蒙醫(yī)溫針對炎癥大鼠血清白介素和腫瘤壞死因子α含量的影響*

吳七柱 阿古拉 朝魯門 烏云格日樂 李玉棠 陳英松

（內蒙古醫(yī)學院，內蒙古 呼和浩特 010110）

細胞因子不僅可以激活免疫系統(tǒng)，而且對神經和內分泌系統(tǒng)也有重要的調節(jié)作用［1］。蒙醫(yī)溫針對免疫性疾病有較好的調節(jié)作用。尤其是對白細胞介素等細胞因子的調節(jié)作用顯著［2］。本實驗通過觀察蒙醫(yī)溫針對佐劑性關節(jié)炎大鼠白細胞介素-2（IL-2）、白細胞介素-4（IL-4）、白細胞介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）的影響，探討蒙醫(yī)溫針療法對免疫性疾病的作用機制，從而對臨床應用此療法提供初步科學依據。

1 材料與方法

1.1 動物與試劑 （1）健康雄性Wistar大鼠，清潔級，體質量180～200g，由內蒙古醫(yī)學院實驗動物中心提供。在適應性喂養(yǎng)前進行痛閾篩選，標準為痛閾測定在10s左右能引起縮腿反應或甩尾者用于實驗，凡痛閾值＞15s或＜7s者，表示動物反應遲鈍或過敏，剔去不用。（2）弗氏完全佐劑（CFA）為 Sigma 產品；IL-2、IL-4、IL-6（ELISA 法）、TNF-α（放射免疫法）試劑盒及試驗試劑，均購自上海綠鳥科技有限公司。MYL-Ⅰ型蒙醫(yī)療術溫針儀、銀針均由內蒙古元陽中蒙醫(yī)科技開發(fā)有限責任公司提供。

1.2 儀器 MYL-Ⅰ型蒙醫(yī)療術溫針儀：由內蒙古元陽中蒙醫(yī)科技有限責任公司提供；80-式離心沉淀機：上海手術器械廠；LC100高效液相色譜儀：上海荊和分析儀器有限公司。

1.3 動物及分組 將30只入選大鼠隨機分為3組，每組10只。正常組：不造模，不治療。模型組：大鼠右后足掌皮下注射CFA 0.1mL，造成佐劑性關節(jié)炎模型。正常組與模型組每日以與蒙醫(yī)溫針組相同的方式捆綁固定。溫針組：于造模當天，取大鼠蒙醫(yī)臟腑總穴（位于第三腰上凹正中）［3，用特制銀針斜刺后，接蒙醫(yī)療術溫針儀，電流強度100mA，溫度40℃，持續(xù)15min。3d治療1次，連續(xù)7次。

1.4 標本采集與檢測 末次治療24h后采集下腔靜脈血2mL，室溫血液自然凝固15～20min后，3000r/min離心10min，用移液器吸取上清，-20℃保存。采用酶聯(lián)免疫法吸附法（ELISA法）測定血清IL-2、IL-4、IL-6含量，采用放射免疫法測定TNF-α含量，按試劑盒說明書進行操作。

2 結 果

2.1 蒙醫(yī)溫針對炎癥大鼠（AA大鼠）血清IL-2、IL-4、IL-6含量的影響 見表1。模型組IL-2、IL-6含量與正常組比較，有顯著差異（P＜0.05或0.01）；溫針組IL-2、IL-6含量與正常組相當，與模型組有顯著差異（P＜0.01）。

表1 各組IL-2、IL-4、IL-6 含量比較（ng/mL，）

表1 各組IL-2、IL-4、IL-6 含量比較（ng/mL，）

與正常組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組 別 n IL-2 IL-4 IL-6正常組 10 4.647±0.288 6.462±0.421 80.558±6.964模型組 10 2.907±0.602* 5.057±0.771 172.120±23.612**溫針組 10 4.973±0.226△△ 5.073±0.819 99.907±5.229△△

2.2 蒙醫(yī)溫針對AA大鼠血清TNF-α含量的影響 見表2。模型組TNF-α含量顯著升高，與正常組及溫針組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），溫針組TNF-α含量與模型組相比有顯著差異（P＜0.04）。

