核黃素磷酸鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的研究

摘要 目的：考察核黃素磷酸鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。方法：按《中國藥典》2005年版二部，制定本品細(xì)菌內(nèi)毒素限值，并研究核黃素磷酸鈉注射液對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查試驗的干擾情況，以確定本品是否適用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。結(jié)論：本品可采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，并建立了本品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞 核黃素磷酸鈉注射液 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法 干擾試驗

中圖分類號：R927 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

核黃素磷酸鈉注射液是維生素類藥，用于口角炎、唇炎、舌炎、眼結(jié)膜炎及陰囊炎等疾病的治療。其療效確切，副作用少。而《中國藥典》2005年版二部收載的該品種此項檢查未列入標(biāo)準(zhǔn)中。

1 實驗材料

1.1 試藥

核黃素磷酸鈉注射液，規(guī)格：2ml：10mg，批號：20050808、20050809、20050810，南京新百藥業(yè)有限公司。

1.2 儀器

ZH- 2型自動漩渦混合器，天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠生產(chǎn)；電子恒溫水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司生產(chǎn)，200 l移液器，1000 l移液器，無熱原吸頭，1.5€？5cm長試管，鑷子等（均180℃干烤3小時）。

2 方法和結(jié)果

2.1 供試品內(nèi)毒素限值（L）的確定

根據(jù)《中國藥典》2005年版二部附錄ⅪⅩ F細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則，限值L=K/M， K為按規(guī)定的給藥途徑，人用每公斤體重每小時最大可接受的內(nèi)毒素劑量，非腸道給藥的注射液的K=5EU/（kg·h），M為人用每公斤體重每小時最大劑量，參照核黃素磷酸鈉注射液使用說明書單次最大使用劑量為20ml，即100mg，所以M為0.333ml·kg-1·h-1，計算細(xì)菌內(nèi)毒素限值L=5.0/0.333=15EU·ml-1。

2.2 供試品干擾預(yù)試驗

（1）計算供試品的最大有效稀釋（MVD）：根據(jù)公式MVD =L/ = 60，將樣品稀釋60倍作為供試品溶液，此時對應(yīng)的核黃素的濃度為0.083。計算當(dāng) = 0.25EU/ml時相應(yīng)的MVD值如表1：

將上述稀釋液記為NPC系列，同時在上述稀釋液中添加標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素溶液，使每一濃度試驗溶液中含有2 濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素，記此系列濃度為PPC。

（2）加樣及反應(yīng)：NPC系列：各取批號050315和批號050717的 TAL10支，各加0.1ml BET水溶解，再各加上述稀釋好的供試品0.1ml，每一供試品濃度做兩反應(yīng)管。

PPC系列：各取批號050315和批號051717的TAL10支，各加0.1ml BET水溶解，再各加0.1ml用先前稀釋好的2 濃度CSE ，每一供試品濃度重復(fù)兩反應(yīng)管。其中NPC出現(xiàn)陽性或PPC出現(xiàn)陰性則表示有干擾影響。結(jié)果見表2。

試驗結(jié)果表明，本品濃度在0.167 mg/ml以下時對兩個廠家鱟試劑均無抑制作用。

2.3 干擾驗證實驗

用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水以及濃度為0.083mg/ml的樣品稀釋液（取本品，加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋至0.083mg/ml，供用），采用兩個廠家的TAL進(jìn)行干擾試驗，同時作樣品陽性對照以及陰性對照，結(jié)果見表3。

試驗結(jié)果表明，Es在0.5 ～2.0 之間（包括0.5 和2.0 ），且Et在0.5Es～2.0Es之間（包括0.5Es和2.0Es），根據(jù)《中國藥典》2005年版二部附錄XI E中干擾試驗的結(jié)果判斷，故認(rèn)為濃度為0.083mg/ml的樣品稀釋液無干擾作用。

3 供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

取3批供試品，按《中國藥典》2005年版二部附錄Ⅺ E細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。結(jié)果見表4，三批供試品內(nèi)毒素含量均小于15 EU/ml，符合擬定的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

4 討論

本實驗采用兩個廠家的鱟試劑，研究了3批核黃素磷酸鈉注射液對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的干擾情況，結(jié)果表明，供試品在0.167mg/ml濃度時對試驗無干擾作用，本品可以采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法控制其質(zhì)量。

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