微藻葉綠素熒光技術在環境監測中的應用

姜恒，吳斌 ，閻冰，吳志強，邢永澤

1.桂林理工大學，廣西 桂林 541004

2.廣西紅樹林研究中心，廣西 北海 536000

葉綠素熒光技術是一種以光合作用理論為基礎，利用生物體內葉綠素研究和探測生物光合生理狀況及各種外界因子對其細微影響的新型生物活體測定和診斷技術。其具有測定快速、靈敏，對細胞無損傷的優點，是研究生物光合作用的理想方法［1］。

微藻是海洋的初級生產者，是海洋食物鏈的基礎，對于海洋生態的平衡和穩定具有不可替代的作用，光合作用是微藻最敏感的生理過程之一，環境因子的脅迫作用主要破壞光系統Ⅱ(PSⅡ)，而脅迫作用對PSⅡ的破壞可以通過葉綠素熒光參數的變化反映出來。目前主要是研究微藻在光照、溫度、pH、N、P、化學物質、重金屬等脅迫條件下葉綠素熒光參數的變化。

1 葉綠素熒光技術中常用的參數

F0指初始熒光(minimal fluorescence)，其大小主要取決于PSⅡ天線色素內的最初激子密度、天線色素之間以及天線色素到PSⅡ反應中心的激發能傳遞機率的結構狀態，因此這部分熒光強度與激發光的強度和葉綠素含量有關，是純物理過程，它與光合作用光反應無關。F指任意時間實際熒光產量(actual fluorescence intensity at any time)。Fm指最大熒光產量(maximal fluorescence)，是PSⅡ反應中心處于完全關閉時的熒光產量，Fm的變化反映PSⅡ的電子傳遞變化情況。Fv為可變熒光(variable fluorescence，Fv=Fm-F0)，反映 QA(特殊結合狀態的質醌)的還原情況。Fv/Fm和Fv/F0分別表示PSⅡ的最大光化學量子產量(optimal/maximal photochemical efficiency of PSⅡ in the dark)和 PSⅡ的潛在活性。Fv/Fm和Fv/F0下降表明，脅迫使PSⅡ反應中心受損，抑制光合作用的原初反應，阻礙光合電子傳遞的過程。ΦPSⅡ表示作用光存在時PSⅡ的實際光能轉化效率，ΦPSⅡ的降低，說明脅迫阻止藻細胞同化力(NADPH，ATP)的形成，從而影響對碳的固定與同化。rETR表示PSⅡ的相對電子傳遞速率(relative electron transport rate)，rETR下降表明脅迫使QA→QB(二級電子受體)的電子傳遞受到抑制。ETR代表相對光合電子傳遞速率(electronic transfer rate)。qP為光化學淬滅(photochemical quenches)，反映PSⅡ天線色素吸收的光能用于光化學電子傳遞的份額。qP下降表明電子由PSⅡ的氧化側向PSⅡ反應中心的傳遞受阻，用于進行光合作用的電子減少，以熱或其他形式耗散的光能增加。qN即非光化學淬滅(non-photochemical quenches)，又可以寫作NPQ，反映PSⅡ吸收的光能不能用于光合電子傳遞而以熱的形式耗散掉的光部分，qN上升表明卡爾文循環的活性受抑制的程度增大，PSⅡ的潛在熱耗散能力增強，能夠有效避免或減輕因PSⅡ吸收過多光能對光和機構的損傷。當其上升到一定值后下降說明正常生理功能受到嚴重傷害，對熱能的耗散能力喪失。Y為實際量子產量(actual quantum yield)。PSⅡ光化學有效量子產量(photochemical efficiency of PSⅡ in the light)用 Y'(Y'=Fv'/Fm')表示，代表激發能被開放的反應中心捕獲的效率，它定量了由于熱耗散的競爭作用而導致PSⅡ的光化學被限制的程度［2-3］。