表2 各組TNF-α 含量比較（ng/mL，）

表2 各組TNF-α 含量比較（ng/mL，）

組 別 n TNF-α正常組 10 7.8124±0.9151模型組 10 24.1813±3.2753**溫針組 10 11.4167±1.5089△

3 討 論

類風濕關節(jié)炎（RA）屬自身免疫性疾病，目前常用非甾體抗體炎藥及免疫抑制劑改善臨床癥狀，但由于副作用大，影響了治療效果［4-6］。而RA屬蒙醫(yī)“黃水病”范疇，其致病因素是“黃水”，據蒙醫(yī)文獻及臨床實踐證明，蒙醫(yī)溫針治療RA，療效顯著。在前期研究工作中，筆者觀察到蒙醫(yī)溫針能明顯抑制大鼠AA原發(fā)腫脹，提高其痛閾，同時調整T細胞亞群；并且在改善癥狀，緩解病情方面作用顯著［7-8］。

IL、TNF在RA中激活血管內皮細胞，增強內皮細胞黏附分子的表達，在關節(jié)炎時血液中的白細胞與黏附分子相互作用而被匯集到關節(jié)腔內，從而加強炎癥的細胞反應，同時激活結締組織細胞和多型核細胞產生小分子炎癥遞質加重炎癥反應，并減少破骨細胞糖蛋白的合成而導致骨和軟骨的破壞。TNF-α即腫瘤壞死因子超家族的一員，是RA發(fā)病中的重要因子之一，是體內存在的一種具有廣泛生物活性的細胞因子［9］，主要由單核細胞和巨噬細胞產生，具有多種生物活性，是細胞因子網絡瀑布啟動的起點［10］，可促進血管內皮細胞吸附白細胞，造成炎癥局部白細胞聚集，尤其是滑液中異常升高的TNF-α對RA的發(fā)病可能起主導作用。因此，抑制TNF-α的作用對控制RA的病情和改善預后非常重要［11］。IL-2是T淋巴細胞受抗原或有絲分裂原刺激后產生的一種細胞因子，廣泛的參與免疫應答的各種調節(jié)，是體內最強的T細胞生長因子，通過提高T細胞的數量和功能增強機體的免疫功能，同時還促進B細胞的生長和分化，促進抗體的生成［12-15］。IL-4在RA中的作用，一是促進巨噬細胞黏附到血管內皮細胞上，然后逸出血管，沿趨化梯度移動到炎癥部位；二是通過促進Th2細胞擴增，抑制Th1細胞介導的免疫應答，從而抑制RA患者體內異常的免疫反應。正常機體的IFN-γ能阻斷IL-4對B細胞的增殖作用，此外IFN-γ具有抑制B細胞的活化作用［16］。IL-6具有多種生物活性，RA患者血清、關節(jié)液或滑膜細胞培養(yǎng)液上清液中可檢測出非常高的IL-6活性，并且血清中IL-6活性與RA疾病的活動程度相關。IL-6在RA中的作用是增強IL-1和TNF的某些生物效應；IL-6還可能調節(jié)成纖維細胞的增殖［17］，放大對關節(jié)的損害作用，并誘導其他細胞因子如IL-1、IL-2的產生并發(fā)揮致病作用；IL-6異常表達和失調是RA的典型特征，是病程進展的重要病理因子［18］。

蒙醫(yī)理論認為RA不但與黃水有密切關系，還與三根 （赫依、希拉、巴達干）功能失調密切相關，尤其以赫依功能失調為甚。關節(jié)炎發(fā)生雖說以黃水為主要病因，但只要赫依參與其病情更加復雜。本實驗所取的臟腑總穴調節(jié)三根功能紊亂、提高免疫功能等方面有較好效果［19］。蒙醫(yī)溫針療法是用銀針在人體的固定穴位或其他部位給予針刺加溫灸刺激，達到預防和治療疾病目的的一種蒙醫(yī)傳統(tǒng)外治療術［20］，具有改善氣血循行、調節(jié)赫依巴達干的功能失調、提高機體免疫功能，激發(fā)調動和增強機體的抗病能力等作用［21］外，還具有抗炎、止痛、調節(jié)神經和內分泌系統(tǒng)作用［22］。各種黃水病及赫依性疾病正是蒙醫(yī)溫針治療的優(yōu)勢病種。

本實驗結果表明，取臟腑總穴溫針刺激能夠調解AA大鼠血中IL-2、IL-6和TNF-α的含量。提示蒙醫(yī)溫針療法可能通過調解AA大鼠血中IL-2、IL-6和TNF-α的含量，抑制AA大鼠骨與軟骨的破壞，減輕滑膜炎癥。此結果為治療RA提供了初步的實驗依據。本實驗中溫針對IL-4的調節(jié)作用不太明顯，其作用機理有待于進一步研究。

［1］陳英松，盧峻，吳七柱，等.艾灸對疲勞模型大鼠血清IL-6和IL-10 的影響［J］.山東中醫(yī)雜志，2008，27（248）：404-405.

