淺談乳制品抗生素殘留檢測

摘要：隨著廣大消費者食品安全意識的提高，乳制品中抗生素殘留超標的問題愈來愈引起人們關注，如何檢測乳制品中的抗生素，杜絕乳制品中抗生素的存在，消除給消費者的健康帶來了威脅，這是乳品行業事在必行的任務，這就要求相關部門提高抗生素的檢測技術，從源頭控制原料乳中抗生素殘留，保證乳制品質量。

關鍵詞：抗生素殘留 乳制品抗生素 檢測

1 抗生素的來源

中國乳制品行業起步晚，起點低，但發展迅速，特別是改革開放以來，奶類生產量以每年兩位數的增長幅度迅速增加，與此同時，畜牧業也發展迅速，眾多的抗生素在乳牛飼養中得到了廣泛的應用，其中以β-內酰胺類、氨基糖苷類、四環素類、大環內酯類等為主，造成乳制品中大量的抗生素殘留。

從目前我國乳制品中殘留的抗生素近況來看，抗生素作為一種治療用藥，目前已被廣泛用于乳牛疾病的治療，無論是通過口服還是肌肉注射，進入牛體中的抗生素都可以通過乳牛自身的代謝排出體外，而牛乳就是牛體將抗生素排出體外的一個重要途經。我國乳制品標準中有明確規定，注射過抗生素的乳牛5天內所產的牛乳不允許出售和食用，然而，有些奶戶沒有按要求處理含抗生素牛乳，為了謀取利益，向乳品企業出售含抗生素的牛乳；有些奶戶定期給健康乳牛的飼料中添加抗生素或注射抗生素藥物；有些奶戶為了防止牛乳酸敗而非法在乳中摻入抗生素，以上種種都造成了牛乳中出現抗生素的殘留。

2 抗生素殘留的危害

牛乳中殘留抗生素，對于乳品生產廠來說，會造成對原料乳質量的誤判，給企業生產酸奶或奶酪造成失敗，給企業的產品帶來潛在的消費危害，給企業造成經濟損失。對于消費者來說，長期食用含抗生素的牛乳，無疑是等于長期服用了小劑量的抗生素，對抗生素有過敏體質的人服用殘留抗生素牛乳會發生過敏反應，即使正常飲用者如果長期服用含抗生素的牛乳，可使體內致病細菌產生耐藥性，給臨床治療帶來很大麻煩。

生產無抗生素的乳制品是每個乳品生產企業必須做的一項工作，同時也是食品國家安全標準中明確規定的。嚴格控制牛乳中抗生素殘留，用必要的檢測手段對生鮮牛乳中抗生素進行檢測，是保證乳制品無抗生素的先行條件。

3 牛乳中抗生素殘留檢測

3.1 目前牛乳中抗生素殘留的檢測方法大致分為三類：微生物法、理化分析法、免疫法。

3.2 微生物檢測法

3.2.1 嗜熱鏈球菌法也稱TTC檢測法 嗜熱鏈球菌法也稱TTC檢測法，是我國鮮牛乳中抗生素殘留量檢驗標準GB/T4789.27-2008中第一法，此方法測定原理是基于抗生素對微生物的抑制作用，樣品經過80℃殺菌后，添加嗜熱鏈球菌液，培養一段時間后，嗜熱鏈球菌開始增殖，這時候加入代謝物2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC），嗜熱鏈球菌將繼續增殖，還原TTC成紅色物質，相反，如果樣品中含有高于檢測限的抑菌劑，則嗜熱鏈球菌受到抑制，因此指示劑TTC不還原，保持原色。此方法的優點是費用低、易開展，對抗生素具有廣譜性。缺點是耗時長，要求操作人員需有一定專業知識，且實驗過程中菌液的制備、水浴過程控制都要求嚴格遵守操作規程，否則易出現假陽性。

3.2.2 嗜熱脂肪芽胞桿菌抑制方法 嗜熱脂肪芽胞桿菌抑制方法，是我國鮮牛乳中抗生素殘留量檢驗標準GB/T4789.27-2008中第二方法，此方主要是培養基預先混合嗜熱脂肪芽胞桿菌，并含有pH指示劑（溴甲本分紫），加入樣品并孵育后，若樣品中不含有抗生素或抗生素的濃度低于檢測限，細菌芽胞將在培養基中生長并利用乳糖產酸，pH指示劑的紫色變為黃色。相反，如果樣品中含有高于檢測限的抗生素，則細菌芽胞不會生長，pH批示劑的顏色保持不變，仍為紫色。此法優點是目前均有商用專用試劑，如荷蘭戴爾沃檢測（Delvotest SP）法，西班牙利普斯E50法；檢驗時無需特殊設備，操作方法簡單，容易判斷，結果可靠，費用較低，對抗生素具有廣譜性；缺點是結果偶爾會出現假陽性，檢驗時間長。