2 環境因子對微藻葉綠素熒光的影響

2.1 光

目前光照對鹽生杜氏藻影響的研究比較多［4］，White等［5］將鹽生杜氏藻(Dunaliella salina)和巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)暴露于UVAR(紫外線A輻射)下，試驗表明其Fv/Fm顯著降低，PSⅡ光合電子傳遞效率部分損失，但是UVBR(紫外線B輻射)對其光合參數沒有顯著影響。Nilawati等［6］研究了紫外輻射對兩種海洋冷水性硅藻(Pseudonitzschia seriata和Nitzschia sp.)的影響，試驗表明，UVBR使這兩種藻的Fv/Fm降低，PSⅡ反應中心遭到破壞。李守淳等［7］研究發現，隨著UVB輻射時間的延長，南極小球藻(Chlorella vulgaris Antarctic strain)葉綠素熒光迅速下降。張麗霞等［8］在四種不同光照強度下培養銅綠微囊藻(Microcystic aeruginosa)，并運用葉綠素熒光儀進行測定，試驗表明，銅綠微囊藻生長和進行光合作用的最適光照為40 μE/(m2·s)，強光脅迫使銅綠微囊藻的 Fv/Fm顯著降低。

2.2 溫度

微藻光合作用對溫度比較敏感，高溫可使類囊體膜的結構發生變化，這種變化首先反映在F0的上升，F0是反映微藻溫度脅迫的重要指標。Sayed等［9］發現，當溫度為25～35℃時，小球藻(Chlorella vulgaris)的Fv/Fm、Fm和Fv/2均隨溫度的升高而增大，在35～40℃時達到最大值，隨后開始下降。黃仿等［10］研究了熱脅迫對角毛藻(Chaetoceras sp.)的影響，發現引起該藻F0驟升的溫度為49.5℃，當溫度升高至45℃時，Fv/Fm和Fv迅速下降，qN顯著增加。梁英等［11］研究發現，鹽生杜氏藻(Dunaliella salina)的 Fv/Fm、Fv'/Fm'、ΦPSⅡ、rETR 和 qP 都隨著溫度和時間的增加而明顯下降，qN呈先上升再下降的現象，在50℃下處理18 min后，各熒光參數均下降為 0。塔胞藻(Pyramimonas sp.)的 Fv/Fm、Fv'/Fm'、ΦPSⅡ、rETR和qP都隨溫度和時間的增加而下降，qN在35℃下隨著時間的延長逐漸降低，在20 min時下降到0，在40℃下10 min后 qN變為0，但60 min時又升到0.48。45℃下處理18 min后，各熒光參數均下降為0。梁英等［12］通過研究發現，等鞭金球藻3011(Isochrysis galbana MACC/H59)在 35，40和45℃下處理不同時間Fv/Fm、Fv/F0、ΦPSⅡ、rETR和qP都有不同程度的下降，且隨處理時間的延長和處理溫度的升高而下降，處理時間越長、處理溫度越高，下降幅度越大。而qN是先上升到最大值，然后降低。球等鞭金藻8701(Isochrysis galbana MACC/H60)在35，40和45℃下處理不同時間Fv/Fm、Fv/F0、ΦPSⅡ和rETR都有不同程度的下降，且隨著溫度的升高，時間的延長，下降幅度逐步增大，而qP和qN表現為先上升后下降。韓志國等［13］研究發現，纖細角刺藻(Chaetoceros gracilis)在適宜的鹽度下隨溫度的升高Fv/Fm先有輕微的上升，隨后開始逐漸下降。在兩種鹽度下F0均隨溫度的升高而升高。小球藻(Chlorella minutissima)在適宜的鹽度下隨溫度的逐漸升高，Fv/Fm逐漸降低;而角刺藻中，出現Fv/Fm輕微升高的現象，并在中等溫度(35和40℃)下緩慢降低，在高溫(45和50℃)下急劇降低。兩種鹽度下小球藻的F0亦隨溫度的升高而逐漸上升。

