殼聚糖神經導管修復神經鞘瘤所致10mm周圍神經缺損的實驗研究

徐 昆， 楊宗偉， 宋有鑫， 劉建豐， 郝佳穎

(1.承 德 醫 學 院， 河北 承德 067000 2.承德醫學院附屬醫院， 河北 承德 067000)

神經鞘瘤所致長段周圍神經缺損在臨床上較常見，常采取腫瘤切除、自體皮神經移植縫合法治療。但術后早期:易與周圍組織粘連以阻礙神經近端向遠端延伸;晚期:瘢痕形成又可影響神經功能恢復，另外移植的皮神經區域可出現疼痛、麻木等失神經癥狀，從而導致臨床效果較差。隨著組織工程學的迅猛發展，一些生物可降解性神經導管，成為了新一代修復神經的替代品，研究發現殼聚糖神經導管具有良好的相容性及降解性。為此，本文進行殼聚糖神經導管修復長段周圍神經缺損的實驗研究，取得了良好的修復效果。

1 材料與方法

1.1 材料:殼聚糖神經導管由清華大學生物系生物材料與組織工程實驗室提供。

1.2 動物分組與方法:取健康成年SD大鼠24只(雌雄各半，由清華大學動物實驗中心提供)，體重約160－180g，隨機平均分成三組(每組8只)，以殼聚糖神經導管橋接為A組、硅膠管橋接為B組、正常對照為C組。用氯胺酮麻醉劑(100mg/kg)腹腔注射后，無菌下暴露大鼠的右側坐骨神經;取A、B兩組大鼠右股后部正中切口，自梨狀肌下緣約5mm處用銳利刀片切斷坐骨神經并用l0/0無損傷縫線將神經斷端扭轉180度后兩斷端4針神經外膜縫合，4周后形成長約8mm的“坐骨神經鞘瘤”模型。上述麻醉后，在無菌條件下沿原切口切開并切除“腫瘤”及兩斷端周緣2mm，使斷端回縮形成10mm的神經缺損，神經斷端分別插入各組導管約1.0mm，用l0/0無損傷縫線分別將上述導管管壁與大鼠坐骨神經兩斷端分別4針神經外膜縫合，正常對照組C組不進行任何處理，術后按原三組統一飼養，動物飼養在溫度20－25℃，濕度40%－60%的動物飼養室。

1.3 實驗觀察項目

1.3.1 大體觀察:術后觀察大鼠右側足(趾)的展爪反射、神經導管大體變化與周圍組織粘連情況，12周時，沿原切口暴露右側坐骨神經，觀察導管內神經再生恢復情況。

1.3.2 神經電生理檢測:術后12周，游離大鼠右側坐骨神經，應用Reporter電生理儀檢測神經干的動作電位振幅及傳導速度:將記錄電極刺入腓腸肌肌腹，刺激電極依次置于導管近、遠端5 mm處的坐骨神經干表面，刺激神經(強度;11mA;脈沖寬度;0.02ms)，測量復合肌動作電位，以計算運動神經傳導速度及最大振幅，從而評價神經再生恢復情況。

1.3.3 組織學觀察:術后12周，每組隨機選取5只SD大鼠制備再生神經組織中段標本(神經導管中點近、遠段各4mm)，常規鈾一鉛染色電鏡標本處理，JEM1230透射電鏡觀察:先在40倍率下測量再生神經橫截面積，再于每根神經斷面隨機選取6個400倍視野，測量有髓纖維平均軸突直徑、髓鞘厚度。ImagePro高清晰彩色醫學圖文分析系統測算有髓纖維密度，以評價神經再生恢復情況。

