不同產地白芥子和黃芥子中芥子堿硫氰酸鹽的含量比較

王海波

(河南省食品藥品檢驗所，河南 鄭州450003)

芥子為常用中藥，始載于梁代《名醫別錄》，以后歷代本草中均有記載，自1953 年以來被我國歷版藥典收載。2010 版《中國藥典》在芥子項下同時收載了2 個藥材基源，即十字花科植物白芥Sinapis albaL.或黃芥Brassica juncea(L.)Czern. et Coss.的干燥成熟種子，前者習稱白芥子，后者習稱黃芥子［1］。兩種芥子的臨床功效基本一致，但白芥子的祛痰平喘作用強于黃芥子，黃芥子的毒性大于白芥子，因此白芥子的市場需求量較大。由于兩者的外觀性狀相似，有不法商家把黃芥子用硫黃熏烤，冒充白芥子銷售，嚴重影響了臨床用藥的安全有效性。芥子中含有大量的芥子堿類成分。芥子堿類成分為一類季銨鹽生物堿，廣泛存在于十字花科植物中，代表性分是芥子堿。芥子堿多以硫氰酸鹽形式存在，具有抗輻射、抗氧化、抗衰老、抗雄激素、降血壓等多種生物活性［2-3］。芥子堿的含量測定方法多為高效液相色譜法［4］，此外還見有毛細管電泳法［5］和紫外分光光度法［6］的報道。本文以芥子中的主要有效成分芥子堿硫氰酸鹽作為指標成分，以高效液相色譜法測定不同產地的白芥子和黃芥子中芥子堿硫氰酸鹽的含量，并比較白芥子和黃芥子中芥子堿硫氰酸鹽的含量差異，以控制藥材質量。此方法操作簡便，重現性好，分析快速準確。

1 藥品、試劑與儀器

白芥子和黃芥子購于內蒙古和河北兩地。芥子堿硫氰酸鹽對照品(批號111721-200501，供含量測定用)，購自中國藥品生物制品檢定所;乙腈，色譜純，德國MERCK 公司產品;水為超純水，臨用新制;其余試劑均為分析純。Waters 2695 液相色譜儀，四元泵，在線脫氣器，二極管陣列檢測器，Empower 色譜工作站，美國沃特世科技有限公司產品;XR-205SM-DR 電子分析天平，瑞士Precisa 公司產品;KQ-300 型超聲波提取器，40 kHz，300 W，昆山市超聲儀器有限公司產品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱為Phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，流動相為乙腈－0.08 moL/L 磷酸二氫鉀(10 ∶90，體積比)，流速1. 0 mL/min，柱溫30 ℃，檢測波長326 nm，進樣量10 μL，理論塔板數按芥子堿硫氰酸鹽峰計算應不低于3 000。

2.2 對照品溶液的制備

取芥子堿硫氰酸鹽對照品適量，精密稱定，用流動相溶解并制成每mL 中含0.2 mg 的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品細粉約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇50 mL，超聲處理20 min(功率250 W，頻率20 kHz)，濾過。濾渣再用甲醇同法提取3 次，濾液合并，減壓回收溶劑至干，殘渣加流動相溶解并轉移至50 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 方法學考察

2.4.1 檢測波長考察

對芥子堿硫氰酸鹽對照品和芥子藥材供試品中芥子堿硫氰酸鹽色譜峰進行紫外吸收光譜掃描，結果均在326 nm 處有最大吸收，且對照品和供試品色譜中芥子堿硫氰酸鹽色譜峰的紫外吸收光譜基本一致，峰純度較好。見圖1。

圖1 對照品與供試品的色譜圖、光譜圖

2.4.2 線性關系的考察

取不同濃度芥子堿硫氰酸鹽對照品溶液，濃度分別為0. 205 20，0. 145 00，0. 102 60，0. 051 30，0.020 52 g/L，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定。以進樣量(μg)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。結果:芥子堿硫氰酸鹽在0.205 2～2.052 0 μg 間線性良好，回歸方程Y=1.977 ×106X－2 726(r=0.999 96)。見表1。