2.3 pH

水體pH是一個重要的生態因子，藻類的光合作用與水體的pH有著密切的關系，每種藻類都有它自身適合的pH范圍，改變pH會影響藻類的光合作用，使藻類生長發生變化。大多數藻類適宜在中性或弱堿性水中生活。有研究表明，酸化水體中藻類的生長潛力微弱［14］。王銘等［15］研究發現，雨生紅球藻(Haematococcus pluvialis CG-l)在pH為6.0～7.5時，Fv/Fm、Fv/F0、ΦPSⅡ和 ETR 隨 pH 升高而增大，pH為7.5時達到最大值，pH超過7.5時，Fv/Fm和Fv/F0明顯下降，而ΦPSⅡ和ETR的下降趨勢不明顯。李艷紅等［16］發現當pH為6.0～7.0時，銅綠微囊藻(Microcystic aeruginosa FACHB-496)葉綠素熒光參數 Y、Y'、ΦPSⅡ、ETR和 qP逐漸減小，特別是pH為6.0時，其減小的趨勢更明顯。當pH為8.0～10.0 時，Y、Y'、ΦPSⅡ、ETR 和 qP 逐漸增加。

2.4 氮、磷

氮、磷是微藻生長必不可少的重要因子，氮、磷的缺乏以及氮、磷比的失衡都能限制微藻的生長。尹翠玲等［17］在5種氮濃度的培養液中培養球等鞭金藻3011(Isochrysis galbana MACC/H59)和球等鞭金藻8701(Isochrysis galbana MACC/H60)，研究葉綠素熒光參數的變化，發現球等鞭金藻3011的Fv/Fm隨著起始氮濃度的增加而增加，在7040 μmol/L時達到最大值;球等鞭金藻8701的Fv/Fm隨著起始氮濃度的增加而增加，在440 μmol/L時達到最大值，其后隨氮濃度的增加其上述指標反而下降。梁英等［18］將綠色巴夫藻(Pavloca viridis)在不同氮濃度的培養基中進行培養發現，各濃度下的Fv/Fm、ΦPSⅡ和ETR總體呈先上升后下降的趨勢，而qN和NPQ總體呈先下降后上升的趨勢。在氮濃度為880 μmol/L時，上述各值顯著高于其他濃度。尹翠玲等［19］將鹽生杜氏藻(Dunaliella salina)和纖細角毛藻(Chaetoceros gracilis)在不同氮濃度的培養基中進行培養發現，兩種微藻的Fv/Fm均隨著起始氮濃度的增加而增加，在1760 μmol/L時達到最大值，其后隨著起始氮濃度的增加，上述指標反而下降。

宋麗娜等［20］在不同濃度的磷溶液中培養海洋小球藻(Clllorella sp.)發現，Fv/Fm、Fv/F0、ΦPSⅡ和ETR均先升后降，并表現出低磷組(3.62 μmol/L)顯著低于其他各組，高磷組(434.52 μmol/L)一直處在較高水平。尹翠玲等［21］在不同濃度的磷溶液中培養鹽生杜氏藻(Dunaliella salina)和纖細角毛藻(Chaetoceros gracilis)，運用葉綠素熒光技術進行測量發現，鹽生杜氏藻的Fv/Fm隨著起始磷濃度的增加而增加，在290.4 μmol/L處達到最大值。纖細角毛藻的Fv/Fm在18.15 μmol/L處達到最大值，而后隨著磷濃度的繼續升高其值反而降低。梁英等［22］研究了小球藻(Chlorella sp.)在不同磷濃度培養其葉綠素熒光參數的變化發現，Fv/Fm、ΦPSⅡ、ETR和qP隨著起始磷濃度的增大而增大，在磷濃度為36.3 μmol/L達到最大，繼續加磷瞬時熒光不斷下降，PSⅡ出現瞬間的上升后恢復至原初狀態，qP和NPQ則不斷上升。Lippemeier等［23］研究了微小亞歷山大藻(Alexandrium minutum)在磷脅迫下的變化，在磷鹽缺少的情況下，ΔF/Fm'前5天的變化不明顯，從第6天開始下降，F和Fm'則顯著升高。

