夏枯草膠囊對橋本甲狀腺炎患者自身抗體及Th17細胞的影響

劉婧茹 王 清 (吉林大學中日聯誼醫院內分泌科，吉林 長春 130033)

橋本甲狀腺炎(HT)，簡稱橋本氏病，是由遺傳因素和多種內外環境因素相互作用引起的。其發生與體內免疫失衡有關，是典型的由T細胞介導的自身免疫性疾病。研究發現在橋本甲狀腺炎患者體內Th17細胞水平明顯升高，但具體作用機制尚不明確。臨床上約有20%的橋本甲狀腺炎患者最終發展成甲狀腺功能減退(簡稱橋本甲減)。目前公認的治療方案是甲狀腺素終身替代治療，但部分患者臨床依從性較差。本文主要觀察夏枯草從免疫調節角度對橋本甲狀腺炎的治療效果。

1 資料與方法

1.1 對象 收集2010年8月至2011年12月吉林大學附屬中日聯誼醫院門診及住院橋本甲減患者45例，隨機分為兩組。治療組23例，其中男3例，女20例;年齡20～81歲，平均(48.26±14.84)歲;病程1個月～10年，平均(3.3±2.89)年。對照組22例，其中男3例，女19例;年齡18～74歲，平均(48±13.67)歲;病程1個月～11年，平均(3.21±2.71)年。兩組一般資料比較無顯著性差異(P＞0.05)。另外隨機收集20例健康體檢者為正常組，男4例，女16例;年齡28～69歲，平均(46.95±11)歲。正常組性別、年齡與治療組和對照組均無顯著性差異(P＞0.05)。診斷標準：參照《中國甲狀腺疾病診治指南》(中華醫學會內分泌學會，2008年)。納入標準：①彌漫性甲狀腺腫大，質地較韌，特別是伴頰部椎體葉腫大者;②甲狀腺抗過氧化物酶抗體(TPO-Ab)和(或)甲狀腺球蛋白抗體(TGAb)陽性者;③甲狀腺細針穿刺細胞學檢查(FNAC)示甲狀腺彌漫性淋巴細胞及漿細胞浸潤、纖維化;④甲狀腺功能檢查示TSH上升，FT3和(或)FT4下降;⑤知情同意者。其中①②④⑤是必備條件。排除發熱、妊娠或哺乳期婦女，心、肝、腎嚴重功能障礙及合并其他自身免疫疾病，甲狀腺癌、單純性甲狀腺腫者及其他原因引起的甲狀腺功能異常者，對測試藥物過敏等對檢測結果可能有影響的患者。對照組均來自醫院健康體檢者，無甲狀腺家族史，無系統性疾病史，血常規、尿常規、肝功、腎功、血脂、甲狀腺功能正常。

1.2 治療方法 對照組給予口服左旋甲狀腺素片(優甲樂，德國默克公司生產，注冊證號：H20090234，每片50 μg)，開始劑量25～50 μg，1次/d，根據甲狀腺功能調整優甲樂劑量至甲狀腺功能正常，維持服用。治療組在對照組基礎上加用夏枯草膠囊(北京協和康友制藥有限公司生產，國藥準字：Z19991033，每粒0.35 g)，2粒/次，2次/d口服，連續治療2個月。

1.3 觀察指標及檢測方法 所有患者均于治療前清晨空腹取靜脈血，采用化學發光法測定甲狀腺功能(FT3、FT4、TSH)，儀器為雅培I2000免疫分析儀，試劑盒為美國雅培公司配套試劑。甲狀腺自身抗體(TPO-Ab、TGAb)應用電化學發光免疫分析法檢測，儀器為Roche cobas E601，試劑為原廠配套試劑。應用細胞內細胞因子染色流式細胞術分析法檢測各組研究對象外周血Th17細胞占CD4+T細胞百分率。流式細胞儀規格型號為美國Beck man coulter Fc 500，試劑選用美國R＆D公司IL-17-Percp。

1.4 統計學方法 采用SPSS19.0軟件進行分析，計量資料用s表示。組間比較采用t檢驗，采用Pearson相關性分析。

2 結果

2.1 正常組與橋本甲狀腺炎患者血清TPO-Ab、TGAb水平及Th17/CD4+T細胞百分率的比較 橋本甲狀腺炎患者血清TPO-Ab、TGAb水平及Th17/CD4+T細胞百分率均明顯高于正常組(P＜0.01)。見表1。

