胡桃楸葉乙醇提取物的抗氧化活性

李 巖 李 娟 李 靜 柳旺艷 (北華大學公共衛生學院，吉林 吉林 303)

胡桃楸(julans mandshurica maxim)為落葉喬木，主要分布于我國黑龍江省東部小興安嶺等山區，為我國珍貴樹種之一。其不僅木材優良，而且具有多種藥用價值。《開寶本草》最早記載胡桃楸有補腎固精、斂肺定喘、抑菌鎮咳及抗癌之功效〔1〕。胡桃楸葉內含有胡桃醌、胡桃甙、檸檬烯、沒食子酸及油酸等多種生物化學成分，胡桃楸葉提取物的殺蟲活性和抗油脂氧化作用已有報道〔2〕，但其抗電離輻射所致的氧化損傷尚未見報道。本文旨在研究胡桃揪葉乙醇提取物(AELJ)的抗氧化活性。

1 材料與方法

1.1 藥物制備 新鮮胡桃楸葉于2011年秋采自吉林省敦化市雁鳴湖自然保護區，自然陰干后粉碎，水提醇沉后經大孔樹脂吸附，依次用水及60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓蒸出溶劑得棕褐色黏稠物即為AELJ。

1.2 主要儀器、試劑 RE-52AA型旋轉蒸發儀，上海亞榮生化儀器廠;721型紫外分光光度計(上海分析儀器三廠);超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)測定試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.3 實驗動物 健康雄性昆明種小鼠(6～8周齡，體重18～22 g)，由吉林大學實驗動物中心提供。

1.4 動物分組及處理 將60只實驗小鼠隨機分為6組：正常對照組(NC)，照射對照組(蒸餾水，IC)，AELJ兩個劑量組(300、600 mg/kg)，照射給藥組和單純給藥組，每組10只。每天灌胃給藥1次，連續5 d，于第6天給予照射對照組和AELJ高、低劑量照射組小鼠以X射線進行一次全身均勻照射，照射劑量率0.287 Gy/min，總劑量2.0 Gy。照射后繼續給藥5 d，于末次給藥24 h后處死小鼠測定各項指標。

1.5 實驗方法

1.5.1 小鼠1%肝組織勻漿的制備 取小鼠肝臟，稱取重量后按比例(1∶5)放入冷生理鹽水中，在冰浴條件制備各組小鼠1%肝組織勻漿，冷藏待用。

1.5.2 肝組織勻漿中總蛋白含量的測定 取各組小鼠1%肝組織勻漿 10 μl加入 2 490 μl生理鹽水中，再向管中加入1.5 ml考馬斯亮藍。用1 ml生理鹽水與3 ml考馬斯亮藍的混合液調零，在575 nm下，722型分光光度計進行測定并記錄(A)值。按下式計算蛋白含量。蛋白含量(g/L)=(測定管吸光度值－空白管吸光度值)/(標準管吸光度值－空白管吸光度值)=標準管濃度。

1.5.3 肝組織MDA的測定(TBA法〔3〕)取各組小鼠1%肝組織勻漿上清800 μl，取同樣體積的標準應用液，向上述兩管中加入20% 三氯醋酸(TCA)2.5 ml混勻。再向其中分別加入1% 硫代巴比妥酸(TBA)1.0 ml，混勻，沸水浴30 min，流水冷卻至室溫，2 000 r/min離心5 min。吸取上清液，以722型分光光度計于532 nm波長處測定各樣本的吸光度(A)值。

1.5.4 肝組織SOD活性測定 取各組小鼠1%肝組織勻漿作為樣品，嚴格按照試劑盒說明書方法測定SOD活力。采用722型分光光度計，1 cm光程，于550 nm波長下測定各樣本的吸光度(A)值。通過以下公式，可計算出樣品中的SOD活力。