2.5 化學物質

近年來在各種化學物質對藻類葉綠素熒光影響研究方面主要有:Miriam等［24］通過研究集胞藻(Synechocystis sp.PCC 6803)在5 mmol/L 的 NH4Cl，并在淬火光抑制下暴露12 min，發現Y下降至0。Nils等［25］將眼蟲藻(Euglena gracilis)和萊茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)在不同濃度的草木灰溶液中培養發現，眼蟲藻在10和12.5 g/L時rETR發生劇烈的變化，NPQ表現出增長;萊茵衣藻的rETR不受抑制，反而表現出促進作用，NPQ急劇增長。兩種藻的 Fv/Fm、qP與 rETR的趨勢相似。何藝等［26］研究披針舟形藻(Navicula lanceolata)在不同濃度的熒蒽下葉綠素熒光參數的變化，試驗表明，熒蒽對Y、ETR和qP等參數有顯著促進作用，并且隨著濃度的升高，促進作用逐步增大;但不同濃度的熒蒽對Fv/Fm和NPQ無顯著影響。楊慧麗等［27］通過在不同濃度的鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)培養三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)，對其葉綠素熒光參數進行測量發現，隨著DBP暴露濃度的升高，Fv/Fm、Fv/F0、Y和ETR均下降。但與對照組(丙酮)相比，低濃度處理組(≤4 mg/L)各指標下降不明顯，而5 mg/L的試驗組在脅迫12 h后，Fv/Fm、Fv/F0、Y和ETR逐漸上升，其參數值甚至超過其他處理組。劉雷等［28］通過在不同濃度的十二烷基苯磺酸鈉(LAS)下培養銅綠微囊藻(Microcystis aeruginosa)，并對葉綠素熒光參數進行測定發現，小于0.05 mg/L的LAS對該藻未產生脅迫作用，反而能提高PSⅡ的ΦPSⅡ、qP和rETR，從而促進光合作用;在10 mg/L時Y、Y'波動較大，ΦPSⅡ、qP和rETR急劇下降后回升，qN 和 NPQ 一直下降，直至為0。Ruan等［29］在不同濃度的草甘膦下培養藍藻葛仙米(Nostoc sphaeroides)，并測得葉綠素a濃度和Fv/Fm在最高濃度組(0.6 mmol/L)4 d后開始受到影響。冉春秋等［30-32］在不同濃度的解偶聯劑羰基氰化物間氯苯腙(CCCP)下培養海洋亞心型扁藻(Platymonas subcordiformis)、萊茵衣藻(Creinhardtii reinhardtii)發現，在光照期間PSⅡ光化學活性都降低，且CCCP的濃度越高對藻細胞PSⅡ光化學活性的抑制作用越明顯，一定濃度的藻細胞具有耐受CCCP抑制PSⅡ光化學活性的能力。Anita等［33］通過研究Thalassiosira weissflogii、Emiliania huxleyi、Tetraselmis sp.、Flagellate Japonicasiz四種藻在不同濃度的Irgarol? 1051(一種海洋防污損涂料添加劑)下的培養，發現Y'的變化與藻的生長速度一致，表現為隨著濃度的增加而變小。李卓娜等［34］用濃度為0.1，1.0 和2.5 μg/L 的2，2'，4，4'-四溴聯苯醚(BDE-47)處理海水小球藻(Chlorella autotrophica)，在8 h后的熒光參數與對照組(0 μg/L)比較如表1所示。

表1 2，2'，4，4'-四溴聯苯醚(BDE-47)處理海水小球藻試驗組與對照組(BDE-47濃度為0)葉綠素熒光參數的比較Table 1 The chlorophyll fluorescence parameters comparison of the experimental group of Chlorella autotrophica processing by BDE-47 with the control group(BDE-47 concentration is 0)

