降鈣素基因相關肽基因多態性與原發性高血壓易感性的關聯研究

胡遠東

（貴州省人民醫院ICU，貴州 貴陽 550002）

約80%左右的高血壓病是由多個基因的遺傳變異與環境因素共同作用所致的多基因疾病[1]，降鈣素基因相關肽（CGRP）是人類用分子遺傳學方法發現并在機體得到證實的神經肽，是迄今發現的舒血管作用最強的物質。本研究通過對293例原發性高血壓患者及208例血壓正常者的基因型進行研究，發現CALCA基因多態性（SNP）與原發性高血壓易感性有關。

1 材料與方法

1.1 樣本來源

原發性高血壓病例標本來自2011～2012年貴州省人民醫院門診新發高血壓患者，排除非原發性高血壓、心肌病、風濕性心臟瓣膜病、2型糖尿病、慢性腎功能衰竭及其他心血管疾病患者。正常對照組來自貴州省人民醫院健康體檢者，排除高血壓病史。抽取每名研究對象靜脈血5ml，EDTA抗凝后離心分離血漿和血細胞并凍存，分別測定ADMA濃度和提取基因組DNA。同時記錄病例和對照組人群的基本資料和一般情況如性別、年齡、血壓、吸煙、身高、體重及糖尿病、高脂血癥、肝腎疾病等疾病史，并記錄肝腎功能等相關生化指標檢測結果，以上資料錄入數據庫。兩組之間的一般情況比較如表1。

表1 高血壓病病例和對照人群一般情況比較

1.2 研究方法

提取外周血基因組DNA，PCR擴增基因目標片段，根據人CALCA基因組DNA序列，應用軟件Primer設計PCR和基因分型引物，PCR擴增CALCA基因T-692C的PCR產物，用限制性內切酶PshAI進行酶切消化，瓊脂糖凝膠電泳分析基因型。

1.3 統計分析

應用LDA軟件檢驗哈-溫平衡（HWE），單倍型的構建采用Phase 2.0軟件進行，單倍型標簽SNP的確定采用SNP tag軟件進行。數據的統計學分析采用SPSS11.5，病例與對照組基因型與等位基因頻率的比較采用χ2檢驗。病例和對照組的臨床特性計量資料數據用均數±標準差（±s）表示，組間的比較計數資料采用t檢驗，計量資料采用χ2檢驗。應用非條件logistic回歸分析，對影響高血壓發病率的相關因素如年齡、性別、吸煙史、大量飲酒史、高脂血癥和高血壓病家族史的有無進行校正，分析基因型與高血壓病易感性的關聯關系，計算出P值，比值比（Odds ratio，OR）及其95%的置信區間（Confidence index，CI）。P＜0.05被認為具有統計學上的顯著意義。

2 結 果

高血壓病組CALCA多態性位點TT、TC、CC基因型的頻率分別為：85.7%、12.6%、1.7%，對照組分別為92.8%、7.2%、0.0%（表2），基因型頻率符合Hardy-Weinberg平衡。高血壓病組與對照組CALCA T-692C基因型分布比較具有統計學差異（χ2=4.286，P=0.038）。高血壓組C等位基因頻率為8.0%，對照組為3.7%。C等位基因在高血壓病以及對照組的分布差異有顯著性（P＝0.023）。

表2 高血壓病病例和對照人群中CALCA 基因T-692C多態位點基因型分布情況比較

3 討 論

CGRP不僅直接作用于血管內皮細胞鈣通道、促進 NO釋放產生舒血管作用。還可抑制由炎癥因子誘導的血管平滑肌細胞的增殖，對心血管系統功能表現出復雜和多樣的調節。CGRP也與其他血壓調節通路如去甲腎上腺素血管緊張素Ⅱ（AgiotensinⅡ）相互作用，共同調節全身外周阻力[5，7]。血管緊張素Ⅱ通過突觸前AgiotensinⅡ受體抑制CGRP能神經功能，而 CGRP除可對抗AgiotensinⅡ的縮血管作用外，還能抑制醛固酮的分泌（尤其是AgiotensinⅡ引起的醛固酮的分泌）。上述假設已得到動物模型和人體實驗的結果證實[2，3，4]。

本研究中通過實驗初步證實了CALCA基因多態性與人群高血壓易感性有關的假設，即CALCA T-692C位點的SNP與高血壓發病率相關，該位點C等位基因攜帶者發病風險升高。而在之前，類似的研究只有日本的一項關于CALCA第1個內含子中的一個2bp的微缺失與原發性高血壓的易感性關系的研究探討過CALCA基因變異與原發性高血壓之間的關系[8]。而我們首次調查了CALCA T-692C 的SNP與中國漢族人群高血壓發病率的關系。但是，由于亞組樣本數量的限制，這些結果仍然是初步的，還需要進一步進行大規模的研究。

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