以上兩種檢測方法是我國鮮牛乳抗生素檢驗標準方法，由于檢驗時間在2.5-3小時，無法滿足目前乳品企業對原料乳驗收的檢驗要求。

3.3 理化檢測方法 在牛乳中抗生素殘留檢測方面，最常用的理化檢測方法是高效液相色譜和色譜質譜聯用技術。

3.3.1 高效液相色譜（HPLC）檢測法 高效液相色譜（HPLC）檢測法，是利用抗生素分子中的基團所具有的特殊反應或性質來測定其含量，幾乎所有的化合物包括高極性/離子型待測物和大分子物質均可用HPLC進行測定。樣品經過提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟提取牛奶中抗生素分子。處理樣品和流動相經過色譜柱，樣品中的成分在色譜柱中反復分配，使各組分分離，然后由檢測器檢測各組分含量。HPLC的特點是靈敏度高、檢測限低、方法穩定，因此廣泛應用于青霉素類、四環素類等抗生素及呋喃類藥物、磺胺類藥物的殘留檢測，但檢測程序復雜，費用較高，需購買液相色譜儀等檢測設備。

3.3.2 色譜質譜聯用技術 色譜質譜聯用技術，是現代獸藥殘留分析發展特點，聯用技術實現了高效層析分離和檢測聯機，可用微電腦控制層析條件、程序并且可以進行數據處理，其特異性、靈敏度和重復性均較好，并可一次同時完成同一樣本中多種藥物及其代謝物檢測。對于分析牛奶中青霉素類抗生素，質譜作為一種專一檢測器已獲得廣泛應用。常見的聯用技術有薄層色譜-質譜（TLC-MS）、氣相色譜一質譜（GC-MS）、液相色譜-質譜（LC-MS）、超臨界流體色譜-質譜（SFC-MS）等。特點是能方便地對ng級的獸藥殘留組分進行檢測與結構確定，但檢測程序復雜，費用較高，需要昂貴的儀器設備，適合于質量檢驗部門的監督檢驗和科研機構的研究檢驗。

3.4 免疫分析法 以免疫分析方法為基礎發展而來的免疫受體方法、酶聯免疫方法和快速檢測試劑條方法，以快速、靈敏、穩定、高效，在牛乳抗生素殘留檢測中得到了廣泛的應用。

3.4.1 酶聯免疫法 酶聯免疫法（ELISA）對牛乳抗生素殘留檢驗，是基于抗原抗體反應的特異性和等比例性，使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。當抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體即保留其免疫活性，又保留酶活性。在測定時，樣品和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面抗或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開，最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變為有色產物，產物的量與樣品中受檢物質量直接相關，故可根據顏色反應的深淺定性或定量分析。目前酶聯免疫測定法（ELISA）在抗生素殘留檢測得到了廣泛的應用，結果重現性高，整個檢測過程簡單方便；但需購置專用儀器和試劑，成本較高，時間較長。

3.4.2 快速檢測試劑條 抗生素檢測試劑條方法，是目前企業檢測牛奶中抗生素殘留使用比較多一種，其原理為試劑條上的金標為微生物受體-金標復合物，受體與配體之間以特異性的高親和力結合，而受體與非配體之間不結合的原理，將待檢測藥物殘留作為配體，篩選該配體高特異性的受體，通過樣品中待測物質與配體競爭性結合受體表面結合點，以檢測樣品中的藥物殘留，例如美國charm公司生產的charm ROS抗生素檢測條，可以在8分鐘內定性檢驗出牛奶中抗生素殘留。快速檢測試劑條，具有高特異性、高靈敏雅、穩定性強、抗干擾能力強，檢測時間短，出結果速度快等特點，適用于樣品的初篩。在操作上，無需任何專業的技術，操作簡單，沒有檢測環境的需求，不管是奶農還是奶站工作人員，還是專業的檢測人員都可以方便使用，抗生素檢測限均達到國家標準中牛奶抗生素檢測限要求，但檢測只能是對牛乳中抗生素定性檢驗，不能定量檢驗。

4 牛乳中抗生素檢測途經

綜上所述，奶源的安全則是乳品企業的命脈，要使生鮮牛乳在沒有進入牛奶加工廠前就能檢測出抗生素殘留，需要快速，操作簡單，而且價格低廉的方法。傳統的抗生素檢測方法不少，有的操作煩瑣，有的實驗條件要求高，有的檢驗時間太長。近幾年，國內外免疫檢測技術發展迅速，應用廣泛，酶聯免疫試劑盒，免疫層析檢測技術，目已成為中國快速牛乳抗生素殘留診斷試劑產業服務商的第一品牌。今后，為了保證乳品企業與守法奶戶的利益，保證奶源的質量安全，保證消費者的利益，還需要有關科研人員認真進行抗生素檢驗方法篩選工作，努力研發一些簡便、快速、經濟、實用的牛乳抗生素殘留分析技術和方法，以提高我國乳制品抗生素的檢測水平。

參考文獻：

[1]馬雙青.消毒乳中抗生素殘留的調查.中國乳牛，2001.6：47-48.

[2]王慶忠.乳品中抗生素的方法.食品工業科技.2003.24（11）：79-82.