頭孢氨芐緩釋片含量測定方法的改進(jìn)

李傳響 劉紅 夏勇

頭孢氨芐緩釋片含量測定方法的改進(jìn)

李傳響 劉紅 夏勇

目的建立頭孢氨芐緩釋片含量測定最佳條件的高效液相色譜方法。方法 色譜柱為Wondasil C18(4.6 mm×250 mm，5μm)分析柱。以磷酸鹽緩沖液(pH6.8)-甲醇(80∶20)為流動(dòng)相，流速1.0 m l/min，檢測波長為260 nm。結(jié)果頭孢氨芐濃度在3.92～58.85μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好關(guān)系，平均回收率99.6%，RSD為1.1%(n=5)。結(jié)論本法準(zhǔn)確度高，專屬性強(qiáng)，操作簡便，可用于頭孢氨芐緩釋片的含量測定。

頭孢氨芐;緩釋片;含量測定

頭孢氨芐及其制劑臨床應(yīng)用相當(dāng)廣泛，為半合成的一代口服頭孢菌素，由其制成的制劑很多，關(guān)于頭孢氨芐的定量分析方法有很多［1］。2005年版藥典起，頭孢氨芐及其大部分制劑含量測定方法都改為高效液相色譜法［2］，而唯獨(dú)頭孢氨芐緩釋制劑至今還是沿用1996年版衛(wèi)生部頒標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的化學(xué)滴定方法［3］。滴定法雖然經(jīng)典，但是操作極為煩瑣、費(fèi)時(shí)，針對該制劑測量誤差較大，且不適應(yīng)現(xiàn)代化節(jié)奏的需要。為此筆者廣泛參閱有關(guān)資料［4-8］，不斷優(yōu)化含量測定方法，最終采取本文所述液相色譜法測定其含量，快速，簡便，準(zhǔn)確度高。

1 儀器與試藥

MODEL500型高效液相色譜儀，UV500型紫外檢測器，色譜柱：島津，Wondasil C18(4.6 ×250 mm，5 μm)，Mettler AB265-S型電子天平。頭孢氨芐對照品(中國藥品生物制品檢定所 批號(hào)：130408-201002含量為94.2%);頭孢氨芐緩釋片(市場抽驗(yàn))，磷酸二氫鉀，甲醇均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)性試驗(yàn) 色譜柱，島津，Wondasil C18(4.6×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液(pH6.8)-甲醇(80∶20);檢測波長：260 nm。流速為：1.0 ml/min，柱溫為室溫，進(jìn)樣量：20μl，理論板數(shù)以頭孢氨芐峰計(jì)算，應(yīng)不得低于1500。色譜圖見圖1。

圖1

2.2 溶液的制備［4］

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取頭孢氨芐對照品24.52 mg，置50 ml量瓶中，加磷酸鹽緩沖液(pH6.8)10 m l溶解，再加水稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液(0.4904 mg/ml)。精密量取上述儲(chǔ)備溶液10m l，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于頭孢氨芐50 mg)置100 m l量瓶中，加磷酸鹽緩沖液(pH6.8)10 m l溶解，再加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 ml，置50 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性范圍 精密量取對照品溶液1、2、3、5、10、15 ml，分別置25 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。精密量取20μl，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖，以濃度為橫座標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=18350.82X+1690.286，r=0.9999。結(jié)果表明，頭孢氨芐濃度在3.92～58.85μg/m l的范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度試驗(yàn) 精密量取對照品溶液20μl，注入高效液相色譜儀中，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖。結(jié)果RSD為0.3%。結(jié)果表明精密度良好。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批樣品5份，平行測定，含量平均值為96.3%，RSD為0.6%。

2.3.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 以同一批樣品，由5位不同人員，按本文所述方法依法測定，測得平均含量為96.0%，RSD為1.2%。結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性好。

2.3.5 回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品，精密加入頭孢氨芐對照品適量，按2.3.2項(xiàng)下方法試驗(yàn)，計(jì)算回收率，如表1。