［2］阿古拉，盧峻，陳英松，等.蒙醫(yī)溫針對疲勞大鼠作用的神經內分泌機制研究［J］.北京中醫(yī)藥大學學報，2008，31（9）：646.

［3］陳英松.蒙醫(yī)實驗療術學［M］.呼和浩特：內蒙古大學出版社，2008：105.

［4］李輝，李曉泓，張露芬.佐劑性關節(jié)炎大鼠血清IL-2、TNFα、Cort的變化及電針干預作用的研究［J］.針灸臨床雜志，2010，26（9）：61-64.

［5］郭紅云，江秀娟，萬強，等.消風Ⅱ號膠囊抗大鼠佐劑性關節(jié)炎實驗研究［J］.衛(wèi)生職業(yè)教育，2005，23（24）：88-89.

［6］周軍，方素萍，齊云.葛根湯對佐劑性關節(jié)炎大鼠關節(jié)液炎癥介質的影響［J］.中國實驗方劑雜志，2001，7（3）：2931.

［7］吳七柱，阿古拉，朝魯門，等.蒙醫(yī)溫針對炎癥大鼠抗炎鎮(zhèn)痛作用研究［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2010，16（11）：41-43.

［8］陳英松，阿古拉，朝魯門，等.蒙醫(yī)溫針炎抗鎮(zhèn)痛及免疫作用研究［J］.神經疾病與精神衛(wèi)生，2010，10（6）：592-594.

［9］茹穎，宋紅梅，李航，等.TNF-α促進樹突狀細胞分化成熟的實驗研究［J］.中國實驗血液學雜志，2010，18（5）：1265-1268.

［10］烏英別兢，安莉萍.當歸拈痛湯對佐劑性關節(jié)炎大鼠腫瘤壞死因子 α 的影響［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志，2010，19（10）：1187-1236.

［11］趙慧，顧立剛，陳小軍，等.桂枝芍藥知母湯對Ⅱ膠原誘導性關節(jié)炎大鼠血清腫瘤壞死因子、白細胞介素活性的影響［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2005，12（11）：27.

［12］許蘭芝，胡慶偉，冷平.佐劑性關節(jié)炎大鼠細胞因子和皮質醇水平與茜草總蒽醌的干預作用［J］.中國臨床康復，2006，10（3）：116-117.

［13］劉婷婷，金弘，高維濱.電針對慢性非細菌性前列腺炎模型大鼠的影響［J］.上海針灸雜志，2007，26（9）：40-42.

［14］閆明如，張露芬，張慧，等.針刺不同穴位對不同應激模型大鼠遲發(fā)反應期IL-2影響的實驗觀察［J］.北京中醫(yī)藥大學學報，2007，30（2）：136-140.

［15］陳鳳儀，肖柳英，潘競，等.益腎I方對實驗性佐劑性關節(jié)炎大鼠模型 TNF-α、IL-2 的實驗研究［J］.中藥材，2008，31（9）：1407-1409.

［16］Ruschpler P，Stiehl P.Shift in Th1 （IL-2 and IFN-gamma） and Th2（IL-10 and IL-4） cytokine mRNA balance within two new histological main-types of rheumatoid-arthritis（RA）［J］.Cell Mol Biol（Noisyle-grand），2002，48（3）：285-293.

［17］柏干蘋，方勇飛.細胞因子與類風濕性關節(jié)炎［J］.臨床內科雜志，2001，18（4）：257-259.

［18］侯麗萍，周曉莉，田永峰，等.通絡止痛膠囊對佐劑性關節(jié)炎大鼠血清 IL-1β、IL-6、TNF-α 的調節(jié)［J］.浙江中醫(yī)雜志 2009，44（2）：96-97.

［19］陳英松.蒙醫(yī)學——適宜技術及應用［M］.呼和浩特：內蒙古大學出版社，2011：87.

［20］陳英松，盧俊.蒙醫(yī)溫針對疲勞大鼠血清腫瘤壞死因子-α、促腎上腺皮質激素和皮質酮含量的影響［J］.針刺研究，2008，4（33）：258.

［21］阿古拉，陳英松.蒙醫(yī)溫針治療慢性疲勞綜合癥的臨床研究［J］.遼寧中醫(yī)藥大學學報，2006，9（5）：116-117.

［22］霍布仁.蒙醫(yī)溫針作用機理的初探［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2006，9（5）：76-77.