新烏頭堿、烏頭堿與次烏頭堿在附子不同炮制法中含量變化的實驗研究

趙永堂

安徽省亳州市華佗中醫(yī)院，安徽亳州 236800

附子是臨床常用的急救類中藥材，性味辛、甘、大熱，有毒，功能為回陽救逆、補火助陽、散寒止痛，具有“回陽救逆第一品藥”之稱[1]，藥物分類學(xué)中屬于毛莨科植物烏頭Aconitum carmichaeli Debx.的子根加工品，臨床上多用其炮制后的產(chǎn)品。因為附子的炮制方法有很多種，加工工藝也各有不同，形成了附子飲片質(zhì)量參差不齊的現(xiàn)象，臨床應(yīng)用的安全性與有效性得不到保證。為了研究不同附子炮制方法對雙酯型生物堿含量的影響，筆者應(yīng)用建昌幫法、樟樹幫法與《中國藥典》2005年版方法炮制附子并進行比較，現(xiàn)報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器

色譜儀采用日本島津生產(chǎn)的LC高效系列液相儀，分光計采用日立的T系列紫外可見光光度計，色譜數(shù)據(jù)參考浙江大學(xué)色譜數(shù)據(jù)庫。

1.2 實驗材料

附子原料購自安徽金種子中藥材發(fā)展責(zé)任公司，經(jīng)我院藥劑科袁如柏（主管中藥師）鑒定為毛莨科植物烏頭的子根加工品；對照品為新烏頭堿、烏頭堿與次烏頭堿，均為中國藥品生物制品檢定所購入，純度均為分析純級別。

2 方法與結(jié)果

2.1 附子3種炮制法的具體操作

2.1.1 中國藥典法

附子洗凈后置入膽巴水5 d后，大火燒煮浸液至透心，取出，清水漂洗，縱切片，厚度約為0.6 cm，再取水浸，附子調(diào)色成深茶色，上火蒸至出現(xiàn)油面以及光澤后，文火烘干或曬干。

2.1.2 建昌幫法

將鹽附子浸泡于清水中直到附子中鹽分完全去除，取出附子洗凈，晾曬干后，將附子均勻地鋪在細糠灰上，然后在附子上面鋪一層干凈的生姜薄片，片上面鋪2張草紙，草紙上面再覆蓋一層干凈的細糠灰，覆蓋少許稻草以及糠殼。最后在4個角同時燃燒，直至糠燃燒盡，灰變冷，取出附子，用鍋再蒸10 h左右，曬至半干，縱向切薄片，自然曬干。

2.1.3 樟樹幫法

把鹽附子表面的粗皮用刀削凈，順序使用米泔水及清水漂洗，混入甘草、黑豆以及皂角，加水以小火慢煮，直至鍋水中央清澈為準(zhǔn)，隨后去除輔料，曬干約八成，密封如缸2 d，同時保持缸內(nèi)適當(dāng)適度，按4分切片，加入薯粉活水?dāng)噭颍? h放涼，直至切片面出現(xiàn)結(jié)晶體，小火烤干。

2.2 各種溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

取新烏頭堿、烏頭堿與次烏頭堿適量，精準(zhǔn)稱取，與甲醇混合，調(diào)制濃度分別為16.0，25.6，32.0μg/mL，制成對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備和色譜標(biāo)準(zhǔn)

3種方法制備的附子分別磨粉，混入濃氨水，再加入乙醚密閉，經(jīng)24 h后，由超聲過濾15 min，再以乙醚洗滌，除去渣滓，將慮洗液混合，揮干，使用前以微孔膜濾過，孔膜尺寸為0.45μm。選擇的色譜柱為XBP-C18柱（5μm，4.6 mm×250 mm）；流動色譜相選擇乙腈-磷酸鈉，濃度為20 mmol/L，流速控制在1.0 mL/min，檢測溫度設(shè)置為35℃，波長為235 nm。

