結直腸癌組織中運動相關蛋白1/CD9和ME491/CD63的表達*

季潤元，史恩溢，王永實，李小寧，趙玉芳，馮振卿

1)淮陰衛生高等職業技術學校;淮安市消化道腫瘤重點實驗室 淮安 223300 2)蘇州衛生職業技術學院病理教研室 蘇州 215009 3)淮安市腫瘤醫院病理科淮安 223200 4)南京醫科大學病理學系南京 210029

△男，1969年1月生，碩士，副教授，研究方向:腫瘤病理，E-mail:christ7777@163.com

結直腸癌組織中運動相關蛋白1/CD9和ME491/CD63的表達*

季潤元1)△，史恩溢2)，王永實1)，李小寧2)，趙玉芳3)，馮振卿4)

1)淮陰衛生高等職業技術學校;淮安市消化道腫瘤重點實驗室 淮安 223300 2)蘇州衛生職業技術學院病理教研室 蘇州 215009 3)淮安市腫瘤醫院病理科淮安 223200 4)南京醫科大學病理學系南京 210029

△男，1969年1月生，碩士，副教授，研究方向:腫瘤病理，E-mail:christ7777@163.com

結直腸癌;運動相關蛋白1/CD9;ME491/CD63

目的:研究結直腸癌組織中運動相關蛋白1(MRP1)/CD9和ME491/CD63的表達及其臨床意義。方法:應用組織芯片的免疫組織化學技術檢測239例結直腸癌組織中MRP1/CD9和ME491/CD63的表達。結果:MRP1/ CD9在結直腸癌組織中的表達與腫瘤的分化程度、Dukes分期、淋巴結轉移有關(χ2=8.930、7.430和5.857，P均＜0.05)，而與患者的性別、年齡、浸潤深度無關(χ2=1.800，0.014和0.096，P均＞0.05)。ME491/CD63的表達與結直腸癌臨床病理指標無關。結直腸癌組織中MRP1/CD9和ME491/CD63的表達呈正關聯(rP=0.311，P＜0.001)。結論:MRP1/CD9可作為結直腸癌的預后因子。結直腸癌組織中MRP1/CD9和ME491/CD63的表達呈正關聯。

跨膜4超家族(transmembrane 4 superfamily，TM4SF)是結構上屬于細胞膜糖蛋白的特殊家族，該家族中有5個成員即運動相關蛋白1(mobility related protein-1，MRP1)/CD9、黑色素瘤相關抗原ME491/CD63、KAI1/CD82、CD151和CD81，與細胞的運動、增殖和腫瘤細胞的轉移有關［1-2］。MRP1/ CD9的表達水平與腫瘤進展、侵襲和轉移密切相關，低表達的惡性腫瘤侵襲能力強，易發生轉移［2］。黑色素瘤相關抗原ME491在腫瘤早期進展過程中高度表達。CD63與血小板激活有關，是一種溶酶體糖蛋白，存在于多種類型細胞表面。該研究探討結直腸癌組織中MRP1/CD9和ME491/CD63的表達情況及其與臨床病理參數之間的關系，以期找到結直腸癌新的預后因子［2］。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集江蘇省淮安市腫瘤醫院2005年1月至2010年12月結直腸癌手術切除標本239例，男123例，女116例;年齡48～72(69.2±2.1)歲。病理分型均為腺癌，其中高分化34例、中分化160例、低分化45例。Dukes分期:A期10例、B期133例、C期73例、D期23例。所有患者均無腸癌家族遺傳史，術前均未接受過放化療。

1.2 組織芯片的構建 所有的腫瘤組織標本均經中性甲醛固定，常規石蠟包埋，4 μm連續切片，HE染色。觀察HE切片，確定具有代表性的病變部位后，應用自有專利技術的組織芯片構建儀(專利號200920350099.2)制備組織芯片。用構建儀在選取的組織蠟塊中穿取組織，直徑1.5 mm。應用自有的組織芯片制備系統(包括組織芯片包埋底模、組織芯片膠、組織芯片陣列模、一次性加取樣針及其配套使用的針芯和針帽、定位冷卻器以及植芯器等組成部分)依次按序操作，成功制成含有239例結直腸癌的組織芯片蠟塊，每個病例均含有2個原發灶腫瘤組織。用德國LEICA石蠟切片機連續切片，厚度為4 μm。

1.3 結直腸癌組織中MRP1/CD9和 ME491/ CD63表達的檢測 采用MaxVision兩步法，嚴格按照MaxVision染色試劑盒說明書進行操作。鼠抗人MRP1/CD9和ME491/CD63單克隆抗體購自美國Thermo公司，MaxVision試劑盒、DAB酶底物顯色試劑盒等購自福州邁新公司。結直腸癌組織芯片常規脫蠟水化，1 mmol/L EDTA(pH 8.0)水浴修復20 min。而后加MRP1/CD9或ME491/CD63一抗(稀釋50倍)，4℃冰箱過夜，第2天室溫平衡后，加MaxVision二抗培育30 min，DAB顯色，蘇木精復染。以PBS代替一抗作陰性對照。以細胞膜和(或)細胞質出現棕褐色顆粒者為MRP1/CD9或ME491/CD63陽性表達細胞。400倍光鏡下計數5個視野，陽性細胞＜25%為陰性，≥25%為陽性。