由表1可見，在不同BDE-47濃度下，小球藻Fv/Fm與對照組無顯著性差異;Fv/F0、ΦPSⅡ和 rETR在BDE-47濃度為0.1和2.5 μg/L時測定值均顯著高于同期的對照組水平，而在1.0 μg/L時與對照組無顯著差異;qP表現為與對照組無顯著差異。

表2為用0.1，1.0和2.5 μg/L的BDE-47處理赤潮異彎藻(Heterosigam akashiwo)24，48和72 h后，熒光參數與對照組(0 μg/L)的變化［34］。從表2可以看出，赤潮異彎藻在BDE-47濃度為0.1 μg/L下暴露培養24 h，其 Fv/Fm、Fv/F0、ΦPSⅡ和 rETR 顯著高于對照組，而qP表現為與對照組無顯著差異;暴露培養48 h各參數都顯著高于對照組;暴露培養72 h各參數與對照組無顯著差異。在BDE-47濃度為1.0 μg/L下暴露培養24 h，除Fv/Fm顯著高于對照組，其余各參數均與對照組無顯著差異;暴露培養48 h各參數都顯著高于對照組;暴露培養72 h除qP與對照組無顯著差異外，其余參數都顯著高于對照組。在BDE-47濃度為2.5 μg/L下暴露培養24 h除Fv/Fm與對照組無關外其余各參數都與對照組無顯著差異;暴露培養48 h各參數顯著高于對照組;暴露培養72 h除qP與對照組無顯著差異外，其余參數都顯著高于對照組。

表2 2，2'，4，4'-四溴聯苯醚(BDE-47)赤潮異彎藻試驗組與對照組(BDE-47濃度為0)葉綠素熒光參數的比較Table 2 The chlorophyll fluorescence parameters comparison of the experimental group of Heterosigam akashiwo processing by BDE-47 with the control group(BDE-47 concentration is 0)

2.6 重金屬

隨著現代社會經濟的發展，重金屬污染問題越來越嚴重，對于重金屬的研究也越來越重視，其中重金屬對于藻類熒光的影響研究也頗多。Mallick等［35］運用葉綠素熒光技術研究重金屬 Cu，Cr，Ni，Cd和Zn對斜生柵藻(Scenedesmus obliqnus)的影響發現，在12 h內，這5種重金屬離子均使F0升高，Fm下降，Fv/Fm下降，qP下降和 qN上升，qN/2下降，F0/Fv顯著上升。王帥等［36］研究了在不同Cd2+濃度下培養綠色巴夫藻(Pavlova viridis sp.MACC/H61)等6種藻類，并對葉綠素熒光參數Fv/Fm、Fv/F0、ΦPSⅡ、rETR、細胞密度和葉綠素相對含量進行了測定，發現各種葉綠素熒光參數與Cd2+濃度呈顯著的負相關，均隨著Cd2+濃度的增加而降低。李濤等［37］在 6種 Fe3+濃度下培養雨生紅球藻(Haeamatococcus pluvialis)，并對 F0、Fv/Fm、Fv/F0、ΦPSⅡ、qP和qN進行了測定，發現在低濃度Fe3+(1.79 μmol/L)和高濃度 Fe3+(71.6 μmol/L)下 Fv/Fm、Fv/F0、ΦPSⅡ和 qP均明顯下降，而 F0和 qN 在兩種濃度下都上升。陳雷等［38］在不同Cu2+濃度不同時間下培養斜生柵藻(Scendesmus obliquus)，并對Fv/Fm、Fv/F0、ΦPSⅡ、rETR、葉綠素 a、葉綠素 b 及胡蘿卜素含量等進行了測量，發現在高濃度Cu2+(20 ～100 μmol/L)下，Fv/Fm、Fv/F0、ΦPSⅡ和 rETR 等參數隨著脅迫時間延長，數值下降幅度顯著，葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素含量也明顯下降。低濃度Cu2+(0～10 μmol/L)下，上述參數變化不顯著。簡建波等［39］研究不同濃度 Cu2+暴露對三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)的影響發現，Y、Fv/Fm對Cu2+非常敏感，它們均隨Cu2+濃度的升高而顯著下降。曹春暉等［40］運用葉綠素熒光技術研究Mn對米氏凱倫藻(Karenia mikinotoi MACC/D23)的影響發現，當Mn濃度為10-12～10-18mol/L時，Fv/Fm、Fv/F0、ΦPSⅡ和rETR在第3～9天隨著起始Mn濃度的增加而升高，Fv/Fm和Fv/F0在第2～7天隨培養時間的延長而增加，qP在整個培養周期內隨Mn濃度升高呈下降趨勢，qN則呈先下降后上升趨勢。王山衫等［41］在不同Zn2+濃度下培養固氮魚腥藻(Anabaena azotica Ley)，并對葉綠素熒光參數Fv/Fm進行了測定發現，隨著Zn2+濃度的升高，Fv/Fm降低，當 Zn2+濃度為 1.0 μmo/L時，Fv/Fm達到最高值。Ivorra 等［42］研 究 了 Zn2+對微小異極藻(Gomphonema parvulum)的影響，在富含 Zn2+(60000 μg/L)的培養液中處理5 h后，其F0和Y顯著下降。Lu［43］研究發現，Hg2+對藍藻有急性毒性作用，Fv/Fm、Fv'/Fm'、ΦPSⅡ、qP 和 qN 隨 Hg2+濃度的升高而逐漸下降。