1.6 統計學方法 應用SPSS12.0統計軟件，多組資料檢驗采用方差分析，組間差異顯著性檢驗采用t檢驗。

2 結果

照射對照組的SOD活力和MDA含量明顯下降，并且與正常照射組相比，差異均有統計學意義(均P＜0.05)，說明X線照射后小鼠受到了急性氧化損傷。AEBJ高、低劑量單純給藥組的SOD活力和MDA含量與假照射對照組相比，差異均沒有統計學意義(P＞0.05)，說明AEBJ對正常小鼠可能沒有副作用或副作用很小。AEBJ高、低劑量照射給藥組的SOD活力均高于照射對照組(P＜0.05);同時，AEBJ高、低兩個劑量組間差異并不具有統計學意義(P＞0.05)，說明AEBJ對SOD活力的下降有一定拮抗作用。AEBJ高、低劑量照射給藥組的MDA含量均低于照射對照組，并且差異具有統計學意義(P＜0.05);同時，AEBJ高、低兩個劑量組間差異具有統計學意義(P＜0.05)。說明AEBJ對MDA含量的增加有明顯抑制作用，并且抑制效果隨濃度增加而增強。見表1。

表1 AEBJ對小鼠肝組織勻漿SOD活力、MDA含量影響(s)

表1 AEBJ對小鼠肝組織勻漿SOD活力、MDA含量影響(s)

與照射對照組比較：1)P＜0.05

組別 n SOD(U/mg prot)MDA(nmol/mg prot)正常對照組 10 277.93±37.651) 0.020±0.0041)照射對照組 10 201.65±61.39 0.058±0.038低AEBJ組 10 251.65±28.461) 0.037±0.0351)高AEBJ組 10 257.70±34.091) 0.021±0.0041)低AEBJ對照組 10 259.74±63.361) 0.021±0.0071)高AEBJ對照組 10 266.31±77.431) 0.023±0.0041)

3 討論

自由基學說是目前比較公認的衰老學說。已有充分證據表明，衰老時機體內抗氧化物質的活性及含量均顯著降低 ，而自由基代謝終產物MDA的含量卻顯著升高;電離輻射可引起自由基大量生成，引起機體抗氧化體系失去平衡，進而造成DNA堿基環結構、糖磷酸鍵和氫鍵斷裂等損傷;自由基也可攻擊生物膜磷脂中的多不飽和脂肪酸而引起脂質過氧化〔4〕。SOD為重要的抗氧化酶之一，可有效清除自由基反應的啟動因子，抑制和阻斷自由基反應，降低MDA的生成〔5〕。

SOD活力降低、MDA含量增加說明電離輻射可以引起抗氧化酶活性降低;同時可以使機體產生大量自由基，導致小鼠氧化還原系統的損傷，引起機體脂質過氧化，AEBJ具有抗電離輻射所致的機體氧化損傷作用，可顯著降低肝勻漿MDA的生成;其抑制作用隨濃度增加而增強。AEBJ也可以提高肝組織勻漿SOD活力，對維持機體抗氧化系統的平衡有重要意義。

本實驗初步證實了胡桃楸葉的抗氧化能力，對于促進胡桃楸葉資源的利用有一定的參考價值。

1 劉曉峰，王 東，郭建華，等.胡桃楸藥用價值研究〔J〕.中國醫藥研究，2005;3(1)：48-50.

2 翟梅枝，林曉明，林奇英，等.核桃葉抑菌成分的提取及其抑菌活性〔J〕. 西北林學院學報，2003;18(4)：89-91.

3 羅曉芳，傅寶華，秦文華，等.急性輻射損傷與血清中微量元素的關系研究〔J〕.衛生研究，2003;5(32)：482-3.

4 毛光明，陳 江，夏 勇，等.蔓延莓對衰老小鼠和輻照小鼠抗氧化功能的影響〔J〕.浙江預防醫學，2007;19(5)：10-2.

5 劉俊達.衰老的指標及檢測意義〔J〕.老年學雜志，1992;12(6)：377.