1.4 統計學處理 應用SPSS 13.0分析，不同臨床病理特征結直腸癌患者MRP1/CD9和ME491/CD63表達的比較應用χ2檢驗，MRP1/CD9和 ME491/ CD63表達之間的相關性采用 Pearson列聯系數。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 MRP1/CD9和ME491/CD63表達與結直腸癌臨床病理特征的關系 見表1。

表1 MRP1/CD9和ME491/CD63表達與結直腸癌臨床病理特征的關系 陽性例數(%)

圖1 MRP1/CD9(A)和ME491/CD63(B)在結直腸癌中的表達(MaxVision，×400)

2.2 結直腸癌組織中MRP1/CD9和 ME491/ CD63表達情況 見圖1。239例結直腸癌組織中MRP1/CD9陽性者188例，陰性者51例;ME491/ CD63陽性者209例，陰性者30例。MRP1/CD9和ME491/CD63在結直腸癌中的表達呈正關聯(rP= 0.311，P＜0.001)，見表2。

表2 結直腸癌組織中MRP1/CD9和ME491/CD63表達的關系 例

3 討論

在TM4SF家族中，MRP1/CD9是研究比較廣泛的成員之一。Radford等［3］在體外將MRP1/CD9的cDNA轉移至腫瘤細胞中，結果發現轉染MRP1/ CD9后腫瘤細胞的運動能力和生長都受到抑制。Powner等［4］也證實轉染MRP1/CD9 cDNA后的BL6鼠黑色素瘤細胞的轉移潛能比親代BL6細胞低。以上結果提示，MRP1/CD9能直接調節腫瘤細胞運動并影響細胞的生長。MRP1/CD9抑制腫瘤細胞運動增殖的作用不僅體現在細胞水平研究，而且在胃癌［5］、胃腸道間質腫瘤［6］、口腔鱗狀細胞癌［7］、食管癌［8］等許多實體腫瘤的研究中也得到了證實。Hashida等［9］檢測146例結直腸癌組織中 MRP1/ CD9的表達水平，發現MRP1/CD9陽性表達的患者總生存率明顯高于陰性表達者。該研究結果顯示，結直腸癌組織中MRP1/CD9表達與組織分化、淋巴結轉移有關，中、高分化和無淋巴結轉移組陽性表達率高;同時Dukes分期D期結直腸癌組織中MRP1/ CD9的陽性表達率下降。上述結果提示，MRP1/ CD9蛋白表達與結直腸癌的惡性生物學行為呈負關聯，表明MRP1/CD9表達可能成為評估結直腸癌預后的有用指標。

ME491抗原由237個氨基酸組成，有4個跨膜區，3個N-糖基化點［10］。ME491/CD63在黑色素瘤早期階段高表達，但在正常黑色素細胞中不表達，在黑色素瘤進展階段和轉移性黑色素瘤中低表達或不表達［3］。目前極少數文獻認為ME491/CD63的表達和其他腫瘤進展有關［11］。在作者的研究中，亦未能證明ME491/CD63的表達與結直腸癌轉移、分級、浸潤深度、Dukes分期有關。

有研究［12］報道MRP1/CD9的表達在激活的血小板表面和ME491/CD63相關，但實體腫瘤中未見兩者相關的報道［1］。該研究結果顯示，結直腸癌組織中MRP1/CD9和ME491/CD63的表達呈正關聯。

總之，對MRP1/CD9和ME491/CD63及其與腫瘤相關性的研究，將有助于進一步揭示腫瘤的轉移機制，找到抑制腫瘤轉移的靶點或預測腫瘤患者預后的指標。

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Expressions of MRP1/CD9 and ME491/CD63 in colorectal carcinoma tissue

JI Runyuan1)，SHI Enyi2)，WANG Yongshi1)，LI Xiaoning2)，ZHAO Yufang3)，FENG Zhenqing4)1)Huaiyin Advanced Vocational and Technical Hygiene School;Huai’an Key Lab of the Tumor of Digestive System，Huai’an 223300 2)Department of Pathology，Suzhou Health College，Suzhou 215009 3)Department of Pathology，Cancer Hospital of Huai’an City，Huai’an 223200 4)Department of Pathology，Nanjing Medical University，Nanjing 210029

colorectal carcinoma;mobility related protein-1/CD9;ME491/CD63

Aim:To study the expressions of mobility related protein-1(MRP1)/CD9 and ME491/CD63 in colorectal carcinoma tissue.Methods:Tissue microarray and immunohistochemistry were used to detect the expressions of MRP1/CD9 and ME491/CD63 in 239 cases of colorectal carcinoma.The correlations between MRP1/CD9 and ME491/CD63 expression as well as the clinical and pathological characteristics were analyzed.Results:The expression of MRP1/CD9 was closely related with the differentiated degree，Dukes stages，and lymph node metastasis(χ2=8.930，7.430，5.857;P＜0.05).And it had no relationship with the patients’sex，age，or the depth of infiltration(χ2=1.800，0.014，0.096，P＞0.05).No correlation was found between the expression of ME491/CD63 in colorectal carcinoma and its clinicopathological materials.Positive association was found between the expression of MRP1/CD9 and ME491/CD63(rP=0.311，P＜0.001).Conclusion: The expression of MRP1/CD9 is a prognostic factor of colorectal carcinoma.The expression of MRP1/CD9 significantly correlates with the expression of ME491/CD63.

R735.3

10.3969/j.issn.1671-6825.2012.06.011

*江蘇省衛生廳醫學科技發展基金資助項目 J201116

(2012-05-18收稿 責任編輯李沛寰)