3 展望

微藻是水環境中的第一營養水平，對外界環境異常敏感，對抑制光合作用的環境因子都能夠做出快速、準確的反應。而這些變化又可以通過先進的葉綠素熒光技術，用熒光參數準確反映出來。利用該特點可以進一步運用于:1)建立一種以微藻光合作用，葉綠素熒光技術為基礎的環境監測標準，環境預警機制;2)進一步拓展其研究領域，探討葉綠素熒光技術在浮游植物對環境污染反應的監測、水體中營養鹽限制情況的檢測、赤潮(或水華)的檢測以及赤潮(或水華)的發生機理等研究中的應用。但是，縱觀上述對微藻葉綠素熒光參數的研究進展，既往的研究主要在環境因子對微藻葉綠素熒光影響的理論層面，對微藻葉綠素熒光參數變化的深層次含義研究挖掘不夠，尤其是對于研究葉綠素熒光參數與環境因子之間的特異性響應方面還有待進一步挖掘。同時研究大多局限于在單一的環境因子影響下進行、沒有表現自然環境的特性，因此要進一步模擬現實環境，擴展研究中環境因子的范圍(如生物、冷卻水、輻射等)，并進行多種環境因子的疊加、交替試驗。隨著葉綠素熒光理論研究和測定技術的進一步發展，葉綠素熒光分析技術必將會在微藻的研究中起著越來越重要的作用，為建立基于微藻葉綠素熒光技術的環境監測方法和標準提供條件。

［1］趙會杰，鄒奇，余振文.葉綠素熒光分析技術及其在植物光合機理研究中的應用［J］.河南農業大學學報，2000，34(3):248-251.

［2］張守仁.葉綠素熒光動力學參數的意義及討論［J］.植物學通報，1999，16(4):444-448.

［3］van KOOTEN O，SNEL J F H.The use of chlorophyll fluorescence nomenclature in plant stress physiology［J］.Photosynth Res，1990，25:147-150.

［4］梁英，馮力霞，尹翠玲，等.葉綠素熒光技術在微藻環境脅迫研究中的應用現狀及前景［J］.研究綜述，2007，31(1):71-76.