2.2 治療前后TPO-Ab、TGAb水平及Th17/CD4+T細胞百分率的變化 治療組和對照組治療后TPO-Ab、TGAb水平較治療前均明顯下降(P＜0.01或P＜0.05)，且治療組下降幅度優于對照組(P＜0.05)。對照組治療后Th17細胞百分率較治療前無顯著性變化(P＞0.05)。治療組治療后Th17細胞百分率較治療前明顯下降(P＜0.01)，與對照組治療后相比有顯著性差異(P＜0.01)。見表2。

表1 正常組與橋本甲狀腺炎患者血清TPO-Ab、TGAb水平及Th17/CD4+T細胞百分率的比較(s)

表1 正常組與橋本甲狀腺炎患者血清TPO-Ab、TGAb水平及Th17/CD4+T細胞百分率的比較(s)

與正常組比較：1)P＜0.01

組別 n TPO-Ab(IU/ml)TGAb(IU/ml)Th17/CD4+T細胞(%)正常組20 15.68±8.53 39.21±31.96 2.42±0.59對照組 22 433.67±140.081) 960.69±399.591) 4.56±1.401)治療組 23 449.97±155.101)1017.22±565.931) 4.65±1.521)

表2 治療前后TPO-Ab、TGAb水平及Th17/CD4+T細胞百分率的變化(s)

表2 治療前后TPO-Ab、TGAb水平及Th17/CD4+T細胞百分率的變化(s)

與本組治療前比較：1)P＜0.01，2)P＜0.05;與對照組治療后比較：3)P ＜0.05，4)P ＜0.01

組別 n TPO-Ab(IU/ml)TGAb(IU/ml)Th17/CD4+T細胞(%)對照組治療前 22 433.67±140.08 960.69±399.59 4.56±1.40治療后 22 338.18±151.741)798.66±356.132) 4.39±1.41治療組治療前 23 449.97±155.10 1017.22±565.93 4.65±1.52治療后 23 255.04±120.291)3)585.93±345.311)3)3.29±1.051)4)

2.3 相關性分析 治療組和對照組共45例患者，外周血Th17/CD4+T細胞百分率與血清TGAb及TPO-Ab水平之間呈正相關(分別為 r=0.527，P ＜0.01;r=0.573，P ＜0.01)。

3 討論

橋本甲狀腺炎是臨床上常見的自身免疫性甲狀腺疾病。其病理表現為彌漫性成熟淋巴細胞浸潤及淋巴細胞生發中心，小卵泡形成，甲狀腺濾泡破壞，萎縮和纖維化。目前發病機制尚不明確，主要由遺傳、環境和自身免疫因素相互作用所致。免疫細胞和細胞因子參與其發病，研究表明淋巴細胞和自身抗體介導的免疫過程參與了疾病的發生，其中輔助性T細胞(Th)發揮重要作用。以往認為橋本甲狀腺炎的病理變化主要與Th1細胞及其細胞因子有關，以Th1細胞介導的免疫應答占優勢地位，且已證實Th1/Th2失衡導致炎癥因子和Th1細胞的浸潤并破壞甲狀腺腺體是橋本甲狀腺炎發病機制之一〔1〕。近年來研究又發現Th17細胞可能也參與橋本甲狀腺炎的發病。

Th17細胞是近年來發現的，區別于Th1、Th2和調節性T細胞的一種 CD4+效應T細胞，因其主要分泌白介素17(IL-17)而命名。Th17細胞參與炎癥反應和多種自身免疫性疾病的發生、發展〔2〕，如類風濕關節炎、多發性硬化、銀屑病、炎癥性腸病等。研究發現，HT患者體內的微環境可能誘導Th17細胞分化〔3〕。Nicte等〔4〕研究表明HT患者體內Th17細胞分化及Th17細胞因子合成明顯增加，同時研究顯示HT患者體內外周血單核細胞內Th1/Th17細胞比例失衡〔5〕，Th1細胞相關的轉錄因子T-bet表達水平及細胞因子INF-γ下降，而Th17細胞相關的轉錄因子視黃酸相關孤獨核受體(RORγt)表達水平和IL-17的水平上升，提示Th1和Th17失衡誘導和加重橋本甲狀腺炎。Horie等〔6〕研究發現，與 IL-17陽性的小鼠相比，在 IL-17缺乏的碘誘導的自身免疫性甲狀腺炎NOD-H2h4小鼠體內其甲狀腺炎癥的發病率和嚴重程度及血清TGAb滴度均明顯下降。本實驗進一步說明Th17細胞在橋本甲狀腺炎發病過程中起著至關重要的作用，在介導炎癥反應的同時，可能參與患者體內自身抗體的產生，但具體機制尚需進一步研究。