2.3 結(jié)果

2.3.1 各種樣品中新烏頭堿、烏頭堿與次烏頭堿含量

各種樣品中新烏頭堿、烏頭堿與次烏頭堿含量測定結(jié)果見表1。

表1 樣品中新烏頭堿、烏頭堿與次烏頭堿含量結(jié)果（±s，μg/g）

表1 樣品中新烏頭堿、烏頭堿與次烏頭堿含量結(jié)果（±s，μg/g）

樣品 重量（g）新烏頭堿 次烏頭堿 烏頭堿生附子鹽附子煨附子黑順附子黑順片附子8 20 20 20 16 620.02±43.10 5.39±0.36 2.13±0.26 2.36±0.39 1.43±0.18 599.79±40.87 18.98±0.18 6.78±0.18 3.23±0.88 0 102.32±2.99 11.26±1.49 11.26±0.97 8.09±0.92 1.66±0.23

2.3.2 樣品含量線性關(guān)系、精密穩(wěn)定度和可重復(fù)性研究

2.3.2.1 線性關(guān)系考察 分別吸取對照品與甲醇混合液，其中對照品溶液分別為1、2、4、6、8、10 mL，按照樣品進量對峰面積進行回歸方程分析，其回歸方程分別為：新烏頭堿A=683.836X-218.28，r=0.999 9；烏頭堿：A=816.632X-520，r=0.999 9；次烏頭堿：A=653.136X-811.68，r=0.999 9。新烏頭堿在0.031～0.320μg，烏頭堿在0.0513～0.513μg，次烏頭堿在0.064 2～0.643 0μg線性關(guān)系良好。

2.3.2.2 精密穩(wěn)定度測定 精密穩(wěn)定度采取統(tǒng)一濃度下的多次檢測方法，以及24 h再次檢驗，記錄圖譜樣本RSD，結(jié)果表明其精密穩(wěn)定度良好。見表2。

表2 3種堿類精密穩(wěn)定度測試

2.3.2.3 可重復(fù)性和樣品回收率 取生附子樣品0.1 g共5份，按照上面方法調(diào)配溶液，測定3種堿類質(zhì)量分數(shù)及RSD；回收率測定依照前法取樣品6份調(diào)配溶液，進行一次比對，測定RSD，取平均值。見表3。

表3 樣品可重復(fù)性和樣品回收率

3 討論

眾所周知，附子中含有較強毒性的雙酯類烏頭堿，在炮制過程中要保證這種毒性的充分分解，在本實驗研究中筆者發(fā)現(xiàn)，火制法和水制法都能夠分解雙酯類烏頭堿，其中，水制法在毒性分解的同時，容易造成附子中的一部分有效成分流失掉，而炮、煨等火制法能夠防止有效成分的損失[2-3]。此次研究還表明，建昌幫煨制法保留的有效堿類含量最多。在實驗加工過程中，適當(dāng)加入了紅糖及植物油等物質(zhì)，進行色澤調(diào)配，從而使藥典法黑順片的回收率提高。

目前，《中國藥典》2005年版一部中規(guī)定了附子中烏頭堿含量的上限，而未規(guī)定雙酯型生物堿的最低含量，這導(dǎo)致市面上中藥附子飲片中的雙酯型生物堿含量普遍很低，且不同廠家相差很大。具有最強毒性的生附子，而同時其強心和耐缺氧的功效也是最強的[4]，但許多附子經(jīng)過炮制后，主要成分烏頭堿則會分解，從而產(chǎn)生烏頭原堿，雖然大大降低了對人體的毒性[5]，但同時強心功效也顯著降低，值得臨床注意。

有關(guān)研究指明，附子在炮制過程中有偏向過度的現(xiàn)象[6]，這在一定程度上會影響臨床療效。所以本文中的3種炮制方法的炮制品的在臨床功效方面仍然值得更進一步的研究。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：132.

[2]鄧雅瓊，劉榮華，邵峰.反相高效液相色譜法測定附子中烏頭堿等3種成分的含量[J].時珍國醫(yī)國藥，2009，20（5）：29-32.

[3]王兆基，關(guān)錫耀，徐樹棋，等.毒性中藥生川烏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中成藥，2010，28（5）：651-655.

[4]杜貴友，方文賢.有毒中藥現(xiàn)代研究與合理應(yīng)用[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：561.

[5]王瑞，劉芳，孫毅坤，等.不同附子炮制品中烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿含量的HPLC測定[J].藥物分析雜志，2010，26（10）：1362-1365.

[6]陳彥琳，杜杰，梁煥，等.道地藥材附子炮制加工規(guī)范化探討[J].中國現(xiàn)代中藥，2010，11（7）：43.