Rap1 gAP蛋白表達與卵巢癌之間的關系

付海燕 孫立新

卵巢癌是婦女常見的三大惡性腫瘤之一，而腫瘤的發生發展是多種基因改變和多階段致癌的復雜過程，原癌基因的激活和抑癌基因的失活是其發生的主要機制。Rap1是Ras家族GTP酶中的一員，在調節細胞增殖、黏附中起著重要作用［1］。Rap1 gAP是新近發現一種腫瘤相關的抑制基因，通過調控Rap1的活性，參與細胞增殖、分化及整合蛋白介導的細胞基質粘附和鈣調蛋白介導的細胞間的粘附等生命活動的調節。本文比較了卵巢癌、卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織中的Rap1 gAP蛋白表達情況，研究其與卵巢癌發病之間的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年2月至2010年12月之間于我院因多發子宮肌瘤或子宮肌腺癥行全子宮及雙附件切除患者10例(A組)，年齡為50～55歲，平均(52.3±1.767);卵巢良性腫瘤切除患側卵巢者10例(B組)，年齡50～60歲，平均(54.4±3.239);行卵巢癌分期術20例年齡為50～60歲，平均(55.25±2.489)歲，術后按照FIGO的手術-病理分期分為Ⅰ-Ⅱ期10例(C組)，年齡為50～60歲，平均(55.2±3.155)歲;Ⅲ-Ⅳ期10例(D組)，年齡為53～58歲，平均(55.3±1.767)歲。切除正常卵巢組織的病例均為50歲以上、無生育要求、要求行子宮全切同時行雙附件切除的多發子宮肌瘤或子宮肌腺癥患者，無倫理學糾紛。

1.2 研究方法 使用免疫組織化學法檢測Rap1 gAP蛋白在卵巢組織的表達。結果分為陽性、弱陽性及陰性。

1.3 統計學方法 使用SPSS 11.5軟件進行統計學分析，計數資料使用用χ2檢驗。

2 結果

表1 Rap1 gAP蛋白在卵巢組織中的表達(例，%)

2.1 Rap1 gAP表達陽性率的比較:①A高于其他三組:A組與B組比較，P=0.178，χ2=1.818;A組與 C組比較，P=0.068，χ2=3.333;A 組與 D 組比較，P=0.019，χ2=5.495*(差異有統計學意義)。②B組高于C組和D組:B組與C組比較，P=0.606，χ2=0.207;B 組與 D 組比較，P=0.264，χ2=1.250;③C組高于 D組:C組與 D組比較，P=0.531，χ2=0.351。

2.2 Rap1 gAP表達弱陽性率的比較 A組高于其他三組，P=0.606，χ2=0.207;其余三組弱陽性率相同均為20%。

2.3 Rap1 gAP表達陰性率的比較 ①A組低于其余三組:A組與B組比較，P=0.051，χ2=3.810;A組與C組比較，P=0.019，χ2=5.495*(差異有統計學意義);A組與D組比較，P=0.006，χ2=7.500*(差異有統計學意義)。②B組低于C組和D組:B組與C組比較，P=0.653，χ2=0.202;B組與D組比較，P=0.361，χ2=0.833。③C組低于D組:C組與D組比較，P=0.639，χ2=0.220。

3 討論

卵巢癌是婦女常見的三大惡性腫瘤之一，其中60%～90%是卵巢上皮性癌(ovarian epithelial carcinoma，簡稱卵巢癌)。早期癥狀不多，而且，由于其位置深居盆腔，缺乏早期癥狀和體征，易受臨床忽視，因而75% ～80% 的患者確診時已屬晚期，失去手術根治的機會，治愈率不到20%，5年生存率低于30%，死亡率高居婦科惡性腫瘤之首［2］。因此，研究卵巢癌發生的相關機理，對于該病的防治有著非常重要的作用。

近數十年來，經全世界的婦科腫瘤學專家的不懈努力，成功地探索出在腫瘤細胞減滅術的基礎上輔助化療的治療策略，一部分患者雖然已經達臨床緩解，但仍然有70%左右最終還要復發，其主要原因就是卵巢上皮細胞癌手術及化療后的復發率高所致。

卵巢惡性腫瘤轉移率和治療后復發率高是目前治療卵巢癌的難點之一，其侵襲轉移是一個多階段多步驟的復雜過程，涉及到細胞之間粘附性的改變，細胞外基質的降解，腫瘤細胞的免疫逃逸等過程，侵襲轉移的過程是極其復雜，但細胞與細胞，細胞與細胞外基質的相互作用致細胞之間粘附性的改變，卻貫穿于腫瘤細胞浸潤和轉移過程的始終［3］。因此，在腫瘤細胞發生侵襲和轉移的過程中，參與細胞間相互作用的細胞黏附分子是腫瘤細胞惡性行為的基礎，也是許多致癌因素綜合作用的最終靶位點，也是腫瘤復發和轉移的關鍵步驟。

