唐山地區漢族人群IL-6－572C/G和TNF-α－238A/A基因多態性與腦梗死的關系

劉東芳 張寶琴 張振宇 陳 暉 趙亞婷 張成俠 陳乃耀 王大力 馮志剛 劉艷芬 訾建杰

(河北省唐山市人民醫院血液科，河北 唐山 063000)

近年來，腦梗死的發病率有逐年增高的趨勢，且發病年齡趨向年輕化，有研究認為是遺傳因素和環境因素共同作用的結果〔1〕。白介素(IL)-6和腫瘤壞死因子(TNF)-α是介導體內炎癥反應的重要因子，發揮重要的抗炎作用〔2〕;而IL-6和TNF-α基因位點的多態性可能與腦梗死的發生有相關性。本文擬探討唐山地區漢族人群中IL-6和TNF-α基因型的分布特點及其與腦梗死的相關性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 隨機選取2010年1月至2012年1月我院收治的唐山地區漢族腦梗死患者70例，男44例，女26例，平均年齡(47.33±8.5)歲;符合1995年中華醫學會第四屆腦血管病會議修訂的各類腦血管疾病診斷標準，并經頭顱CT檢測確診。排除外傷性、血液性、藥物、腫瘤及腦血管畸形等引起的腦梗死，患者無合并心、肝、腎等臟器疾病，無精神性疾病，意識清楚。另選取我院同期門診體檢的健康人群80例為對照組，男56例，女24例;平均年齡(44.93±7.1)歲;兩組一般資料比較無統計學差異(P＞0.05)。

1.2 IL-6和TNF-α基因型的檢測 抽取肘靜脈血5 ml，加入抗凝劑，加入氯仿及無水乙醇提取DNA，采用PCR和限制性片段長度多態性分析IL-6－572C/G和TNF-α－238A/A的基因型，PCR 擴增體系：DNA 模板 1 μl，Taq DNA 聚合酶 1 μl，MgCl22.5 μl，dNTPs 2 μl，上、下游引物各 1 μl，10 倍緩沖液 2.5 μl，補DEPC水收至總體積25 μl。PCR反應程序：預變性94℃5 min;變性：95℃ 35 s，退火溫度 54℃，72℃ 35 s，35 個循環;延伸：75℃ 10 min。PCR產物的限制性酶切反應體系為：PCR擴增產物10 μl，10 倍緩沖液 2 μl，限制性內切酶 0.5 μl，補 DEPC收至總體積20 μl，混勻后置37℃水浴箱中消化過夜。PAGE凝膠電泳檢測：取酶切產物10 μl與1 μl 10倍上樣緩沖液混勻，100 V穩定電壓電泳30 min，置凝膠成像系統(UVP，美國)觀察拍照。

1.3 統計學方法 采用SPSS16.0統計學軟件行χ2檢驗。

2 結果

2.1 PCR及酶切產物電泳結果 IL-6基因－572C/G PCR產物長度為195 bp，目的條帶單一清晰。擴增產物經特異性限制性內切酶酶切后電泳結果表明：基因型有C/C型，C/G型和G/G型3種。TNF-α －238A/A基因PCR產物長度為147 bp，擴增產物經特異性限制性內切酶酶切后電泳結果表明：基因型有G/A型，G/G型和A/A型3種。

2.2 IL-6－572C/G基因位點多態性與腦梗死的相關性 腦梗死組IL-6－572C/G基因型分布頻率和等位基因頻率均與對照組有顯著性差異(χ2=5.31，P＜0.05)。見表1。

2.3 TNF-α－238A/A基因位點多態性與腦梗死的相關性腦梗死組TNF-α－238A/A基因型分布頻率和等位基因頻率均與對照組有顯著性差異(χ2=4.88，P＜0.05)。見表2。

表1 兩組IL-6－572C/G基因型和等位基因頻率的比較〔n(%)〕

表2 兩組TNF-α基因型和等位基因頻率的比較〔n(%)〕

3 討論

腦梗死是神經內科常見疾病，Catto〔3〕研究認為基因變異是腦梗死發病的重要因素之一。IL-6是機體重要抗炎因子，可促進其他細胞因子的合成與釋放，促進動脈粥樣硬化的發生發展。國外研究表明IL-6基因啟動子存在基因位點多態性，其基因的變異將導致后續的基因轉錄和蛋白表達水平存在個體差異，直接影響血清IL-6的濃度;同時也影響不同人群對某種疾病的易感性〔4，5〕。IL-6基因的多態性，將促進IL-6相關疾病的發生發展及轉歸，但其與腦梗死的相關性目前尚無大量報道。本研究結果表明IL-6基因位點的多態性與腦梗死的發病存在有一定的相關性。

早在2005年，Karahan等〔6〕即報道了 TNF-α －308G/A 基因位點多態性與土耳其人群中腦梗死的發病具有相關性，當TNF-α基因啟動子區內308位點的G/A存在多態性變異時，將影響TNF-α的基因轉錄和蛋白表達，影響血清TNF-α的水平，促進了TNF-α相關性疾病的發生發展。本研究結果亦表明，TNF-α－238A/A基因位點存在多態性，唐山地區人群中TNF-α基因多態性與腦梗死的發生存在一定的相關性。

綜上所述，IL-6和TNF-α基因多態性與唐山地區人群腦梗死的發病存在有一定的相關性，但其相關的發病機制尚不清楚，有待進一步深入研究。

1 Zhang Y，Hayes AT Pritchard A，et al.Interleukin-6 promoter polymorphism;risk and pathology of Alzheimer disease〔J〕.Neurosci Lett，2008;362(11)：99-102.

2 張 虹，李彥玲.急性腦梗死患者血清T淋巴細胞亞群、白介素-6及腫瘤壞死因子-α 的研究〔J〕. 實用醫學，2004;20(4)：394-5.

3 Catto AJ.Genetic aspects of the hemostatic system in cerebrovascular disease〔J〕.Neurology，2001;57(1)：24-30.

4 Ota N，Nakajima T，Nakszawa I，et al.A nucleotide variant in the promoter region of the interleukin-6 gene associated with decreased bone mineral density〔J〕.J Hum Genet，2001;46(2)：267-72.

5 尤勁松，黃培新，劉茂才，等.腦梗死患者ICAM-1基因K469E及IL-6基因-174G/C多態性研究〔J〕.中國老年學雜志，2007;8(27)：1580-2.

6 Karahan ZC，Deda G，Sopahit T，et al.TNF-α － 309G/A and IL-6－174G/C polymorphisms in the Turkish pediatric stroke patients〔J〕.Thromb Res，2005;115(5)：393-8.