夏枯草膠囊是由夏枯草和紅糖制成的中藥制劑。夏枯草為唇形科夏枯草屬植物，具有降壓、降血糖、抗病毒、抗過敏、抗炎、抗腫瘤和免疫調節作用，廣泛應用于肺結核、甲狀腺腫大、傳染性肝炎、高血壓、胸膜炎和癌癥等的臨床治療。夏枯草具有明顯的抗炎、免疫調節作用。馬德恩等〔7〕研究發現夏枯草能明顯改善巴豆油所致的小鼠耳腫脹和足腫脹，有明顯的抗炎作用，且使小鼠體內胸萎縮、脾臟體積減小、淋巴組織增殖受到抑制，淋巴明顯減少;同時外周血中淋巴細胞數目也顯著下降，說明夏枯草對非特異性免疫和特異性免疫均有明顯的抑制作用。Sun等〔8〕研究顯示夏枯草乙醇提取物在體外能顯著抑制刀豆蛋白A和脂多糖刺激的脾淋巴細胞增殖，且其作用呈濃度依賴性。提示夏枯草乙醇提取物能顯著抑制卵白蛋白免疫小鼠的T和B淋巴細胞活性，對小鼠體液和細胞免疫均有明顯的抑制作用。

本實驗中應用夏枯草膠囊治療后治療組患者Th17細胞百分率顯著下降，考慮可能機制是夏枯草膠囊作用于Th17細胞及其他效應T和B細胞，抑制其分泌炎癥因子及趨化因子，減少了甲狀腺濾泡細胞的破壞及甲狀腺自身抗體的生成。橋本甲狀腺炎是一個持續性的炎癥性自我破壞的過程，機體長期處于低水平的炎癥反應和免疫失衡狀態，故需要長時間的免疫調節作用，才能達到穩態。

甲狀腺自身免疫性抗體(TPO-Ab、TGAb)不僅是橋本甲狀腺炎的診斷標準，同時還參與疾病的發生，隨病程的不斷進展，TGAb的水平及親和力不斷上升〔9〕。同時高水平的TPO-Ab與橋本甲狀腺炎患者較差的身體和心理健康相關。故降低血清TPO-Ab、TGAb的水平不但是疾病治療的有效指標，也能延緩疾病發展進程，改善患者身體和心理不適癥狀。夏枯草膠囊能明顯降低橋本甲減患者血清TPO-Ab、TGAb水平。

總之，夏枯草膠囊聯合優甲樂治療能明顯降低橋本甲狀腺炎患者Th17細胞水平及血清自身免疫性抗體TPO-Ab、TGAb的滴度，改善甲狀腺功能，調節患者體內免疫狀態，療效可靠，藥物安全性高，適合臨床推廣應用。

1 Kong YC，Morris GP，Brown NK，et al.Autoimmune thyroiditis：a model uniquely suited to probe regulatory T cell function〔J〕.J Autoimmun，2009;33：239-46.

2 Btelli E，Korn T，Oukka M，et al.Induction and effector functions of TH17 cells〔J〕.Nature，2008;453：1051-7.

3 Figueroa VN，Sanz CP，Moreno OR，et al.Serum levels of angiogenic molecules in autoimmune thyroid diseases and their correlation with laboratory and clinical features〔J〕.J Clin Endocrinol Metab，2009;94：1145-53.

4 Nicte FV，Manuel AP，Ignacio B，et al.Increased circulating proinflammatory cytokines and Th17 lymphocytes in Hashimoto＇s thyroiditis〔J〕.J Clin Endocrinol Metab，2010;95：953-62.

5 Shi Y，Wang H，Su Z，et al.Differentiation imbalance of TH1/TH17 in peripheral blood mononuclear cells might contribute to pathogenesis of Hashimoto＇s Thyroiditis〔J〕.Scand J Immunol，2010;72：250-5.

6 Horie I，Abiru N，Nagayama Y，et al.T Helper type 17 immune response plays an indispensable role for development of iodine-induced autoimmune thyroiditis in nonobese diabetic-H2h4 mice〔J〕.Endocrinology，2009;150(11)：5135-42.

7 馬德恩，王竹梅，馬愛英，等.夏枯草的抗炎作用及其對免疫器官影響的研究〔J〕. 山西醫藥雜志，1983;12(2)：67-70.

8 Sun HX，Qin F，Pan YJ.In vitro and in vivo immunosuppressive activity of spica prunellae ethanol extract on the immune responses in mice〔J〕.J Ethnopharmacol，2005;101：31-6.

9 Zhang Y，Gao Y，Li M，et al.Avidity of thyroglobulin antibody in sera from patients with Hashimoto＇s thyroiditis with different thyroid functional status〔J〕.Clin Exp Immunol，2010;161：65-70.