表1 芥子堿硫氰酸鹽線性關系考察

2.4.3 精密度試驗

取同一對照品溶液，連續進樣6 次，以芥子堿硫氰酸鹽峰面積計算，RSD=0.30%。見表2。

表2 精密度試驗結果

2.4.4 穩定性試驗

取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8，12 h 進樣，測定峰面積，以芥子堿硫氰酸鹽峰面積計算，RSD=0.21%。結果表明供試品溶液在12 h 內基本穩定，見表3。

表3 穩定性試驗結果

2.4.5 重復性試驗

取同一批次樣品制備6 份供試品，測定芥子堿硫氰酸鹽平均質量分數為0.733%，RSD=2.00%，表明重復性良好。見表4。

表4 重復性試驗結果

2.4.6 加樣回收率試驗

取已知樣品(芥子堿硫氰酸鹽的質量濃度為6.99 mg/g)6 份，每份0.5 g，精密加入芥子堿硫氰酸鹽對照品的甲醇溶液(76.48 mg/L)50 mL，按照2.3 項下方法操作，制備加樣供試品溶液，測定芥子堿硫氰酸鹽的含量，計算回收率，結果見表5。

表5 加樣回收率試驗結果

2.4.7 樣品測定

將收集的不同來源的白芥子和黃芥子樣品按2.3 項下的方法制成供試品溶液，取供試品溶液及2.2 項下對照品溶液各10 μL，進樣測定，結果見表6。

表6 樣品測定結果

3 討 論

3.1 供試品溶液的制備方法

在實驗中，選擇比較了水浴加熱回流和超聲提取兩種提取方法，結果測得的芥子堿硫氰酸鹽含量無明顯差別。因為超聲提取使用方便，可操作性強，所以選用超聲提取作為提取方法。

3.2 流動相的選擇

原2005 版《中國藥典》一部中采用梯度洗脫法測定芥子中芥子堿硫氰酸鹽含量，試驗表明對照品保留時間過短，分離度較差。筆者結合參考文獻，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈－0.08 moL/L磷酸二氫鉀(10∶90，體積比)為流動相，以芥子中的主要有效成分芥子堿硫氰酸鹽作為指標成分，建立了高效液相色譜法測定本品中芥子堿硫氰酸鹽的含量，以控制藥材及飲片質量。此方法操作簡便，重現性好，分析快速準確。

3.3 白芥子和黃芥子中芥子堿硫氰酸鹽的含量

由樣品測定結果可知，芥子中芥子堿硫氰酸鹽的含量均符合2010 版《中國藥典》一部芥子堿硫氰酸鹽質量分數不得低于0.50%的限度規定，且不同產地的白芥子含量差異較大。目前由于條件所限，收集到的白芥子和黃芥子樣品較少，尚不能根據實驗結果判斷兩種的芥子堿硫氰酸鹽含量有無顯著性差異。在今后的研究中，可繼續積累實驗數據，比較白芥子和黃芥子的芥子堿硫氰酸鹽的含量規律。

［1］國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典:一部［M］. 北京:中國醫藥科技出版社，2010:149.

［2］歐敏銳，吳國欣，林躍鑫.中藥白芥子研究概述［J］.海峽藥學，2001，13(2):1－3.

［3］馮寶民，余正江，李帆，等.白芥子化學成分的研究［J］.大連大學學報，2004，25(6):43－45.

［4］劉麗芳，王宇新，劉雪芳，等.HPLC 法測定白芥子藥材中芥子堿硫氰酸鹽的含量［J］. 中國野生植物資源，2001，20(5):49－50.

［5］苑艷霞，王惠國，劉燕妮，等. 毛細管電泳法測定白芥子中芥子堿的含量［J］. 沈陽藥科大學學報，2011，28(5):384－386.

［6］楊雪萍，王惠國，馮保民，等. 芥子中總芥子堿類成分的含量測定［J］.大連大學學報，2009，30(6):53－55.