補陽還五湯對糖尿病大鼠主動脈PPAR-γ表達的影響*

李 陽徐 潔△ 王 芳 郭 偉 譚 燚 付金鳳

（1.湖北省武漢市中西醫結合醫院，湖北 武漢 430022；2.江漢大學醫學院，湖北 武漢 430056；3.湖北中醫藥大學，湖北 武漢 430065）

補陽還五湯具有益氣、活血、通絡之功效，臨床上常用于防治心腦血管意外及其后遺癥的治療［1］。研究表明，補陽還五湯能改善動脈粥樣硬化及糖尿病并血管病變，預防心腦血管急癥的發生。本研究旨在觀察補陽還五湯對糖尿病大鼠血脂及主動脈過氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR-γ）的影響。

1 材 料

1.1 動物 SPF級健康雄性Wistar大鼠，60只，體質量 （200±20）g，由湖北省防疫站提供。

1.2 藥物及試劑 補陽還五湯，中藥均購自湖北省中藥材公司，為免煎劑，使用前用蒸餾水配制成溶液，最終質量濃度為2g/mL。鹽酸二甲雙胍片為華北制藥集團制劑有限公司產品，批號0709705，臨用時以蒸餾水為溶劑制成混懸液，其終質量濃度為2mg/mL。鏈脲佐菌素（STZ，美國Sigma公司產品）臨用時以0.1mol/L，pH4.4檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液配成STZ溶液；血糖（中生北控生物科技有限公司）；膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、免疫熒光染色試劑。高脂高糖飼料，按蔗糖∶豬油∶奶粉∶雞蛋∶普通飼料=30∶20∶4∶2∶63 配置。

1.3 模型制備 大鼠適應性喂養1周后，隨機分為正常對照組（8只）和造模組（52只）。造模組大鼠禁食12h后，按30mg/kg體質量尾靜脈注射STZ溶液，用普通飼料喂養2周，高糖高脂飼料喂養1周，然后作OGTT試驗，血糖值＞16.7mmol/L以上確定為糖尿病大鼠［2-3］。

1.4 分組與給藥 篩選糖尿病大鼠共46只，隨機分為糖尿病模型組（DM組）12只，按10g/kg體質量灌服蒸餾水；二甲雙胍組（MF 組）12 只，按 0.75g/（kg·d）灌服二甲雙胍混懸液；補陽還五湯高劑量組（BH 組）11 只，按 22.5g/（kg·d）灌服補陽還五湯液；補陽還五湯低劑量組（BL 組）11 只，按 5.4g/（kg·d）灌服補陽還五湯液；均每日1次，連續6周，治療期間喂高脂高糖飼料。正常對照組（NR組）給予注射等量枸櫞酸緩沖液，以普通飼料喂養。

1.5 標本采集與檢測 大鼠禁食12h后，在戊巴比妥腹腔注射麻醉下行腹主動脈取血，離心后取血清保存于-70℃冰箱中。血糖采用葡萄糖氧化酶法；TC、TG采用酶學方法檢測；以上均采用全自動生化分析儀檢測。各實驗組在相對一致的位置（瓣膜邊緣處）截取主動脈根部動脈環部分測定PPAR-γ水平。PPAR-γ表達水平測定采用免疫熒光染色法，拍攝倍數及照相條件一致，采用IPP6.0圖像分析軟件，計算熒光面積率及平均光密度（熒光面積率=熒光陽性區面積/動脈截面的面積，平均熒光灰度值=熒光灰度/熒光陽性區面積）。

2 結 果

2.1 一般情況 造模成功后，DM大鼠出現典型的多飲、多尿、精神萎靡表現。NR組大鼠飲食、飲水及活動正常，反應靈敏，毛色光亮，體質量漸增。

2.2 補陽還五湯對糖尿病大鼠血糖、血脂的影響 見表1。與NR組相比，DM大鼠血糖、TC、TG均較NR組明顯升高（P＜0.01）。給予補陽還五湯、二甲雙胍干預后，血糖、TC、TG均較DM組降低，其中BH、MF組降低有明顯統計學差異（P＜0.05）。

2.3 補陽還五湯對糖尿病大鼠主動脈PPAR-γ表達的影響見表1、圖1。與NR組相比，DM大鼠主動脈PPAR-γ表達下降（P＜0.01）。給予補陽還五湯、二甲雙胍干預后，BH、MF組較DM組大鼠主動脈PPAR-γ表達明顯上調，差異具有統計學意義（P＜0.01）。