3 討論

3.1 頭孢氨芐在水中微溶，在乙醇、三氯甲烷中不溶［2］，本文在反復(fù)試驗(yàn)過程中，比較不同的溶劑，不同pH值的緩沖液，以磷酸鹽緩沖液(pH6.8)10 ml溶解之后，效果最佳，再以水稀釋至刻度，有利于頭孢氨芐的溶出。針對緩釋制劑因輔料的特殊性［9］，導(dǎo)致頭孢氨芐在水中溶解更難，用本文的溶解方法很好地改善頭孢氨芐緩釋片的溶出行為，而且節(jié)約檢驗(yàn)成本，避免對環(huán)境影響，使含量定量更準(zhǔn)確。

3.2 查閱現(xiàn)有文獻(xiàn)資料，大多都以254nm作為測定波長，經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)頭孢氨芐在磷酸鹽緩沖液(pH6.8)的溶液中，最大吸收值在260nm。故本文選取260nm波長為測定波長，達(dá)到了很好的分離分析效果。

［1］喬明艷.頭孢氨芐定量分析方法概述.黑龍江醫(yī)藥，2010，23(4)：535-536.

［2］中國醫(yī)藥科技出版社.中國藥典2010年版二部，2010：208.

［3］中華人民共和國衛(wèi)生部.部標(biāo)準(zhǔn)(試行)WS-086(X-074)-96.

［4］董培.卡托普利緩釋片采用HPLC法含量測定結(jié)果分析.中國醫(yī)藥科學(xué)，2011，1(10)：104.

［5］馬越峰，蘇春勝，謝元德，等.克拉霉素緩釋片含量測定方法研究.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2005，22(Z1)：642-643.

［6］梁曉燕.高效液相色譜法測定頭孢氨芐緩釋片的含量.中國藥業(yè)，2010，19(17)：24-25.

［7］周希英.高效液相色譜法測定頭孢氨芐緩釋片的含量.中國藥事，2006，20(12)：751，758.

［8］王慶銀，蔡艷麗.HPLC測定頭孢氨芐緩釋片的含量.山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2006，44(6)：601.

［9］何海燕，曹德善，戈文蘭，等.頭孢氨芐緩釋片的研制.江蘇藥學(xué)與臨床研究，2002，10(1)：1-3.

Improvement of determ ination method of Cefalexin in Cefalexin Sustained-Releasts Tablets

LIChuanxiang，LIU Hong，XIAYong.
Anqing Institute for Food and Drug Control Anqing 246001，China

ObjectiveTo establish an HPLCmethod for the determinationmethod of Cefalexin in Cefalexin Sustained-Releasts Tablets.M ethodsThe column：Wondasil C18column(4.6mm×250mm，5μm)was adopted with themobile phase phosphate buffer(pH6.8)-methanol(80∶20).The flow rate was 1.0 ml/min.The detection wavelength was at 260nm.ResultsThe calibration curves were linear between 3.92 and 58.85μg/ml for Cefalexin.The recovery(n=5)wasmore than 99.6% ，RSD was 1.1%.ConclusionThe method is convenientand rapid with good specialization.It can be used for determination of Cefalexin in Cefalexin Sustained-Releasts Tablets.

Cefalexin;Sustained-Releasts Tablets;Determination

246001 安徽省安慶市食品藥品檢驗(yàn)所

表1 回收率試驗(yàn)測定結(jié)果(n=5)

注：*已知含量樣品取用量以相應(yīng)體積與濃度換算而得

已知含量樣品取用量(mg) 加入量(mg) 測得量(mg) 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)0.190 0.098 0.286 97.96 0.190 0.196 0.388 101.02 0.190 0.294 0.485 100.34 99.6 1.1 0.190 0.490 0.675 98.98 0.190 0.981 1.167 99.59

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于制備后0、1、2、4、8、12，24 h 進(jìn)樣 20 μl進(jìn)行測定平均含量為 95.3%，RSD為0.7%。結(jié)果表明本品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.7 樣品含量測定 分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計(jì)算含量，并與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)結(jié)果對照。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(%，n=4)

批號(hào) 本法測定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)方法測定結(jié)果110203 96.7 95.3 110415 95.8 94.2 110517 100.2 98.3 120105 97.6 95.9