Rap1是Ras家族GTP酶中的一員，在調節細胞增殖、黏附中起著重要作用。一系列的研究表明活化形式的Rap1能夠促進細胞間粘附連接的形成，Rapl缺失可以抑制內皮細胞由整合素介導的粘附、遷移功能。人臍靜脈內皮細胞Rapl缺失后，酪氨酸激酶p125EAK磷酸化減低。而p125FAK是調節細胞局部的粘附形成、肌動蛋白重組、細胞遷移等功能過程中重要的效應因。Rapl有兩種結合形式:GDP結合形式和GTP結合形式。Rapl和GTP結合的時候，處于活化狀態，而和GDP結合以后，其活性喪失，Rap1 gAP是小分子G蛋白Rapl的GTP酶激活蛋白，它可以加速Rapl由與GTP結合的活化形式轉變為與GDP結合的去活化形式的過程。

腫瘤的發生發展是多種基因改變和多階段致癌的復雜過程，原癌基因的激活和抑癌基因的失活是其發生的主要機制。Rap1 gAP是新近發現一種腫瘤相關的抑制基因，通過調控Rap1的活性，參與細胞增殖、分化及整合蛋白介導的細胞基質粘附和鈣調蛋白介導的細胞間的粘附等生命活動的調節。它在胰腺癌和口腔癌細胞中可以抑制腫瘤細胞的增殖、轉移和侵潤［4］。在胰腺癌中，Rap1 gAP表達明顯下降，轉入Rap1 gAP基因的細胞的遷移能力降低，侵潤能力也明顯降低，而且將轉染Rap1 gAP基因的胰腺癌細胞和未轉染Rap1 gAP基因的胰腺癌細胞分別注入SCID小鼠胰腺尾部，發現轉染Rap1 gAP基因的胰腺癌細胞形成的腫瘤比未轉染Rap1 gAP基因的胰腺癌細胞形成的腫瘤要小的多。在口腔癌中，Rap1 gAP下調Rap1的活性、ERK的活性和細胞增殖;在轉染Rap1 gAP基因的SCC細胞中，cyclinD1、cdk4、cdk6等周期蛋白表達均下降;并且將轉染Rap1 gAP基因的SCC細胞注入裸鼠體內，發現其引起的腫瘤比對照小的多。

Shuk-Mei Ho等人發現在卵巢癌細胞中，Rap1 gAP的表達下調［5］。然而，Rap1 gAP在卵巢癌患者發病、轉移等方面的研究尚未見相關報道。為研究卵巢癌與 Rap1 gAP蛋白表達之間的關系，以期揭示卵巢癌發生發展的機制我們開展了此項研究。

本文資料顯示:①正常卵巢組Rap1 gAP蛋白表達陽性率高于良性腫瘤組及兩卵巢癌組，與Ⅲ-Ⅳ期卵巢癌組相比差異有統計學意義;弱陽性率也高于其余三組;陰性率低于其余三組;與兩卵巢癌組相比差異有統計學意義。②良性腫瘤組該蛋白表達陽性率高于兩卵巢癌組;弱陽性率與兩卵巢癌組相同;陰性率低于兩卵巢癌組。③Ⅰ-Ⅱ期卵巢癌組Rap1 gAP蛋白表達陽性率高于Ⅲ-Ⅳ期卵巢癌組。根據以上研究結果顯示:卵巢癌患者中Rap1 gAP蛋白表達的下調和缺失率高于正常卵巢組織，差異有統計學意義;良性卵巢腫瘤患者的Rap1 gAP蛋白表達的下調和缺失率介于正常和卵巢癌患者之間，但由于病例數較少，尚不能證明其差異有統計學意義。

［1］Mammalian Rap1 controls telomere function and gene expression through binding to telomeric and extratelomeric sites.Teo H，Ghosh S，Luesch H.Nat Cell Biol，2010，12(8):758-67.Epub 2010 Jul 11．

［2］孔繁斗，等.宮頸癌組織中Rap1 gAP蛋白表達及其與HPV感染的相關性.大連醫科大學學報，2010，32(2):142-45．

［3］Lymph node involvement in epithelial ovarian cancer:sites and risk factors in a series of 355 patients.Fournier M，Stoeckle E，Guyon F.Int J Gynecol Cancer，2009 Nov;19(8):1307-13．

［4］Nellore A，Pazianak，MaC，et al．oss of Rap1 gAP in Papillary thyroid cancer，J Clin Endocrinol Metab，2009，94(3):1026-32．

［5］Shuk-Mei Ho1，Kin-Mang Lau1，Samuel Chi-ho Mok and Viqar Syed.Profling follicle stimulating hormone-induced gene expression changes in normal and malignant human ovarian surface epithelial cells.Oncogene，2003，22，4243-4256．