苦豆子藥材的質量標準研究Δ

馬玲，王漢卿，冷曉紅，賀凱，王英華#（.寧夏回族自治區藥品檢驗所，銀川75000；.寧夏醫科大學，銀川 750004；.寧夏職業技術學院，銀川 75000）

苦豆子（Sophora alopecuroides L.）為豆科槐屬植物，屬中旱生植物，根系發達，有極好的防沙固沙作用，同時又是重要的藥用植物資源，具有清熱解毒、止痢的功效，用于治療咽喉腫痛、肺熱咳嗽等癥[1～3]。其藥用部位為花期的干燥地上部分，稱為“苦豆草”，以及成熟的果實，稱為“苦豆子”。自20世紀70年代以來，已有學者以苦豆子為原料提取出了苦參堿、氧化苦參堿等成分，并制成了苦參素膠囊、婦炎栓等制劑。但各版《中國藥典》均未收載苦豆子藥材，也未見有關苦豆子藥材質量研究的報道。筆者參考有關文獻[4～8]，采用薄層色譜（TLC）法對苦豆子藥材進行定性鑒別，用高效液相色譜（HPLC）法測定藥材中氧化苦參堿和槐定堿的含量，為藥材的質量控制提供依據。

1 儀器與試藥

TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；HPLC儀，包括1100 LC色譜工作站、G1313A自動進樣器、G1316A柱溫箱、G1315B二極管陣列檢測器、G1311A四元泵、G1379A脫氣機（美國Agilent公司）；JU-1000超聲儀（杰恩普超聲設備有限公司）。

苦豆子藥材采于寧夏鹽池縣花馬池鎮等地，共10批，經寧夏回族自治區藥品檢驗所邢世瑞主任藥師鑒定為豆科槐屬植物苦豆子S.alopecuroides L.的干燥成熟果實。槐定堿、氧化苦參堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號分別為110805-2003、060780-2004）；乙腈、磷酸二氫鉀為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別

2.1.1 槐定堿的TLC鑒別 取10批藥材粉末各4 g，分別加濃氨試液浸潤12 h以上，加甲醇20 mL超聲（功率：100 W，頻率：40 kHz）提取40 min，濾過，濾液作為供試品溶液；另取槐定堿對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液。照TLC法[9]試驗，吸取上述2種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-乙酸乙酯（8∶3∶3）為展開劑，置氨蒸汽飽和的層析缸內，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液，日光下檢視。結果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。槐定堿的TLC見圖1。

2.1.2 氧化苦參堿的TLC鑒別 取氧化苦參堿對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液；以“2.1.1”項下供試品溶液作為本試驗的供試品溶液。照TLC法[9]試驗，吸取上述2種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（5∶0.6∶0.3）10 ℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液，日光下檢視。結果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。氧化苦參堿的TLC見圖2。

圖1 槐定堿的TLCFig 1 TLC of sophridine

圖2 氧化苦參堿的TLCFig 2 TCLof dxymatine

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：Waters X-Bridge C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：乙腈-0.05 mol·L－1的磷酸二氫鉀溶液（2.0 mL·L－1三乙胺）＝10∶90；檢測波長：205 nm；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：25℃。理論板數按氧化苦參堿色譜峰計算應不低于4000，槐定堿、氧化苦參堿和樣品中的其他組分色譜峰均達到了基線分離，槐定堿和氧化苦參堿與其相鄰色譜峰的分離度均＞1.5。色譜見圖3。

圖3 高效液相色譜圖Fig 3 HPLC chromatograms

2.2.2 混合對照品溶液的制備 取槐定堿、氧化苦參堿對照品各適量，加甲醇制成含槐定堿0.0871 mg·mL－1和含氧化苦參堿0.1794 mg·mL－1的溶液，作為混合對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末約0.5 g，精密稱定，置錐形瓶中，加10%NaOH浸潤12 h后，精密加入甲醇20 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率：250 W，頻率：33 kHz）40 min，放置至室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm的濾膜濾過，即得。

2.2.4 線性關系考察 精密量取槐定堿（0.1741 mg·mL－1）和氧化苦參堿（0.3587 mg·mL－1）的混合對照品溶液2、3、4、5、6、10 mL，分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進樣10 μL，按上述色譜條件測定。分別以槐定堿、氧化苦參堿進樣量（X，μg）為橫坐標，峰面積積分值（Y）為縱坐標，繪制標準曲線，得槐定堿、氧化苦參堿的回歸方程分別為Y＝－93.592+41.778X（r＝0.9997）、Y＝－265.525+40.354X（r＝0.9991）。結果表明，槐定堿、氧化苦參堿的進樣量分別在34.82～174.10、71.74～358.70 μg范圍內與各自峰面積積分值呈良好線性關系。

2.2.5 精密度試驗 精密吸取同一混合對照品溶液10 μL，按上述色譜條件重復進樣5次，測定峰面積。結果，槐定堿、氧化苦參堿峰面積積分值的RSD分別為0.8%、0.6%（n均為5），表明儀器精密度良好。

2.2.6 重復性試驗 精密稱取同一批樣品適量，共6份，分別按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定。結果，樣品中槐定堿的平均含量為0.58%，RSD＝2.6%（n＝6）；氧化苦參堿的平均含量為1.12%，RSD＝2.8%（n＝6），表明方法重復性良好。

2.2.7 穩定性試驗 精密吸取同一供試品溶液適量，按上述色譜條件分別于0、2、4、8、12、16、20 h進樣測定。結果，槐定堿、氧化苦參堿峰面積積分值的RSD分別為1.4%、1.9%（n均為7），表明供試品溶液在20 h內穩定。

2.2.8 加樣回收率試驗 取已知含量的苦豆子藥材適量，共6份，置錐形瓶中，加10%NaOH浸潤12 h后，分別精密加入混合對照品溶液和甲醇各適量至20 mL，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定，并計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果Tab 1 Results of recovery tests

2.2.9 樣品含量測定 分別取10批不同產地的樣品粉末約0.5 g，精密稱定，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定，用外標法計算槐定堿、氧化苦參堿含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（%，n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（%，n＝3）

3 討論

3.1 提取條件的選擇

筆者分別采用了（1）10%NaOH浸潤12 h以上后，加入甲醇20 mL超聲提取40 min；（2）10%NaOH浸潤12 h以上后，加入氯仿20 mL超聲提取40 min，濾過，精密量取濾液10 mL至蒸發皿中蒸干，用甲醇溶解并轉移至10 mL容量瓶中，濾過；（3）10%NaOH浸潤12 h以上后，加入65%乙醇20 mL超聲提取40 min等提取方法進行提取。結果，用（1）法得到的色譜峰數目多、面積大、分離效果好。

3.2 流動相的選擇

分別選擇了0.05 mol·L－1的磷酸二氫鉀-甲醇（83∶17）、甲醇-水-三乙胺（55∶45∶0.2）、甲醇-乙腈-0.02 mol·L－1的醋酸銨緩沖液（0.5 mL·L－1的三乙胺）（5∶19∶79）、乙腈-0.05 mol·L－1的磷酸二氫鉀溶液（2.0 mL·L－1的三乙胺）（10∶90）等流動相進行檢測。結果，以乙腈-0.05 mol·L－1的磷酸二氫鉀溶液（2.0 mL·L－1三乙胺）＝10∶90為流動相，樣品分離效果好，基線穩定。

3.3 檢測波長的選擇

分別取適宜濃度的2種生物堿的對照品溶液在190～400 nm波長范圍進行掃描。結果，2種生物堿均在205 nm波長處有最大吸收。

綜上，所建標準可用于苦豆子藥材的質量控制。

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