［5］WHITE A L，JEHNKE L S，ANDREA L W，et al.Contrasting effects of UV-A and UV-B on photosynthesis and photoprotection of-carotene in two dunaliella spp.［J］.Plant Cell Physiol，2002，43(8):877-884.

［6］NILAWATI J，CIREENBERG B M，SMITH R E H.Influence of ultraviolet radiation on growth and photosynthesis of two cold ocean diatoms［J］.J Phycol，1997，33(suppl 2):215-224.

［7］李守淳，孫麗.UV-B增強對南極小球藻光合活性和抗氧化酶的影響［J］.安徽農業科學，2010(36):20513-20515.

［8］張麗霞，朱濤，張雅婷，等.不同光強對銅綠微囊藻生長及葉綠素熒光動力學的影響［J］.信陽師范學院學報:自然科學版，2009，22(1):63-65.

［9］SAYED O H，ELSHAHED A M.Photosynthesis and circadian patterns in Chlorella vulgaris(Chlorophyta)in response to growth temperature［J］.Algoloie，2000，21(3):283-290.

［10］黃仿，武寶玕，陳貽竹.角毛藻熱脅迫機理的活體調制葉綠素熒光研究［J］.暨南大學學報:自然科學版，1996，17(3):80-85.

［11］梁英，馮力霞，田傳遠，等.高溫脅迫對鹽藻和塔胞藻葉綠素熒光動力學的影響［J］.中國水產科學，2007，14(6):961-968.

［12］梁英，馮力霞，田傳遠.高溫脅迫對球等鞭金藻3011和8701葉綠素熒光特性的影響［J］.水產學報，2009，33(1):37-44.

［13］韓志國，武寶玕.環境脅迫(鹽脅，熱脅，滲透脅迫)對兩種海洋浮游植物的影響［D］.廣州:暨南大學，2002:17-19.

［14］況琪軍，夏宜錚，坂本充.酸化水體中的藻類研究［J］.中國環境科學，1994，14(3):350-354.

［15］王銘.李濤，李愛芬.光照、溫度和pH對雨生紅球藻光合特性的影響［J］.水生生物學報，2009，33(3):400-405.

［16］李艷紅.環境因子對銅綠微囊藻生長和光合作用的影響［D］.南昌:南昌大學，2009:45-46.

［17］尹翠玲，梁英，張秋豐.氮濃度對球等鞭金藻3011和8701葉綠素熒光特性及生長的影響［J］.水產科學，2008，27(1):27-31.

［18］梁英，金月梅，田傳遠.氮磷濃度對綠色巴夫藻生長及葉綠素熒光參數的影響［J］.海洋湖沼通報，2008(1):120-128.

［19］尹翠玲，梁英，馮力霞，等.氮濃度對鹽生杜氏藻和纖細角毛藻葉綠素熒光特性及生長的影響［J］.海洋湖沼通報，2007(1):101-110.

［20］宋麗娜，鄭曉宇，顧詠潔，等.磷濃度對海洋小球藻葉綠素熒光及生長的影響［J］.環境污染與防治，2010，32(8):20-24.

［21］尹翠玲，梁英，張秋豐.磷濃度對鹽生杜氏藻和纖細角毛藻葉綠素熒光特性及生長的影響［J］.水產科學，2007，26(3):154-159.

［22］梁英，金月梅，田傳遠.磷限制及恢復對小球藻葉綠素熒光特性的影響［J］.南方水產，2008，4(4):1-7.

［23］ LIPPEMEIER S，FRAMPTON D M F，BLACKBURN S I ，et al.Influence of phosphorus limitation on toxicity and photosynthesis of Alexandrium minutum(Dinophynece)monitored by in-line detection of variable chlorophyll fluorescence［J］.Physiol，2003，38:320-331.

［24］MIRIAM D，NICOLE K，ALFRED B，et al.Ammonia triggers photodamage of photosystem Ⅱ in the Cyanobacterium Synechocystis sp.strain PCC 6803［J］.Plant Physiol，2008，147(11):206-215.