1.4 統計學分析處理:實驗數據采用SPSS 17.0統計軟件處理，所有計量資料均行正態性和方差齊性檢驗;實驗數據以均數±標準差(±s)表示;各組數據進行單因素方差分析，若組間差異有統計學意義，則進一步用Scheffe法進行兩兩比較，P＜0.05有統計學意義;組間均數比較采用Student－Newman－Keuls(SNK)法，P＜0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 大體觀察:術后大鼠出現右足下垂、右足趾并攏、展爪反射消失、拖曳行走等右后肢癱瘓表現。3周時可有較遲鈍的展爪反射形成，12周時反應靈敏，右后肢已自主活動，提示右足(趾)感覺、運動功能已恢復。肉眼觀察導管與周圍組織關系:術后6周A、B兩組均與周圍組織粘連，A組重于B組;8周A組與周圍組織粘連輕于B組，剪開導管可見再生的神經纖維和遠端已連接，A組導管開始降解吸收;12周A、B兩組導管內再生神經纖維全部長入遠端，神經連續性良好，A組神經纖維較B組粗大。兩組相比較:B組與周圍組織粘連及結締組織增生逐漸加重，從而使縫合口狹窄、神經再生通過障礙;而A組與周圍組織粘連逐漸減輕，以致12周時僅輕度粘連且較易剝離，導管已基本降解吸收完成，神經外膜光滑且縫合口通暢無明顯狹窄，再生神經恢復效果明顯優于B組。

2.2 神經電生理檢測:術后12周，均能誘發復合肌動作電位，A 組傳導速度為17.198±6.584m/s，最大振幅為5.796±2.09 mv;B 組傳導速度為 15.835±5.767m/s，最大振幅為 4.084±1.89 mv;C 組傳導速度為 84.723±8.121m/s，最大振幅為8.891±2.089 mv。A、B 兩組所記錄的神經傳導速度及最大振幅與C組相比有顯著統計學差異(P＜0.05)，但組間無統計學差異(P＞0.05)。說明導管組在術后12周時，均具有明顯促進坐骨神經傳導功能恢復的作用，但A組的檢測值明顯高于B組。

2.3 組織學觀察:術后12周，電鏡下觀察:A、B兩組遠近段再生神經纖維呈束狀均勻分布，有髓神經纖維軸突數量多且密集有序排列，但A組的髓鞘厚、發育較為完整，軸突數量較多，與C組相比較，P＜0.05，差異具有統計學意義，但A、B兩組間無統計學差異，P＞0.05，A組的有髓神經纖維軸數量及髓鞘的發育程 度明顯優于B組。

表1 術后12周電生理、再生神經形態學比較

3 討論

神經鞘瘤所致長段周圍神經缺損的治療，是臨床上治療的難題之一，大量實驗表明:硅膠管可明顯促進神經再生功能恢復，但易與周圍組織粘連形成瘢痕致神經假瘤而出現神經卡壓綜合征，且需二次手術取出，處理不當易再次發生神經損傷。隨著組織工程學的迅猛發展，研究發現，殼聚糖可支持許旺細胞生長，抑制成纖維細胞生長、減少膠原纖維的合成，減少創面出血，在組織表面可形成生物屏障作用，從而減少纖維組織再生，抑制腫瘤細胞生長、瘢痕形成，因而有利于神經的自身修復。本文通過殼聚糖神經導管橋接神經鞘瘤所致的長段周圍神經缺損的實驗研究:殼聚糖神經導管彈性較好、強度適中，易于術中操作，與神經斷端連接處無明顯粘連、水腫等神經假瘤現象。術后12周①肉眼觀察:導管已基本降解吸收完畢，神經斷端連接處可見神經干連續性已恢復，②電鏡觀察:再生神經纖維遠、近段呈束狀均勻分布，有髓神經纖維軸突數量較多且密集有序排列，髓鞘較厚、發育較完整，③神經電生理:均可記錄到復合肌動作電位，神經干平均傳導速度達對照組的20.3%，平均最大振幅達對照組的65.2%，表明再生神經電生理功能得到一定的恢復，但恢復水平仍有待提高，這可能與術后觀察時間較短、有髓神經直徑較細及神經發育不完全成熟等有關。

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