清C-反應蛋白和降鈣素原以及血糖水平均明顯低于治療對照組(P<0.01),但均明顯高于正常對照組(P<0.01)。

3 討論

sCD14為體內天然存在的單鏈多肽分子，其N端可與LPS結合，但由于sCD14沒有在細胞膜上，也缺少膜CD14的跨膜區和膜內區，因此，屬于無效結合。在生理情況下，正常人和動物血清中可檢測到sCD14水平[5]。在嚴重感染情況下，血清sCD14水平明顯升高[6]，sCD14在LPS高濃度條件下，是LPS負反饋效應的表現，可拮抗LPS病理作用，sCD14升高但仍相對LPS升高不足，導致sCD14和LPS比值下降，可能促進創傷MODS發生與發展[7]。

CRP(C反應蛋白)是一種能與肺炎球菌C多糖體反應形成復合物的急性時相反應蛋白。CRP可作為炎癥反應的非特異性標志物，并應用于臨床診斷，血清CRP可作為評價感染后炎癥反應嚴重程度的重要指標[8]。PCT是降鈣素前體，屬于一種無激素活性的糖蛋白，由116個氨基酸組成。在生理情況下，PCT通過甲狀腺的C細胞產生并裂解出降鈣素；嚴重感染時血PCT水平明顯增高，此時PCT主要由甲狀腺外組織產生[9]。嚴重全身性細菌、真菌、寄生蟲、急性瘧疾感染，血漿PCT濃度異常升高，而且升高程度與感染炎癥嚴重程度及預后有關。血糖水平是反映糖代謝障礙程度的重要指標，感染導致的過度炎癥反應可誘發胰島素抵抗和胰島B細胞功能障礙，造成高血糖反應[3]。

我們結果表明，治療對照組血清C-反應蛋白和降鈣素原以及血糖水平明顯高于正常對照組，提示嚴重內毒素血癥燙傷小鼠存在過度炎癥反應和糖代謝障礙。我們結果還表明，sCD14可有效降低嚴重創傷機體C-反應蛋白和降鈣素原以及血糖水平，提示sCD14具有拮抗LPS病理作用發揮抗炎效果。此外，我們結果表明，sCD14治療組血清C-反應蛋白和降鈣素原以及血糖水平雖然相對治療對照組下降，但仍高于正常對照組，提示sCD14不能完全拮抗LPS的病理作用，也可能是嚴重感染機體內毒素血癥不是造成C-反應蛋白和降鈣素原以及血糖水平升高的唯一原因。

sCD14通過與LPS無效結合，在高濃度LPS條件下，拮抗LPS的病理作用，也有文獻報道，sCD14可延長LPS在體內的半衰期，促進LPS的病理作用[6]。在嚴重創傷感染、SIRS以及MODS條件下，LPS過度升高，sCD14作為防治創傷MODS的有效藥物，已引起國內外高度重視[4]，我們結果支持sCD14可作為防治嚴重創傷MODS有效藥物的觀點。

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