［25］NILS G A，EKELUND K，ANDREAS A.Changes in chlorophyll a fluorescence in Euglena gracilis and Chlamydomonas reinhardtii after exposure to wood-ash［J］.Environmental and Experimental Botany，2007，59:92-98.

［26］何藝，陳歡，楊劍，等.熒蒽對披針舟形藻的生長及葉綠素熒光特性影響［J］.環境科學與技術，2011，34(4):10-17.

［27］楊慧麗，段舜山.鄰苯二甲酸二丁酯對三角褐指藻的生態毒性效應［J］.生態環境學報，2010，19(9):2155-2159.

［28］劉雷，陳蓮花，劉浩，等.十二烷基苯磺酸鈉對銅綠微囊藻光合作用的影響［J］.日用化學工業，2008，38(5):289-293.

［29］RUAN Z X，MURRAY T B.Effects of acute glyphosate exposure on the grow and physiology of Nostoc sphaeroides:an edible cyanobacter ium of paddy rice fields［J］.Acta Hydrobiologica Sinica，2008，32(4):462-468.

［30］冉春秋，張衛，虞星炬，等.硫與間氯苯腙對海水綠藻(Platymonas subcordiformis)光照產氫特性的影響［J］.太陽能學報，2008，29(8):943-949.

［31］冉春秋，虞星炬，金美芳，等.羰基氰化物間氯苯腙促進海洋亞心型扁藻光照產氫過程的研究［J］.化工學報，2004，55(增刊):108-112.

［32］冉春秋，張衛，虞星炬，等.解偶聯劑CCCP對萊茵衣藻光照產氫過程的調控［J］.高等學校化學學報，2006(1):62-66.

［33］ANITA G J B，SASCHA B S，WILLEM H P，et al.Impact of the antifouling agent Irgarol 1051 on marine phytoplankton species［J］.J Sea Research，2009，61:133-139.

［34］李卓娜，孟范平.2，2'，4，4'-四溴聯苯醚(BDE-47)對 4 種海洋微藻的毒性效應研究［D］.青島:中國海洋大學，2009:45-50.

［35］MALLICK N，MOHN F H.Use of chlorophyll fluoreseence in metal-atress research:a case study with the green microalga Scenedesmus［J］.Ecotozicol Environ Saf，2003，55:64-69.

［36］王帥，梁英，田傳遠.Cd2+脅迫對6株微藻生長及葉綠素熒光特性的影響［J］.海洋湖沼通報，2009(3):155-166.

［37］李濤，李愛芬，張成武，等.Fe3+對雨生紅球藻生長及熒光特性的影響［J］.武漢植物學研究，2009，27(6):643-649.

［38］陳雷，鄭青松，劉兆普，等.不同Cu2+濃度處理對斜生柵藻生長及葉綠素熒光特性的影響［J］.生態環境學報，2009，18(4):1231-1235.

［39］簡建波，鄒定輝，劉文華，等.三角褐指藻對銅離子長期暴露的生理響應［J］.海洋通報，2010，29(1):65-71.

［40］曹春暉，孫世春，王學魁，等.錳濃度對米氏凱倫藻葉綠素熒光特性及生長的影響［J］.生態學報，2010，30(19):5280-5288.

［41］王山杉，劉永定，金傳蔭，等.Zn2+濃度對固氮魚腥藻(Anabaena azotfca Ley)光能轉化特性的影響［J］.湖泊科學，2002，14(4):350-356.

［42］ IVORA N，BARRANGUET C，JONKER M，et al.Metal-induced tolerance in the freshwater microbenthic diatom Gomphonema parvulum［J］.Environ Pollut，2002，116:147-157.

［43］LU C M，CHAU C W，ZHANG J H.Acute toxicity of excess mercury on the photosynthetic perforrnance of Cyano bacterrium S.platensis-assessment by chlorophyll［J］.Fluorescence Analysis，2000，41:191-196.?