表1 各組大鼠血糖、血脂水平及PPAR-γ表達比較（）

表1 各組大鼠血糖、血脂水平及PPAR-γ表達比較（）

與 NR 組比較，*P＜0.01；與 DM 組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

平均熒光灰度值NR 組 8 5.74±1.74 1.34±0.53 1.38±0.25 12.77±2.38 98.22±13.3 DM 組 12 23.34±8.34* 3.31±0.75*3.02±1.457* 5.48±1.75* 43.45±16.5*BL 組 11 14.51±7.92△ 2.82±0.23 2.71±2.57 6.06±1.48* 48.40±15.24*BH 組 11 13.21±9.93△ 2.28±0.32△ 2.47±1.67△ 11.17±2.19△△ 74.52±14.40△△MF 組 12 9.16±7.59△△ 2.38±0.75△ 2.03±0.503△ 13.43±2.29△△ 83.19±15.31△△組 別 n 血糖（mmol/L）TC（mmol/L）TG（mmol/L）PPAR-γ表達面積率（%）

圖1 各組PPAR-γ水平表達熒光染色圖（×400倍）

3 討 論

補陽還五湯是王清任根據其氣虛血瘀理論，在《醫林改錯》創立的經典方劑，方以黃芪為君，生用、重用則力專而性走，周行全身，大補元氣之虛，而奏益氣行瘀之功；以歸尾為臣，活血以通血脈，祛瘀而不傷正；輕用桃仁、紅花、川芎、赤芍、地龍為佐使，以活血化瘀通絡。全方配伍嚴謹，氣血并顧，標本兼顧，具有益氣、活血、通絡之功效。既往研究表明補陽還五湯能減低血脂，減輕血管動脈粥樣硬化病變程度［4］。本研究也觀察到補陽還五湯高劑量組有降低糖尿病大鼠TC、TG作用，與既往研究一致。

PPARs為核受體超家族成員之一。其中，PPAR-γ在脂肪細胞中的表達最高，另外腎臟、肝臟和腸組織等也表達。其主要作用是調節體內糖脂代謝，增加組織對胰島素的敏感性。近幾年研究表明，在血管壁中的血管平滑肌細胞和內皮細胞中均有PPAR-γ表達，PPAR-γ還有保護血管作用。既往研究表明PPAR-γ激動劑具有抗血管重構作用，還可通過糾正糖尿病患者代謝異常間接保護血管［5］。細胞培養研究發現PPAR-γ受體激動劑可抑制平滑肌細胞增殖和遷移［6］。抗細胞增殖和遷移作用是抗血管重構作用的重要基礎，因此，激活PPAR-γ受體可能對調節糖脂代謝同時有對血管有保護作用。

有研究表明，補陽還五湯能上調糖尿病大鼠肝臟PPAR-γ的表達，從而改善胰島素抵抗［7］，但對血管中PPAR-γ表達影響少有報道。在本實驗中DM組大鼠主動脈PPAR-γ的表達明顯低于NR組，經治療后補陽還五湯組、二甲雙胍組PPAR-γ的表達明顯高于模型組。進一步表明補陽還五湯可能通過調節胰島素靶器官PPAR-γ表達上調，從而增強胰島素靶器官對胰島素的敏感性，調節糖脂代謝。補陽還五湯本身不具有降糖作用，但本研究中觀察到補陽還五湯組糖尿病大鼠血糖有不同程度降低，可能與其脂毒性降低及PPAR-γ表達增加有關。

本研究表明補陽還五湯調節糖尿病大鼠糖脂代謝、增加糖尿病大鼠血管PPAR-γ表達，為補陽還五湯在預防糖尿病血管病變中的應用進一步提供實驗依據。

［1］陳紅霞，莫秀云，郭友華，等.補陽還五湯配合康復訓練對氣虛血瘀證腦梗死患者運動功能及日常生活活動能力恢復的效果評估［J］.中國組織工程研究與臨床康復，2006，10（43）：37-39.

［2］劉永玉，毛良，莫啟忠.實驗性NIDDM大鼠模型［J］.中華內分泌代謝雜志，1990，6（2）：115-116.

［3］陸付耳，冷三華，屠慶年，等.黃連解毒湯與黃連素對2型糖尿病大鼠葡萄糖和脂質代謝影響的研究［J］.華中科技大學學報：醫學版，2002，31（6）：662-665.

［4］尚改萍，文志斌，何小凡，等.補陽還五湯抗家兔動脈粥樣硬化形成及機制［J］.中國動脈硬化雜志，2002，2（10）：112-113

［5］Bajaj M，Suraamornkul S，Piper P，et al.Decreased plasma adiponectin concentrations are closely related to hepatic fat content and hepatic insul in resistance in pioglitazone-treated type 2 diabeticpatients［J］.JClin Endocrinol Metab，2004，89（1）：200-206.

［6］Wakino S，Kintscher U，Kim S，et al.Peroxisome proliferator-activated receptor-γ ligands inhibit Rb phosphorylation and G1→S transition in vascular smooth muscle cells ［J］.J Biol Chem，2000，275 （29）：22435-22441.

［7］常庚，潘莉，王菊素，等.補陽還五湯對2型糖尿病大鼠模型PPARα/γ 表達的影響［J］.中國老年學雜志，2010，2（30）：358-359.