孟魯司特鈉片微生物限度檢查方法的驗證

曲萍 仇麗霞 趙思俊

孟魯司特鈉片微生物限度檢查方法的驗證

曲萍 仇麗霞 趙思俊

目的建立孟魯司特鈉片的微生物限度檢查法，并對方法進行驗證。方法采用離心集菌加薄膜過濾法，沖洗量為500 ml。結果驗證試驗中各種菌的回收率均大于70%。結論該方法有效可行，可用于該品種的微生物限度檢查。

孟魯司特鈉片;微生物限度;方法驗證;薄膜過濾

孟魯司特鈉片是一種口服有效的選擇性白三烯受體拮抗劑，適用于預防哮喘。為了更好的控制產品質量，本文通過多次驗證試驗，建立了適宜的微生物限度檢查方法。

1 試驗材料

1.1 試驗樣品 孟魯司特鈉片(杭州默沙東制藥有限公司，規格10 mg)

1.2 試驗菌株 枯草芽孢桿菌［CMCC(B)63501］、金黃色葡萄球菌［CMCC(B)26003］、大腸埃希菌［CMCC(B)44102］、白色念珠菌［CMCC(F)98001］、黑曲霉［CMCC(F)98003］均購于中國食品藥品檢定研究院。

1.3 試藥 營養瓊脂培養基(120419)、營養肉湯培養基(120220)、玫瑰紅鈉瓊脂培養基(120410)、改良馬丁液體培養基(101118)、膽鹽乳糖培養基(20110705)、MUG(120310)均購于中國食品藥品檢定研究院。

2 細菌計數、霉菌和酵母菌計數方法的驗證

2.1 菌液制備 接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至10 ml營養肉湯中，35℃培養18 h，采用10倍遞增稀釋法，使菌數約為50～100 cfu/ml。接種白色念珠菌的新鮮培養物至10 ml改良馬丁培養基中，25℃培養24 h，采用10倍遞增稀釋法，使菌數約為50～100 cfu/ml。接種黑曲霉的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂培養基中，25℃培養5 d，加3～5 m l0.9%無菌氯化鈉溶液洗下霉菌孢子，采用10倍遞增稀釋法，使孢子數約為50～100 cfu/ml［1］。

2.2 方法

2.2.1 常規法 供試液制備：取本品10 g，加入pH7.0氯化鈉-蛋白胨無菌緩沖溶液(45℃)至100 ml，振搖，使成1∶10的供試液，備用。試驗組：取供試液1 ml于培養皿中，加入1 ml制備好的菌液，按《中國藥典》2010年版微生物限度菌落計數方法測定菌落數。菌液組：分別取制備好的菌液1 ml于培養皿中，計數。供試品對照組：取供試液1 ml于培養皿中，計數。進行3次獨立的平行試驗，分別計算回收率，測定結果見表1。

表1 回收率結果(常規法)

結果表明，白色念珠菌和黑曲霉的回收率高于70%，而金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌2種試驗菌的回收率低于70%，所以孟魯司特鈉片的霉菌和酵母菌計數可以采用常規法進行檢查，而細菌計數不可以采用常規法進行檢查。

2.2.2 薄膜過濾法 供試液制備：取供試品10 g，加入pH7.0氯化鈉-蛋白胨無菌緩沖溶液(45℃)至100 ml，溶解，使成1∶10的溶液。取10 ml，500轉/min離心3 min，取上清液，補至10 ml即得供試液。

試驗組：取供試液1 ml，注入50 m l 0.9%無菌氯化鈉溶液(45℃)中，薄膜過濾，沖洗液為pH7.0氯化鈉-蛋白胨無菌緩沖溶液(45℃)500 ml/膜，在最后一次沖洗液中加入試驗菌，過濾。取出濾膜，菌面朝上貼于營養瓊脂培養基上，35℃培養。按《中國藥典》2010年版微生物限度菌落計數方法測定菌落數。

菌液組：分別取制備好的菌液1 ml于培養皿中，按《中國藥典》2010年版微生物限度菌落計數方法測定菌落數。

供試品對照組：操作方法同試驗組，但不加試驗菌，按《中國藥典》2010年版微生物限度菌落計數方法測定樣品中的本底菌數。

稀釋劑對照組：取稀釋液1 m l，注入50 ml0.9%無菌氯化鈉溶液(45℃)中，以下操作同試驗組。

進行3次獨立的平行試驗，分別計算回收率，測定結果見表2。

表2 回收率結果(薄膜過濾法)

結果表明，在3次平行試驗中，采用薄膜過濾法檢驗孟魯司特鈉片，人工加入菌液，稀釋劑對照組的回收率均高于70%，說明稀釋劑對測定無干擾。試驗組回收率均高于70%，細菌計數可以采用薄膜過濾法進行檢驗。

3 控制菌檢查

供試液的制備：取本品10 g，加入pH7.0氯化鈉-蛋白胨無菌緩沖溶液(45℃)至100 ml，振搖，使成1：10的供試液，備用。

試驗組取供試液10ml加入膽鹽乳糖培養基100ml中，再加入10～100 cfu/ml大腸埃希菌1 ml，35℃培養24 h，取上述增菌液0.2 ml，接種至5 ml MUG培養基中培養5 h、24 h，在366 nm紫外線下觀察，同時用未接種的MUG培養基做本底對照。觀察后，沿培養管的管壁加入數滴靛基質指示液，觀察液面顏色。

陰性菌對照組：方法同試驗組，加入10～100 cfu/ml金黃色葡萄球菌1 m l代替大腸埃希菌。

結果：試驗組檢出大腸埃希菌，陰性菌對照組未檢出金黃色葡萄球菌。

4 討論

孟魯司特鈉片有較強的抑菌作用，進行微生物限度檢查時，細菌計數必須采用薄膜過濾法去除其抑菌作用，然后再進行計數檢查，霉菌和酵母菌計數可以直接采用常規法進行檢查，控制菌采用常規法進行檢查。

［1］國家藥典委員會.中國藥典(二部).北京：化學工業出版社，2010：附錄 107-116.

Validation ofm icrobial lim it tests of m ontelukast sodium tablets

QU Ping，QIU Li-xia，ZHAO Si-jun.ShanxiMedical University，Taiyuan 030001，China

ObjectiveTo provide amethod of themicrobial limit test formontelukast sodium tablets and carry out the verification of themethod.M ethodsCentrifuging and filteringmethod was used，and washing quantity was500 ml.ResultsTest recoveries were over 70% .ConclusionItwas proved that themethod was and reliable，and it can be used for themicrobial limit test formontelukast sodium tablets.

Montelukast sodium tablets;Microbial limit test;Validation of themethod;Membrane-filter

030001 山西醫科大學衛生統計學教研室(曲萍 仇麗霞);山西省食品藥品檢驗所(曲萍 趙思俊)

仇麗霞